NY/T 1970-2010
基本信息
标准号： NY/T 1970-2010
中文名称：饲料中伏马毒素的测定
标准类别：农业行业标准(NY)
标准状态：现行
出版语种：简体中文
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NY/T 1970-2010 饲料中伏马毒素的测定
NY/T1970-2010
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标准内容
ICS65.120
中华人民共和国农业行业标准
NY/T1970-2010
饲料中伏马毒素的测定
Determination of fumonsins in feeds2010-12-23 发布
2011-02-01实施
中华人民共和国农业部
NY/T1970—20J0
本标准遵照/T1.12009给的规则起草。本标准包括个方法：液相色谱串联质谱法和液柯色谱法：中，液相色谱串联质谱法为仲裁法，本标灌山中华人民共和国获业部商牧业司提山本标准由全国饲料工业标推化技术委员会（SAC/TC:7S）H口。本标雅起节单位：农业部农产品质量安全监肾检验测试中心（宁波）本标准主要起草人：灵银良、皇市伟国.杨、孙亚米、下立君、赵健、朱男、陈国、吕燕。I
1范围
饲料中伏马毒素的测定
NY/T 1970--2010
小标准规定了饲料中优素B和伏马毒素巧含邑的液相色谱中联质谱测定方法和液相色谱测定方法。
本标准适用丁植物源性饲料原料、精料补充料、配合何料和浓缩饲料中伏马毒蒸13，和伏马毒素含量的测定。
本标准的方法检出限和定量限：液相色谱申联质谱法的检出限为0.01mg/kg，定量限为0.051g/kg；液相色谱法的检山限为3.0]mg/kg定量限为0.05mg/kg.2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仪注口期的版本适用「本文件。凡足不注口期的引用义件，其最新版本（包括所有的修改单)适用丁本文件。G13/T6682分析实验家用水规格和试验方法GR/T11699.1饲料采样
GB/T20195动物饲料试样的制备
3试样制备
按GB/T1/699.1抑取有代表性的料样品，按GB/T20195用μ分法缩减至500g，粉碎后过0.45I山n孔径的分析筛，混匀后装入密闭容器4液相色谱串联质谱法【仲裁法
4.1原理
成样中伏乃毒素B和伏马萨索B，用甲醇溶液提取，提取液经强阴离广固柑举取小柱净化后，用液相色谱一中联质谱仪测定，采用色谱保留时间和质谱碎片离丰度比定性，基质校准外标法定量：4.2试剂和材料
除非另有说明：在分祈中仅使用确认为分析纯的试剂和符合（B/T6682规定的一级水。4.2.1中撑：色谱纯。
4.2.2印酸：色谱纯。
4.2.3乙度：优级纯。
4.2.4氢氯化钢游液(0.2mol/L)：准确称取4g氢氧化钠了烧杯中，适量水溶解后.移入0.5L容量瓶中，加水定容至刻度
4.2.5敲酸溶液（0.2mol/L)：准确移取18mL热酸丁1L容量瓶中.加水定容至划度，泥后备用4.2.6乙酸中醇(1%)：准确移取10mL乙酸于1L穿量瓶中，加甲醇定穿至刻度，滤匀后备用4.2.7非酸中醇溶羧（0.1%）：雅确移取1mI.甲暖于1容量瓶中，用中醇定容至刻度，混勺后备用。4.2.8甲酸溶液(0.1)：准硫移取1tnI.中酸于11穿量瓶中,用水定容至刻度，准均后备。4.2.9H醇溶液（75%）：取甲醇750mL加水250m混匀片备用。4.2.10优毒素纯度95.0%。
伏马毒素B，纯度97.0%。
NY/T 1970—2010
4.2.12快马毒素标准储备液：分别谁确称取适量优马索素出和伏马藓素2标准帖，用甲障溶液（4.2.9落解并定容10mL.配制成200mg/T的标准储备液，13%冰箱巾架存，有效期6个月。4.2.13混含标准储备液：取伏马毒素3.和优马毒素B.标准佛爷液（4.2.12）以11比例馄合，得滤合标准储备液，液度为100mg/1.，一18℃冰箱中保存.有效期6个月。4.2.14混合标准中间液：准确移取10TL.混合标准储备液（1.2.13)于_00IIL容景瓶中，用甲醇溶液（4.2.9)定容至刻度，浓度为1011%/L，一18%冰箱巾保存，有效期3个月。4.2.15强阴离子交换固柯苯取柱：500mg.3mL.使川前依次用5ml.中醇，aml.甲醇溶液（4.2.9）活化。
4.2.16空凹试料：含伏马毒素B和伏毒家B。均小于0.0umg/kg的植物源性饲料原料：含优马毒素3利伏乌毒素均小」0.25m/kg的猜料补充料、配合饲料和浓缩饲料：4.3仪器和设备
4.3.1液相色语串联质谱仪：配电喷离子源：4.3.2离心机：最大转速5000r/min或以上。4.3.3分析天平：感量0.01rng：4.3.4人平：感量0.01
4.3.5超声波清洗器，
4.3.6氮吹仪。
4.3.7相举取置。
4.3.8涡旋泥合器。
4.3.9 计,
4.3.10匀质器.
