GB/T 27855-2011 化学品 土壤微生物 碳转化试验 GB/T27855-2011 标准压缩包解压密码：www.bzxz.net
本标准规定了单一化学品对土壤微生物碳转化活性所产生的长期潜在影响的试验方法。 本标准适用于对受试物进行毒性特征评估,碳转化试验针对的是化学品对土壤微生物菌群的影响。
本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。
本标准与经济合作与发展组织(OECD)化学品测试导则217《土壤微生物　碳转化测试》(英文版)
技术性内容相同。
本标准作了以下编辑性修改:
———将原文中“INTRODUCTION”和“INITIALCONSIDERATIONS”合并作为本标准的引言;
———增加了范围;
———将原文中“DEFINITIONS”中的内容作为标准中的“术语和定义”;
———计量单位统一改为我国法定计量单位;
本标准由全国危险化学品管理标准化技术委员会(SAC/TC251)提出并归口。
本标准起草单位:湖北出入境检验检疫局、广东省微生物分析检测中心、国家环境保护部化学登记中心、中国检验检疫科学研究院。
本标准主要起草人:崔海容、郭坚、赵晖、曹渭、刘纯新、陈会明、简艳、杨顺风、叶诚。

ICS13.020
中华人民共和国国家标准
GB/T 27855-2011
化学品
土壤微生物
碳转化试验
ChemicalsSoil microorganisms--Carbon transformation test2011-12-30发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
2012-08-01实施
本标准按照GB/T1.1—2009给出的规起草。GB/T27855—2011
本标推与经济合作与发展组织（OECD)化学品测试导则217&土壤微生物碳转化测试3(英文版)技术性内容相同。
本标准作了下绢辑性修故：
将原文中“INTRODUCTION\和\INITIALCONSIDERATIONS\合并作为本标准的引言：增加了范围：
将原文中\DEFINITIONS\中的内容作为标准中的“术语和定义”-计量单位统一改为我国法定计量单位；本标准由全国危险化学品管理标准化技术委员会（SAC/TC251)提出并归口。本标准起草单位：湖北出入境检验检疫局、广东省微生物分析检测中心、国家环境保护部化学登记中心、中国检验检疫科学研究院。本标推主要起草人：崔海容、郭坚、赵晖、曹猬、刘纯新、炼会明、简艳、杨顺风、叶诚1
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GB/T27B55—2011
本试验方法是为研究单一化学品对土壤微生物碳转化活性所产生的长期潜在影响而设计的，本试验方法以欧洲及地中海地区植物保护组织推荐的试验方法1为基础，同时参考了德国联邦生物研究所-司、美国环保局：*1、环境毒物学与化学学会及国际标准化组织的试验方法1。1995年，经济合作与发展组织士壤/沉积物工作组在意大利贝尔吉拉太召开了-次会议-\1，正式确定了本试验中使用土壤的类型和数最。土搬样品的来集、处理、贮存等参见IS）的指南文件及贝尔吉拉太工作组的建议书。在对受试物进行萨性特征评估时，例如，在需要获得有关农作物保护剂对土壤菌群的副作用数据时，或要摄示上壤微生物接触于除农用化学品以外的其他化学品可能发生的作用时，蒂要测定化学品对士壤微生物活动的影响。碳转化试验所针对的就是这种化学品对土壤微生物菌群的影响。如果受试物为农用化学品（如农药、肥料、林业化学品），那么氨转化和碳转化试验全部都要做，如果受试物不是农用化学品，则只需做氮转化试验即可。但是，在试验过程中，如果发现氮转化ECs值在商用硝化抑制剂（例如，2-氯-6-三氮甲基吡啶)的范囤内，则应进行碳转化试验以获得进一步的信息。土壤由复杂的，非均相的生物和非生物复合体构成。微生物有机体对肥沃的土壤中有机物质的分解和转化起着非带重要的作用，并且不同的生物种共同作用也可对土壤肥力的各方面产生重大影响。这些生物化学过程中任何变化都可能长期潜在的干扰氮循环，从而改变土壤肥力。碳和氮的转化发生在所有的肥沃土壤中。尽管微生物群体对上述这些过程的作用因土壤类型不同而导，但其转化的途径是基本相同的。
