NY/T 2006-2011 谷物及其制品中β-葡聚糖含量的测定 NY/T2006-2011 标准下载解压密码：www.bzxz.net

ICS67.060
中华人民共和国农业行业标准
NY/T2006—2011
谷物及其制品中β-葡聚糖含量的测定Determination of β-glucan in cereal and its products2011-09-01发布
中华人民共和国农业部
2011-12-01实施
本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。NY/T20062011
本标准修改采用AOACOficialMethod995.16一《大麦和燕麦中的β-D-葡聚糖一改进酶法》（英文版)。
本标准修改采用时主要技术内容修改如下：-增加了规范性引用文件；
-扩大了标准的应用范围，增加了谷物种类以及谷物饮料等加工制品。本标准由中华人民共和国农业部农产品加工局提出并归口。本标准起草单位：中国农业科学院农产品加工研究所、中国农业大学、北京特品降脂燕麦开发公司、郑州轻工业学院。
本标准主要起草人：王强、周素梅、吴广枫、吕耀昌、申瑞玲、刘红芝、林伟静、路长喜。1范围
谷物及其制品中β-葡聚糖含量的测定本标准规定了谷物及其制品中β一葡聚糖含量的酶一比色测定方法。NY/T2006-2011
本标准适用于燕麦、大麦、青稞、黑麦等谷物及其加工制品（面粉、麸皮、麦片、饮料等）中β-葡聚糖含量的测定。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB5009.3食品安全国家标准食品中水分的测定GB/T5491粮食、油料检验扦样、分样法GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3原理
该法利用地衣聚糖酶（或称葡聚糖酶）和β-葡萄糖苷酶对样品中(1→3)(1→4)-β-D-葡聚糖（混联β-D-葡聚糖，或简称β-葡聚糖)的酶解作用，由地衣聚糖酶专一性地水解β-葡聚糖成寡糖，β-葡萄糖苷酶则将寡糖水解成葡萄糖；葡萄糖在葡萄糖氧化酶作用下生成葡萄糖酸和过氧化氢，过氧化氢在过氧化物酶作用下，与4-氨基安替比林氧化缩合生成红色醒类化合物。此化合物在510nm有吸收，其吸光度值与葡萄糖含量成正比。
4试剂bZxz.net
除非另有说明，在分析中仅使用经确认的分析纯试剂，实验用水应符合GB/T6682中三级水的要求。
4.150U/mL地衣聚糖酶溶液
将1mL地衣聚糖酶溶液(1000U/mL)用磷酸钠缓冲液(20mmol/L、pH6.5）稀释至20.0mL，把酶液等分成4份，每份5mL，置于聚丙烯塑料瓶中,在一20℃下冷冻保存，备用。【注：地衣聚糖酶活力单位定义为：在pH6.5、40℃条件下，每分钟从大麦β-葡聚糖(10mg/mL)中释放出相当于1umol/L葡萄糖还原糖当量所需的酶量，即为1U。】4.22U/mLβ-葡萄糖苷酶溶液
将1mLβ-葡萄糖苷酶溶液（40U/mL）用乙酸钠缓冲液（50mmol/L、pH4.0）稀释至20mL，把酶液等分成4份，每份5mL，置于聚丙烯塑料瓶中在一20℃下冷冻保存，备用。【注：β-葡萄糖苷酶活力单位定义为：在pH4.0、40℃条件下，每分钟从对硝基苯基-β-葡萄糖苷（10mmol）中释放出相当于1μumol/L对-硝基苯酚所需的酶量，即为1U。】4.3葡萄葡糖氧化酶一过氧化物酶一缓冲液混合物内含葡萄糖氧化酶(>12000U/L)、过氧化物酶(>650U/L)、4-氨基安替比林（0.4mmol /L)。注：葡萄糖氧化酶活力单位定义为：在pH5.1、35℃条件下，每分钟氧化1mmol葡萄糖所需的酶量，即为1U;过氧化物酶活力单位定义为：在pH6.0、20℃条件下，20s内使焦性没食子酸生成1.0mg红梧酚所需的酶量，即为1U缓冲液的配制：称取13.6gKHPO4、4.2gNaOH和3.0g4-羟基苯甲酸，溶于水中，调节pH7.4，定容至100mL。