4.4分析步骤
4.4.1提取
称取2g试样（确到0.01g）50mT.离心管中，加人10mL中醇溶液（1.2.9），涡旋1min，然后超市提取5ni，以5000r/min的速度离心2min.移取上清液后同样步骤提取一次：个并上消液，用氢氧化钠溶液(4.2.2)或盐峻济液（4.2.5)调节n[1至5.8~6.5,待净化.4.4.2净化
准确移取提取液（4./.1)2ml.至固相举取小柱（2.2.151l。依饮用3mL甲醇溶液（4.2.9）、3mL甲醇淋洗小柱，抽至近十后川10mL乙酸甲醇（4.2.6）洗脱。整个固相萃取过程流速控制在1ml/min2xL/min。洗脱液于50℃下用微气吹干，线留物用1rnl下醉液（4.2.0）溶解，划0.22um滤膜后进行被柜色谱串读质谱分析。4.4.3基质校准标准样品的制备
有空白试料时：分别准确移取伏马声素泥合标准中问液（1.2.14)适量，植物源性饲料原料测定时配谢浓度为0.015mg/1..0.05mg/L、0.10mg/1,0.20mg/L、0.50mg/L和2.0mg/L.其他料测定吋配制浓度为0.2g/L、0.5mg/1.、1.0mg/L、2.Qg/L,5.0m/1.和10.0g/L的系列标准液;取空白试料，按4.1.1-~4.4.2步骤处理，在洗脱液中分别用人各浓度标洗液1.0ml，氮气吹干后用中醇济液（1.2.9)溶解上机测定，以定量离了对峰而积为纵坐标，标准溶液浓度为横坐标，绘制基质校准标准曲线。无法获得空白试料时，直接用测定样品经4.4.1~4.4.2步骤处理后洗脱液中入1.0ml.5.01m1g/1的标准溶液作为基质准标准样品吹干后用甲醇溶液（1.2.9)熔解上机测定：4.4.4测定
4.4.4.1色谱参考条件
色谱社：柱，150mm×2.1m，3.5m或相当者。a
流动相：A：中腰于醇辫液（4.2.7)：B.中酸溶液(4.2.8)。h)bzxZ.net
梯度洗脱：流脱程序见表1。
让样量：20。
表1梯度洗脱程序
4. 4. 4.2
质谱参考条件
电离为式，电喷雾止商子方式，a)
检测方式：多反成监测。
NY/T 1970—2010
脱溶剂气、销孔气避撞气均为高纯氮气及其他合适气体，使用前应调节各气体流量以使质谱e
灵敏度达到检测要求。
毛细管电压、维孔电压、擅能等电压优化至最件灵敏度。c）定离子对、定景离子对、保留时间、维孔电和碰撞能量参考值见表2。表2伏马毒素B，和快马毒索B定性、定量离子对、保留时间、锥孔电压和碰撞能量参考值保留时间
中文名称
优马责素R
4.4.4.3定性测定
定性离子对
722.134. 4
722.4-352.4
706.4318:4
706.4>336.4
亲堂离子对
722.42334.