本试验方法用于检测一种物质在好氧条件下的土表面对碳转化过程的长期不利影响：试验对进行碳转移的微生物群落的数量和活性的改变非常敏感，因为该群落受化学应激和碳应激的影响。砂填有机质含量低，因而被采用。土经受试物处理，并且在允许微生物快速新陈代谢的条件下进行培养。在该条件下，上壤中可用的有机碳会迅速降解，从而引起有机碳的缺乏，使微生物细胞饥饿并导致休眠或者产生芽抱。如果试验超过28d，这些反应的总和在（未处理过的土壤中）对照组中作为一种新陈代谢活动损失的微生物最的形式被测量们。如果试验条件下，碳应激士壤中的生物量受到化学品的影响，则可能无法恢复到与对照组相同水平上。因此，受试物在试验过程中任意时间受到的于扰常会持续到试验结束。
该试验方法主要用于土境中环境铱度含量已知的物延。例如，士壤中使用农药的施用是已知的。对于农用化学品，只需测定两种剂量浓度（该浓度与预期或者预测的施用量相关）。农用化学品可作为活性成分（a，.）或者作为配制品进行测定。然而，试验不仅仅适用于其有已知环境浓度的化学物质，通过故变施用于土壤中受试物的量和数据评价的途径，此试验也适用于施用于土壤中未知浓度的化学品。因此，对于非农用化学品，可以利用该方法测定不同浓度对碳转化的影响。试验结果可用于绘制剂量反应曲线图，并用来计算引起土壤中碳转化抑制百分率达%时的受试物浓度（ECI）值，其中为碳转化抑制百分率，
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1范围
化学品
土壤微生物
碳转化试验
GB/T27855-2011
本标推规定了单一化学品对土微生物碳转化活性所产生的长期潜在影响的试验方法。本标准适用于对受试物进行毒性特征评估，碳转化试验针对的是化学品对土填微生物菌群的影响。2术语、定义和缩略语
下列术语,定义和缩略语适用于本文件。2. 1术语和定义
碳转化carbon lransformatton
通过微生物将有机物降解形成最终的无机物二氧化碳。2.2缩略
EC引起士壤中转化抑制百分率达a%时的受试物浓度（cffectiveconcentration）ECs引起土壤中碳转化抑制百分率达50%时的受试物浓度（medianelIcctiveconcenratinn）3试验的有效性
对农用化学品测试结果的评价基于对照土壤和经过处理的土壤样品中所释放的二氧化碳或耗氧量的差异，该种差异相对较小（平均值士25），因此，对照组中出现较大差异将导致错误的结果。故对照平行样品之间的异应少于士15%。4原理
预先准备好用受试物处理过的土壤或未被处理的土壤做对照。若受试物是农用化学品+推荐至少用两个测试浓度,其中最低测试浓度应与预计在田间筛用的最高浓度相关。在培养 0 d,7 d,14 d,28 d后，处理的和对照的土壤样品与葡萄糖混合，然后连续測定12h内荷萄糖引起的呼暇速率。呼吸速率以释放的二氧化碳[碳（mg)/土壤（kg·h)或消耗的氧[氧(mg)/士境（kg·h)来表示。处理过的土样品的平均呼吸速率与对照进行比较，并以对照为基础计算出处理土壤乎均呼吸速率差异的百分率。全部测试至少持续28d。如果在第28天处理土壤和未处理土壤之间的差异等于或大于25%，侧以14d为间需期继续测试，最长至100d。若受试物是非农用化学品，则需用一系列浓度的受试物加到土填样品中，并在28d后测定菌萄糖引起的呼吸速率（即二氧化碳形成或氧消耗的平均值）。用回归方法对获得的系列浓度测试的结果进行分析，并计算出EC值，即ECr，EC2s或ECl。5试验装置