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葡萄糖氧化酶一过氧化物酶一缓冲液混合物的配制：取50mL缓冲液稀释至1000mL；用该稀释缓冲液溶解葡萄糖氧化酶一过氧化物酶混合试剂，使之达到所需浓度。该混合试剂在4℃下可稳定存放2个3个月，一20aC下可稳定存放2年～3年，与葡萄糖反应所形成的颜色可稳定数小时。4.450%乙醇溶液
4.520mmol/L、pH6.5磷酸钠缓冲液称取3.12gNaH2PO4·2HzO，加900mL水溶解；调节pH6.5，定容至1000mL。该缓冲液在4℃下可存放一个月。
4.6乙酸钠缓冲液
4.6.1200mmol/L、pH4.0乙酸钠缓冲液：取7.6mL冰醋酸于900mL水中，加入4.8g三水乙酸钠，溶解；调节pH4.0，定容至1000mL。4.6.250mmol/L、pH4.0乙酸钠缓冲液：取250mL200mmol/L、pH4.0乙酸钠缓冲液稀释至1000mL。
4.71.000mg/mL葡萄糖标准贮存溶液将葡萄糖粉末（纯度大于99%）于100℃下常压干燥2h；置于干燥器中冷却,室温下密闭保存。准确称取0.1000g干燥葡萄糖，用50mmol/L、pH4.0乙酸钠缓冲液（4.6.2）溶解并定容至100mL。该标准溶液在4℃下可存放一个月。注：其中4.1、4.2.4.3涉及酶制剂均可由Megazyme混联β-D-葡聚糖测定试剂盒提供。Megazyme是爱尔兰Megazyme公司产品的商品名，给出这一信息是为了方便本标准的使用者。如果还有其他产品具有相同的效果：则可使用这些等效产品。
5仪器和设备
5.1旋风磨或粉碎机：样品粉碎后可过0.5mm或35目筛网。5.2离心机：能容纳15mm×100mm或10mm×75mm的玻璃试管，离心力1000×g5.3水浴锅：温度稳定性土0.2℃。5.4旋涡混合仪。
5.5pH计：精度0.01。
5.6分析天平：感量0.0001g
5.7干燥箱：可保持105℃土1℃。5.8分光光度计：检测波长510nm。5.9比色皿。
5.10移液器：量程10μL~100uL、20μL~200μL、1000μL～5000μL，配备一次性吸头，容量瓶：容积100mL、1000mL。
5.12具塞玻璃试管：容积15mL～20mL，可于1000×g下离心。5.13试管架：30孔或40孔，能放置15mL~20ml，具塞玻璃试管。5.14计时器（秒表）。
6试样制备
6.1待测样品
按照GB/T5491的规定取样。
粉末状样品：取50g以上，充分混勾后于广口瓶中密闭保存。颗粒或片状样品：取50g以上，使用粉碎机(5.1)粉碎，混匀后于广口瓶中密闭保存。2
液体样品：取200mL以上，混匀后于试剂瓶中密闭保存。NY/T20062011
固体样品中水分含量或液体样品中干物质含量的测定可参照GB5009.3规定的方法执行。6.2葡萄糖标准工作液
平行移取100μL葡萄糖标准贮存溶液(4.7)至3支试管中，分别添加100μL50mmol/L乙酸钠缓冲液(4.6.2)。
6.3试剂空
移取200uL50mmol/L乙酸钠缓冲液(4.6.2)至试管中。7分析步骤
在样品测定时，需同时进行葡萄糖标准工作液（3个平行）的测定，分光光度计用试剂空白调零。必要时可添加一个已知β-葡聚糖含量的对照样品以检验结果的准确性。7.1样品称取
7.1.1无糖固体样品
精确称取待测样品0.0800g~0.1000g，放入玻璃试管底部。7.1.2高含糖固体样品