706.4-336.4
锥孔电乐
撞能显
在相同试验条件下，样品中待测物质的保留时间与标推溶液中待测物质对应的保留时间偏差在二2.5%之内，且样品中各组分的两个子离子相对丰度与浓度接近的标滩溶液的对丰度一致，偏差不超过表3规定的范围，则可判定为样品中存在对励的待测物。表3定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差相刘离子度，
允许的最大偏差，次
4.4.4.4定量测定
=-20-~59
-10~-20
在仪器最佳工作条件下，混合标准工作浚与试样交替进样，采用基质校准标准溶汝校正，外标法定量。当采用空户试料作为基质时，样品溶液中待测物的响成值均应在仪器测定的线性范固内。当样品的上机液浓度超过线性范围时，需根据测定浓度稀释后进行垂新测定。上述色谱和质谱条件下，伏马毒素B：和优马毒素B。标准溶液的多反应监测色谱图见附录A4.4.5平行实验
按以上步骤媒，对同一试样进行行试验测定：4.4.6空白实验
NY/T1970—2010
除不加试样外，均按上述测定步骤进行。4. 5 结果计算
样中优伏马毒素3:和伏马毒素L的量X：，以质量分数表示，单位为毫克每千克（11g/kg），按式（1）分别计算：
X -AXxXVxV
A一一试样溶液中伏马毒素B:和伏马声素B32的峰而积，八，一一标准作液中伏马毒素利伏马毒素B：的释面积：（一一标准作液中伏马素利伏马毒素B.的浓度，单位灯宅克每升（m/L)：V定容体积,单位为亳升(InL)：
期——样品的质量，单位为克(g)；V——于净化的提取液体积.单位为毫升(1niL)：V,—提取液体积,单位为毫升（mL)。平行测定结果用算术平均值农示。计算结果保留三位有效数字。
4.6精密度
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均使的15%！5液相色谱法
5.1原理
试样中伏门毒案巧和伏马南素B用中醇辫液提取，提取液经强阴离子固柏萃取小杜净化后，经衍生化，用反相液相色谱分离、荧光检测器检测、外标法定量。5.2试剂和材料
除非另有说明.在分析中仅使川确认为分析纯的试剂和符合GB/T6682规定的级水。5.2.1乙晴，色谱纯。
5.2.2巯基乙醇：优级纯。
5.2.3四酸钠
5.2.4磷酸氢钠。
5.2.5邻苯二中酬：优级纯，
5.2.6乙溶液（50%），取250ml.加水250ml，混匀后备用：5.2.7四硼酸钠溶液（U.1mal/1)：称3.8g十水个川研酸钠于100rmL穿量瓶中.加水溶解后定容。5.2.8磷酸二氛钢溶液（0.11moL/L)：称15.6g一水合磷峻二氢钠丁11.容量瓶中，加水溶解后定容．
5.2.9衍生剂：称收40mg邻米二见，溶丁1mL中醇，用=m四硼酸钠溶液（a.2.7)稀释：加人50疏基乙醇，混匀后备用，4℃下避光可贮疗7d.5.2.10流动相：取770mL甲醇加入230mL磷假二氢钠济被（5.2.8)，混匀后调节pH至3.35.2.11混合标准工作液：取适量馄合标准磷备羧（4.2.13)于5mL容量瓶中，用乙腈济液（5.2.6)定穿，得伏7毒索B和伏马毒素B，浓度为C.01mg/L.0.05m/1,0.10mg/1.0.50mg/11.0mg/L和5.0mg/的滤合标准T作液，1℃下可贴存7d5.2.12其他同液相色谱串联质谱法巾4.25.3仪器和设备
5.3.1液析色谱仪：配荧光检测器。5.3.2共他同液相色谐串联质谱法.3。5.4分析步骤
5.4.1提取
5.4.2净化
NY/T1970—-2010
准确移取5.4.1提取液2mL全固相萃小柱（4.2.15)。依次用3m1/H醇落液（1.2.9）、3mL中醇淋洗小什，抽至近下后10mL乙酸甲醇（4.2.G）洗脱。整个固相举取过程流速控制在1ml/min~2ml./min。洗脱液于50%下用氮气吹T，残留物用200uL2腈溶液（5.2.6)落解5.4.3衍生化
取样品处理液和标准溶液各100，各加100uI.衍生剂（5.2.9），混匀，过0.13um滤膜，衍生化后3min内进行液相色谱分析。
5.4.4测定
5.4.4.1JIPIC参考条件