试验容器需用惰性材料制成。应使用与土培养所用方法相匹配的适宜容量，即以整体的或一系1
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列单独的士壤样品进行培养。应注意在测试过程中将水分的揽失量减至最小，并能进行气体交换（例如，可用带有小孔的骤乙烯薄膜覆盖测试容器）。在进行挥发性物质的试验时，应用可密封的或不透气的容器。容器的大小应以装好的土壤样品与其总容量的大约1/4为准。为测定葡萄糖引起的呼吸作用，需要具有培养系统，测量二氧化碳产生量或氧气消耗量的仪器
6试验程序
6.1准备
6.1.1土壤的选择
使用单一的上壤，土壤具有以下特征：破粒含量：50%~75%，
pH.5. 5~~7. 5;
有机氮含量：0.5为~1.5%。
应测定微生物的生物量(12儿I,其含碳量至少应是土壤总有机碳的1%。在多数情况下,具有以H特征的士壤代表着最差的境况。出于其对测试化学品的吸收量最少，而对徽生物菌群的可利用性最大。因此，通常不必要使用其他土壤测试。但是，在某些情况下，预计受试物主要用于特定的土壤，如：性的森林上壤，对于带有静电荷的化学品，用另一种附加土壤。6. 1. 2土境样品的采年
应了解采集供试上壤田问地点的详细历史信息，包括：准确位置、椎被、施用农作物保护剂的日期、使用有机或无机肥料处理的情况、加人的生物材料或偶然混入的污染物。采样选择的土应能够长期使用，水久的牧场、一年收获-次种植谷类作物（除了玉米)的辨地，或密植的绿肥地均是合适的地点。取样地点应满足；至少在取样前一年内未用过农作物保护剂。至少6个月没有施用过有机肥料。除非农作物需要方可施用无机肥料，而在施肥后至少3个月才能取土壤样品。应避免使用那些其有生物杀灭影响的农药或肥料(例妍：鼠胺化钙)处理过的士壤、应该避免在长期（超过30d)干早或积水期间内取样，或之后立即取样。在耕地中取士壤样品的深度应是 0 ctm～20 cml。在较长时期不型地(至少一个生长季)的草地(牧场)或其他类型土堰中取样的最大深度可大于20cm（例如25em）运输土裹样品时应使用赔存器，尚时要温度条件合适，以保证原始的土壤性质不发生显著改变。6. 1. 3土壤样品的贮存
测试最好使用从田间新采集的土壤。如需要存，则应于4它土2亡的黑惜处，贮存时间不超过3个月。在土壤贮存期间，应保证好氧的条件。如呆采集的土壤来自每年至少有3个月封冻的地区，可考虑在一18℃下贮存6个月。每项测试前需测定贮存土壤的微生物量，同时，生物量中的碳含量应大于土现有机碳总含量的1%。
6.1.4受试土填样品的处理和制备6.1.4.1预培养
如使用贮存的土壤，建议预培养的时间为2d～28d。项培养期间土壤的温度和显度应与试验时的情况相同。
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6.1.4.2物理化学特性
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从士壤中人工栋出粗大杂物（例如，石头、植物残体等），然后湿态过滤（不要过分干燥），使题粒不大子2垃t。土湿度应该用蒸留水惑去离子水调节，使水量租当于最大持水量的40为～60%6.1.4.3施入土境中的受试物的制备受试物一般通过载体来施人。此载体可能是水（用于可溶于水的物质）·或者是惰性的固体物质，如细石英砂獭粒大小为0.1mm～~0.5ttn)。应该避免使用除水以外的液体载体(有机溶剂,例如：丙酮三氛中烷等），因为它们能损害微生物菌群。如采用沙子做为载体，应将受试物其溶解或者悬浮于相应的熔剂中，然后实施包耍。为了使受试物在壤中得到最合适的分布，建议沙与土境（干重）的配比为：10区沙/kg上壤。对照样品钗用等量的水和石英砂处理。测试具有挥发性的化学品时，在处理过程中应尽量避免其挥发，并应注意保证其在士中的均勾分布（例如，应将受试物从率个部位捧人上壤）。6.1.5试验浓度