精确称取适量样品至试管中，加入10mL50%乙醇溶液（4.4)，80℃预提取10min；离心（1000×g10min)，弃去上清液；将沉淀重复醇洗一次、离心（1000×g、10min)，保留沉淀，备用。7.1.3液体样品
移取待测样品1mL～5mL（精确至0.01mL），置于玻璃试管（已知重量）底部：添加3倍体积95%(v/v)乙醇溶液，于旋涡混合仪上剧烈振荡混合，室温下放置5min;离心(1000×g、10min)，弃去上清液；添加10mL50%乙醇溶液（4.4）将沉淀再次分散；离心（1000×g、10min），弃去上清液，保留沉淀，备用。
注：此步骤需称取含沉淀试管质量，减去试管质量和待测样品干物质质量，可得样品吸水量，记入样品反应总体积。7.2酶解前处理
7.2.1向待测样品试管中添加0.2mL50%乙醇溶液（4.4)，于旋涡混合仪上振荡分散；加入4.0mL磷酸钠缓冲液(4.5)，充分振荡。7.2.2将试管放入沸水浴中，保持1min;取出试管，在旋涡混合仪上剧烈振荡数秒；沸水浴中继续保持2min，振荡处理同前。
7.3酶解反应
7.3.1试管在50℃水浴中保温5min，添加0.2mL地衣聚糖酶溶液（4.1)，剧烈振荡数秒；加盖试管塞，50℃水浴继续保温60min；其间将试管取出，振荡处理3次～4次。7.3.2取出试管，向其中添加5mL200mmol/L乙酸钠缓冲液(4.6.1)，混合均匀，室温下冷却5min~10min；离心(1000×g、10min），取上清液，备用。7.3.3分别准确移取0.1mL上清液至3支试管的底部，向其中2支试管中分别添加0.1mL（β-葡萄糖苷酶溶液（4.2)：另一支试管中添加0.1mL50mmol/L乙酸钠缓冲液（4.6.2)，作为反应空白，将上述试管在50℃下保温10min。
7.4显色反应
分别移取3.0mL葡萄糖氧化酶一过氧化物酶一缓冲液混合物（4.3）至各试管（包括2个测试样、1个反应空白、3个D-葡萄糖标准工作溶液、1个试剂空白），50℃下反应20min；取出试管，冷却至室温。7.5比色
以试剂空白调零，于510nrn处测定吸光值。如果试样中β-葡聚糖的浓度大于10%，将产生比100μg葡萄糖标准工作溶液高的吸光度。此时，3
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需在步骤7.3.2之后，取适量50mmol/L乙酸缓冲液（4.6.2)稀释上清液，然后继续7.3.3以下步骤，结果计算时应把稀释因子考虑在内。8结果计算
8.1固体样品
样品湿基中β-葡聚糖的质量百分含量（%，w/w），按式（1)计算100
β-葡聚糖含量（%，湿基）=△A×F×94×106×W
式中：
样品吸光值与反应空白吸光值的差值；x0.9
吸光值转化为ug葡萄糖的转换因子，F=100ug葡萄糖/100μg葡萄糖的吸光值；体积校正因子（从9.4mL取0.1mL用于分析）；固体样品质量，单位为克(g)：
葡萄糖转化为β-葡聚糖的脱水转换因子。样品干基中B-葡聚糖的质量百分含量（%，W/w），按式(2)计算：β-葡聚糖含量（%，湿基）
β-葡聚糖含量（%，干基)=4
100-水分含量（%）
8.2液体样品
样品中（β-葡聚糖的质量体积百分含量(%，W/v)，按式(3)计算：B-葡聚糖含量（%，湿基)=A4×F×C×10×10009
式中：
C体积校正因子(由参与酶解的样品总反应体积(mL)除以用于分析的0.1mL得到)：V液体样品体积，单位为毫升(mL)。其他定义同8.1。
以上计算结果保留小数点后二位。9精密度
9.1重复性
在重复性条件下测试结果的相对标准偏差(RSD，)不超过5%9.2再现性
在再现性条件下测试结果的相对标准偏差(RSDR)不超过10%。4
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