a）危谱杆：8柱，100 mm×2、1mm,1.7um或相当者。L）流动相：见5.2.10
c）流速,0.3mL/min。
d）柱温:30℃：
e）进样量：10mL，
D）激发波长：335mm。
g）发射波长：440nm。
5.4.4.2标准曲线的绘制
取5.2.11中的混合标准L作液按5.4.3步骤进行衍生，按浓度由低到高进样检测，以峰面积-浓度作图，得到标摊曲线回归力程。在上述色谱条件下，优马毒素B，和伏马声索B，的保留时间分别为3.7min和9.2min左行.标准游液色谱图参见附录B。5.4.4.3定量测定
样品溶液中得测物响应值均应作仪器测定的线性范围内，当样品的上机液浓度超过线性范用时，需根据测定液度，稀译5.4.2中的晟终样品处理济液.然后更新衍牛后测定：5.4.5苹行实验
接以上步骤，对同一试样进行平行试验测定。5.4.6空白实验
除不加试样外，均接上述测定步骤进行。5.5结果计算
试样中伏马毒素E，和伏马毒素的含量X，以质量分数表示.单位为毫克每下克（mg/k），按式（2)分别计算：
X:AXGXVXY
试样溶液中伏马毒素B和优马毒素B的锋面积；标准工作液中伏马寿素乃和伏马毒素。峰询积：C,——标准工作液中伏马毒素B和伏马截素B。浓度，单位为旁克付升（mg/T.)定答体积，0.4mL；
样品的质量，单位为克（g）：
NY/F1970—2010
V一用于净化的提取液体积，单位为毫升（mI);Ve-提取液休积，单位为毫升(ml.)平行测定结果用算平均值表示。计算结果保留三位有效数字。
6精密度
衣重复性条件下获得的两次独测定结票的绝对差值不得超过算术平均值的15100
附录A
【资料性附录】
伏马毒素B，和伏马毒素B2多反应监测(MRM)色谱图0.30
Yrrrrortrr
NX/T 1970—2010
MRM of 4 Chanels ES-1
722.4>152.4
MKM nf 4 Chamnele Fs+
722.4>334.4
MRM of 4 Chaunels 125+
6.4>336.4
MRM uf4 Chammely ES+
706,4>318.4
流离中保留时间（rmin)点.3G和9.90分别为忧马等素和伏马案13。图A.1伏马毒素标准溶液（0.05mg/L)MRM色谱图Tinme
NY/T 1970—2010
附录B
(资料性附录)
伏马毒素B3.和伏马素B2液相色谱荧光检测色谱图F
注FB:和B分别为与禁和伏马出素B，9.00
伏马毒素标准溶液（0.50mg/L）液相色谱荧光检测色谱图图B.1
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中华人民共和国农业行业标准
NY/T1970-2010
饲料中伏马毒素的测定
Determination of fumonsins in feeds2010-12-23 发布
2011-02-01实施
中华人民共和国农业部
NY/T1970—20J0
本标准遵照/T1.12009给的规则起草。本标准包括个方法：液相色谱串联质谱法和液柯色谱法：中，液相色谱串联质谱法为仲裁法，本标灌山中华人民共和国获业部商牧业司提山本标准由全国饲料工业标推化技术委员会（SAC/TC:7S）H口。本标雅起节单位：农业部农产品质量安全监肾检验测试中心（宁波）本标准主要起草人：灵银良、皇市伟国.杨、孙亚米、下立君、赵健、朱男、陈国、吕燕。I
1范围
饲料中伏马毒素的测定
NY/T 1970--2010
小标准规定了饲料中优素B和伏马毒素巧含邑的液相色谱中联质谱测定方法和液相色谱测定方法。
本标准适用丁植物源性饲料原料、精料补充料、配合何料和浓缩饲料中伏马毒蒸13，和伏马毒素含量的测定。
本标准的方法检出限和定量限：液相色谱申联质谱法的检出限为0.01mg/kg，定量限为0.051g/kg；液相色谱法的检山限为3.0]mg/kg定量限为0.05mg/kg.2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仪注口期的版本适用「本文件。凡足不注口期的引用义件，其最新版本（包括所有的修改单)适用丁本文件。G13/T6682分析实验家用水规格和试验方法GR/T11699.1饲料采样