对于环境浓度可以预知的农作物保护剂或其他化学品，至少用两个浓度。设定的较低澈度应至少可以友映在实际条件下预讨进入土壤的最大值，所设的较高浓度应为较低浓度的整数倍。加人土壤中的受试物浓度计算依据是：痕定受试物与于壤与混合至漆度为5cm，且上壤容重为1.5。对于直接施人土壤的农用化学品或能预测进人士壤用些的化学品，推荐的测试浓度为预测环境浓度(predicted en-viranruentail conccntration,PEC)和预避环境浓度的5倍。预期在一个季节中多次施人土壤的物质，其试验浓度为：预计施人土壤的最多次数乘以预测环境浓度。但是，试验浓度的上限不应超过单一最大施用量的10倍。
若受试物为非农用化学品，则至少要用以几何级数排列的5个浓度。测试浓度应涵盖确定EC，值所需的范厨。
6.2试验操作
6.2.1处理与对照
如果受试物为农用化学品，应把土腹分成重量相等的3份。2份与含有受试物的载体相混台，而另外1份与不含受试物的载体混合(即对照）。处理过的与未处理的土壤样品各设置至少3个平行，如果受试物为非农用化学品，则将土境分成重量相等的6份：其中5份样品与含有受试物的裁体混合，剩余1份与不含化学品的载体混合。处理样品或对照样品各设置3个平行。应存细操作，确保受试物在经处理的士堰样品中混句分布。在混合过程中,注意避免使土堰压紧或结球。6.2.2土填样品的培养
土壤样品的培养可以两种方式进行：1)各处理过的和未处理的土壤的整体样品；2)各处理过的和未处士壤的由大小相等的单独子样品组成的一系列样品。在测试挥发性物质时，只能用：系列的单独的子样品来进行培养。以整体土划样品培养时，带制备的处理过的和未处理的士壤样虽最大，在试验市根据需要可以对子样品进行分析。确定每次处理及对照准备土壤品的初始童的依据是于样品的大小，样品分析的重复次数及预计的最高采样次数。对整体培养的土壤在再饮取样前应充分混合。在培养一系列的单独土境样品时，特每个处理的和末处理的整体士感分割成所需要的小份的上班样品，根据需要使用。当预计实验中采样要超过两次时，制备的小份土壤样品要满足于每次取样和所有平行。测试土壤至少虑有3个平行样品在有氧条件下培券。在试验中使用具有足够上部空间的适宜容器，以避TTTKAONYKACA
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免厌氧条件的产生。在测试挥发性物质时，只能用系列单独的子样品进行培养。6.2.3试验条件和持续时间
试验需在照暗条件及20℃士之室温下进行。试验期问，土壤样品的湿度应维持在土壤龄大持水量的40%～60头，变化范围为士5头。在需要时可加蒸馏水或去离子水，试验持续时问至少为28d。若受试物是农用化学品，应比较处理样品和对照样品中二化碳释放量或氧消耗量。若到第28天测出它们之间的差异大于25%，试验要继续进行或直到它们之间的差异等于或少于25%，或最长至100d，两者取其短。若受试物是非农用化学品，则试验应在28d后结束，在第28天，对处理和对照的土壤样品中二氯化碳释放量或氧消耗量进行测定，并计算EC，值。6.2.4土填取样时闻表
若受试物为农用化学品，则需在0d，7d,14d.28d分析土壤样品中的葡葡糖引起的呼吸速率。若应进行更长时阿的试验，则应在28 d后每问隔14 d继续进行测定。若受试物是非农用化学品，则至少用5个试验浓，并应在开始(0d)和接触期间的最后(28d)分析土壤样品的葡萄糖引起的呼吸作用。若行需要，还可增加一次中间测定，例如在第7天测定。用第28天测得的数据确定化学品的EC，值。若有需要,也可用对照样品第口天的数据估算士壤中有代谢活性的初始微生物量。
6.2.5葡萄糖诱导呼吸速率的测定每次取样时，均需测定每个处理和对照的平行样品中葡糖引起的呼吸速率。土壤荐品要与足够数量的葡萄糖混合，以迅速产生最大的呼吸反应。可通过使用系列葡萄糖浓度的预备试验来获得产生呼吸反应的最大值所需要的翻糖量-4。对于含有0.5%～1.5%有机碳的砂质土壤可按每千克的土（干重)使用2 000 tn名～4 000 mg的葡萄糖。把葡萄糖与石英砂一起研至粉未状，并与土囊（干重)均勾混合(10 砂/kg土壤)。