GB/T20195动物饲料试样的制备
3试样制备
按GB/T1/699.1抑取有代表性的料样品，按GB/T20195用μ分法缩减至500g，粉碎后过0.45I山n孔径的分析筛，混匀后装入密闭容器4液相色谱串联质谱法【仲裁法
4.1原理
成样中伏乃毒素B和伏马萨索B，用甲醇溶液提取，提取液经强阴离广固柑举取小柱净化后，用液相色谱一中联质谱仪测定，采用色谱保留时间和质谱碎片离丰度比定性，基质校准外标法定量：4.2试剂和材料
除非另有说明：在分祈中仅使用确认为分析纯的试剂和符合（B/T6682规定的一级水。4.2.1中撑：色谱纯。
4.2.2印酸：色谱纯。
4.2.3乙度：优级纯。
4.2.4氢氯化钢游液(0.2mol/L)：准确称取4g氢氧化钠了烧杯中，适量水溶解后.移入0.5L容量瓶中，加水定容至刻度
4.2.5敲酸溶液（0.2mol/L)：准确移取18mL热酸丁1L容量瓶中.加水定容至划度，泥后备用4.2.6乙酸中醇(1%)：准确移取10mL乙酸于1L穿量瓶中，加甲醇定穿至刻度，滤匀后备用4.2.7非酸中醇溶羧（0.1%）：雅确移取1mI.甲暖于1容量瓶中，用中醇定容至刻度，混勺后备用。4.2.8甲酸溶液(0.1)：准硫移取1tnI.中酸于11穿量瓶中,用水定容至刻度，准均后备。4.2.9H醇溶液（75%）：取甲醇750mL加水250m混匀片备用。4.2.10优毒素纯度95.0%。
伏马毒素B，纯度97.0%。
NY/T 1970—2010
4.2.12快马毒素标准储备液：分别谁确称取适量优马索素出和伏马藓素2标准帖，用甲障溶液（4.2.9落解并定容10mL.配制成200mg/T的标准储备液，13%冰箱巾架存，有效期6个月。4.2.13混含标准储备液：取伏马毒素3.和优马毒素B.标准佛爷液（4.2.12）以11比例馄合，得滤合标准储备液，液度为100mg/1.，一18℃冰箱中保存.有效期6个月。4.2.14混合标准中间液：准确移取10TL.混合标准储备液（1.2.13)于_00IIL容景瓶中，用甲醇溶液（4.2.9)定容至刻度，浓度为1011%/L，一18%冰箱巾保存，有效期3个月。4.2.15强阴离子交换固柯苯取柱：500mg.3mL.使川前依次用5ml.中醇，aml.甲醇溶液（4.2.9）活化。
4.2.16空凹试料：含伏马毒素B和伏毒家B。均小于0.0umg/kg的植物源性饲料原料：含优马毒素3利伏乌毒素均小」0.25m/kg的猜料补充料、配合饲料和浓缩饲料：4.3仪器和设备
4.3.1液相色语串联质谱仪：配电喷离子源：4.3.2离心机：最大转速5000r/min或以上。4.3.3分析天平：感量0.01rng：4.3.4人平：感量0.01
4.3.5超声波清洗器，
4.3.6氮吹仪。
4.3.7相举取置。
4.3.8涡旋泥合器。
4.3.9 计,
4.3.10匀质器.
4.4分析步骤
4.4.1提取
称取2g试样（确到0.01g）50mT.离心管中，加人10mL中醇溶液（1.2.9），涡旋1min，然后超市提取5ni，以5000r/min的速度离心2min.移取上清液后同样步骤提取一次：个并上消液，用氢氧化钠溶液(4.2.2)或盐峻济液（4.2.5)调节n[1至5.8~6.5,待净化.4.4.2净化
准确移取提取液（4./.1)2ml.至固相举取小柱（2.2.151l。依饮用3mL甲醇溶液（4.2.9）、3mL甲醇淋洗小柱，抽至近十后川10mL乙酸甲醇（4.2.6）洗脱。整个固相萃取过程流速控制在1ml/min2xL/min。洗脱液于50℃下用微气吹干，线留物用1rnl下醉液（4.2.0）溶解，划0.22um滤膜后进行被柜色谱串读质谱分析。4.4.3基质校准标准样品的制备
有空白试料时：分别准确移取伏马声素泥合标准中问液（1.2.14)适量，植物源性饲料原料测定时配谢浓度为0.015mg/1..0.05mg/L、0.10mg/1,0.20mg/L、0.50mg/L和2.0mg/L.其他料测定吋配制浓度为0.2g/L、0.5mg/1.、1.0mg/L、2.Qg/L,5.0m/1.和10.0g/L的系列标准液;取空白试料，按4.1.1-~4.4.2步骤处理，在洗脱液中分别用人各浓度标洗液1.0ml，氮气吹干后用中醇济液（1.2.9)溶解上机测定，以定量离了对峰而积为纵坐标，标准溶液浓度为横坐标，绘制基质校准标准曲线。无法获得空白试料时，直接用测定样品经4.4.1~4.4.2步骤处理后洗脱液中入1.0ml.5.01m1g/1的标准溶液作为基质准标准样品吹干后用甲醇溶液（1.2.9)熔解上机测定：4.4.4测定
4.4.4.1色谱参考条件
色谱社：柱，150mm×2.1m，3.5m或相当者。a
流动相：A：中腰于醇辫液（4.2.7)：B.中酸溶液(4.2.8)。h)bzxZ.net
梯度洗脱：流脱程序见表1。
让样量：20。
表1梯度洗脱程序
4. 4. 4.2
质谱参考条件
电离为式，电喷雾止商子方式，a)
检测方式：多反成监测。
NY/T 1970—2010
脱溶剂气、销孔气避撞气均为高纯氮气及其他合适气体，使用前应调节各气体流量以使质谱e
灵敏度达到检测要求。
毛细管电压、维孔电压、擅能等电压优化至最件灵敏度。c）定离子对、定景离子对、保留时间、维孔电和碰撞能量参考值见表2。表2伏马毒素B，和快马毒索B定性、定量离子对、保留时间、锥孔电压和碰撞能量参考值保留时间
中文名称
优马责素R
4.4.4.3定性测定
定性离子对
722.134. 4
722.4-352.4
706.4318:4
706.4>336.4
亲堂离子对
722.42334.
706.4-336.4
锥孔电乐
撞能显
在相同试验条件下，样品中待测物质的保留时间与标推溶液中待测物质对应的保留时间偏差在二2.5%之内，且样品中各组分的两个子离子相对丰度与浓度接近的标滩溶液的对丰度一致，偏差不超过表3规定的范围，则可判定为样品中存在对励的待测物。表3定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差相刘离子度，
允许的最大偏差，次
4.4.4.4定量测定
=-20-~59
-10~-20
在仪器最佳工作条件下，混合标准工作浚与试样交替进样，采用基质校准标准溶汝校正，外标法定量。当采用空户试料作为基质时，样品溶液中待测物的响成值均应在仪器测定的线性范固内。当样品的上机液浓度超过线性范围时，需根据测定浓度稀释后进行垂新测定。上述色谱和质谱条件下，伏马毒素B：和优马毒素B。标准溶液的多反应监测色谱图见附录A4.4.5平行实验
按以上步骤媒，对同一试样进行行试验测定：4.4.6空白实验
NY/T1970—2010
除不加试样外，均按上述测定步骤进行。4. 5 结果计算
样中优伏马毒素3:和伏马毒素L的量X：，以质量分数表示，单位为毫克每千克（11g/kg），按式（1）分别计算：
X -AXxXVxV
A一一试样溶液中伏马毒素B:和伏马声素B32的峰而积，八，一一标准作液中伏马毒素利伏马毒素B：的释面积：（一一标准作液中伏马素利伏马毒素B.的浓度，单位灯宅克每升（m/L)：V定容体积,单位为亳升(InL)：
期——样品的质量，单位为克(g)；V——于净化的提取液体积.单位为毫升(1niL)：V,—提取液体积,单位为毫升（mL)。平行测定结果用算术平均值农示。计算结果保留三位有效数字。
4.6精密度
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均使的15%！5液相色谱法
5.1原理
试样中伏门毒案巧和伏马南素B用中醇辫液提取，提取液经强阴离子固柏萃取小杜净化后，经衍生化，用反相液相色谱分离、荧光检测器检测、外标法定量。5.2试剂和材料
除非另有说明.在分析中仅使川确认为分析纯的试剂和符合GB/T6682规定的级水。5.2.1乙晴，色谱纯。
5.2.2巯基乙醇：优级纯。
5.2.3四酸钠
5.2.4磷酸氢钠。
5.2.5邻苯二中酬：优级纯，
5.2.6乙溶液（50%），取250ml.加水250ml，混匀后备用：5.2.7四硼酸钠溶液（U.1mal/1)：称3.8g十水个川研酸钠于100rmL穿量瓶中.加水溶解后定容。5.2.8磷酸二氛钢溶液（0.11moL/L)：称15.6g一水合磷峻二氢钠丁11.容量瓶中，加水溶解后定容．