在测定用葡萄糖调整过的土壤样品的呼吸速率时，无论是连续测定、每小时测定、或每两小时测定一次，均要在温度为20℃士2℃当的容器中培养。应连续12 h测定二氧化碳释放量或氧消耗显，测定应尽快开始，即在增补葡蔽糖后的1h--2h内开始。在12h中测定二氧化碳释放总基和载消耗总量，并确定平均呼吸速率。
6.3质量控制
平行的对照样品之间的差异应小于去15头。7结果和报告
7.1结果处理
7. 1.1测试物为衣用化学品
若测试物为农用化学品，应记录每个平行土婆样品的二氧化碳释放量或氧消耗量：并将所有重衰样品的平均值以表格形式列出。其结果应采用适当的、通用的统计学方法(例如,F检验,0.5%显著性水平)进行评价。葡药糖引起的呼吸速率以:[碳(ng)/土壤(kg·h)或[氧(mng)/土壤(kg·h)来表示。每个处理样品的平均二氧化碳生成率或平均的氧消耗速率与对照进行比较，并计算出与对照的百分比差值。
7.1.2测试物为非农用化学品
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若测试的是非农用化学品，则测定每个平行样品中的二氧化碳释故量最氧消耗量，并绘制剂是-反应曲线，以估出EC值。在28之后，比较处理样品与对照样品的菌药糖引起的呼吸速率L即碳(mg)/土壤(kg-h)或氧(mg)/土壤（kg·h）))。用以上数据，可计算出每个试验涨度下的抑制百分率（%）。用这些百分数对浓度对数作图，并用统计学方法计算出EC，值及其95%胃信度[1sI1517]7.1.3结果说明
在评估农用化学品的测试结果时，在28d之后的任何时间所敢样品，若其低浓度处理（即最大的预计浓度)与对照之间的呼吸速率差异等于或低下25%时,可认为该产品对土壤中的碳转化没有长期影响。当评估除农用化学品以外的其他化学品的测试结果时,可采用ECs,EC和(或)ECI值。7.2报告
结果报告应包括以下信息 1
a）测试上壤的完整宿息包括：
——采样点的地理坐标（纬度，经度)；一采样点的历史信息（即植被覆盖、农作物保扩剂的使用、肥料的使用、意外的污染物等）；一利用形式(例如，农业十壤.森林等)，一取样深度（cm）：
一砂教/粉砂/粘粒的含量（%于重），-pH(在水中)；
有机碳含量（%干重）t
一氮含量（%干重）；
-阳离子交换量（mmol/kg）；
—-——以占总有机碳的百分比表示的微生物量；一一确定种参数的试验方法的参考文献；有关土壤样品的采集和保存的全部信息：一土壤预培养的细（姆有此张骤）。b)
受试物：
物理性质+以及相关的物理-化学性质一-化学鉴定数据包括：结构式、纯度（对于农作物保护剂，是指其中活性成分的百分比)含氟量。
c）试验条件，
用有机底物调整土壤的详细资料；一测试化学品的浓度值,造当说明所选浓度的合理性；向土壤中施用受试物的详细资料：培养温度
-在开始和在试验期间的上壤湿度；—土壤培养的方法（整体的或一系列单臧的子样品)试验样品的平行数：
-取样次数。
试验结果应包括以下信息：
a）用于测试呼噬速率的方法与设备；5
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列表数据，包括二氧化碳量或氧量的单个值与均值；在处理样品与对照样品中客平行择品之间的差异若计算中进行了有关修正，在有关处加以说明每次取样时，翻荐引起的呼吸速率的百分率变化，或适当说明ECs值及其95%置信度，其他EC,（即EC25+或EC10)及其盘信区间.并绘制剂盘-反应曲线图：结果的统计学处理(在适当处说明)；有助于解释结果的全部信息和观察资料。参考文献
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