5.2.9衍生剂：称收40mg邻米二见，溶丁1mL中醇，用=m四硼酸钠溶液（a.2.7)稀释：加人50疏基乙醇，混匀后备用，4℃下避光可贮疗7d.5.2.10流动相：取770mL甲醇加入230mL磷假二氢钠济被（5.2.8)，混匀后调节pH至3.35.2.11混合标准工作液：取适量馄合标准磷备羧（4.2.13)于5mL容量瓶中，用乙腈济液（5.2.6)定穿，得伏7毒索B和伏马毒素B，浓度为C.01mg/L.0.05m/1,0.10mg/1.0.50mg/11.0mg/L和5.0mg/的滤合标准T作液，1℃下可贴存7d5.2.12其他同液相色谱串联质谱法巾4.25.3仪器和设备
5.3.1液析色谱仪：配荧光检测器。5.3.2共他同液相色谐串联质谱法.3。5.4分析步骤
5.4.1提取
5.4.2净化
NY/T1970—-2010
准确移取5.4.1提取液2mL全固相萃小柱（4.2.15)。依次用3m1/H醇落液（1.2.9）、3mL中醇淋洗小什，抽至近下后10mL乙酸甲醇（4.2.G）洗脱。整个固相举取过程流速控制在1ml/min~2ml./min。洗脱液于50%下用氮气吹T，残留物用200uL2腈溶液（5.2.6)落解5.4.3衍生化
取样品处理液和标准溶液各100，各加100uI.衍生剂（5.2.9），混匀，过0.13um滤膜，衍生化后3min内进行液相色谱分析。
5.4.4测定
5.4.4.1JIPIC参考条件
a）危谱杆：8柱，100 mm×2、1mm,1.7um或相当者。L）流动相：见5.2.10
c）流速,0.3mL/min。
d）柱温:30℃：
e）进样量：10mL，
D）激发波长：335mm。
g）发射波长：440nm。
5.4.4.2标准曲线的绘制
取5.2.11中的混合标准L作液按5.4.3步骤进行衍生，按浓度由低到高进样检测，以峰面积-浓度作图，得到标摊曲线回归力程。在上述色谱条件下，优马毒素B，和伏马声索B，的保留时间分别为3.7min和9.2min左行.标准游液色谱图参见附录B。5.4.4.3定量测定
样品溶液中得测物响应值均应作仪器测定的线性范围内，当样品的上机液浓度超过线性范用时，需根据测定液度，稀译5.4.2中的晟终样品处理济液.然后更新衍牛后测定：5.4.5苹行实验
接以上步骤，对同一试样进行平行试验测定。5.4.6空白实验
除不加试样外，均接上述测定步骤进行。5.5结果计算
试样中伏马毒素E，和伏马毒素的含量X，以质量分数表示.单位为毫克每下克（mg/k），按式（2)分别计算：
X:AXGXVXY
试样溶液中伏马毒素B和优马毒素B的锋面积；标准工作液中伏马寿素乃和伏马毒素。峰询积：C,——标准工作液中伏马毒素B和伏马截素B。浓度，单位为旁克付升（mg/T.)定答体积，0.4mL；
样品的质量，单位为克（g）：
NY/F1970—2010
V一用于净化的提取液体积，单位为毫升（mI);Ve-提取液休积，单位为毫升(ml.)平行测定结果用算平均值表示。计算结果保留三位有效数字。
6精密度
衣重复性条件下获得的两次独测定结票的绝对差值不得超过算术平均值的15100
附录A
【资料性附录】
伏马毒素B，和伏马毒素B2多反应监测(MRM)色谱图0.30
Yrrrrortrr
NX/T 1970—2010
MRM of 4 Chanels ES-1
722.4>152.4
MKM nf 4 Chamnele Fs+
722.4>334.4
MRM of 4 Chaunels 125+
6.4>336.4
MRM uf4 Chammely ES+
706,4>318.4
流离中保留时间（rmin)点.3G和9.90分别为忧马等素和伏马案13。图A.1伏马毒素标准溶液（0.05mg/L)MRM色谱图Tinme
NY/T 1970—2010
附录B
(资料性附录)
伏马毒素B3.和伏马素B2液相色谱荧光检测色谱图F
注FB:和B分别为与禁和伏马出素B，9.00
伏马毒素标准溶液（0.50mg/L）液相色谱荧光检测色谱图图B.1
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