NY/T 2297-2012
基本信息
标准号： NY/T 2297-2012
中文名称：饲料中苯甲酸和山梨酸的测定 高效液相色谱法
标准类别：农业行业标准(NY)
标准状态：现行
出版语种：简体中文
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标准分类号
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出版信息
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标准简介
NY/T 2297-2012 饲料中苯甲酸和山梨酸的测定 高效液相色谱法
NY/T2297-2012
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标准内容
ICS65.120
中华人民共和国农业行业标准
NY/T 2297--2012
饲料中苯甲酸和山梨酸的测定
高效液相色谱法
Determination of benzoic acid and sorbic acid in feeds-High performance liquid chromatography2012-12-24发布
2013-03-01实施
中华人民共和国农业部
本标准按照GB/T1.1给出的规则起草，本标准由农业部畜牧业可提出。言
本标准由全国饲料工业标准化技术委员会（SAC/TC76)归口本标准起草单位：农业部饲料质量监督检验测试中心（成都)。NY/T 2297--2012
本标滩主要起草人：张静、魏敏、1宇萍、赵立军、林顺全、高庆军、冯娅、陈红、程传民。1
1范围
饲料中苯甲酸和山梨酸的测定
高效液相色谱法
本标准规定广饲料中苯甲酸和山梨酸的高效液机色谱测定方法。NY/T 2297—2012
本标准适用于配合饲料、浓缩饲料、添加剂预混合饲料和精料补充料中苯巾酸利山梨酸的测定。本标准的检测限：苯甲酸和山梨酸均为20mg/kg。本标准的定最限：苯甲酸和山梨酸均为50mg/k。2规范性引用文件
下列文件对于本义件的应用是必不可少的：凡是注日期的引用文件，仪注口期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法达GB/T14699.1饲料样
GB/T20195动物饲料试样的制备
3原理
饲料中的苯中殿和山梨酸经提取液提取、离心后.取部分匕清液经混合型阴离子固相苯取柱净化，用高效液相色谱仪紫外检测器检测，外标法定量。4试剂和材料
除非另有说明，在分析中仅使用分析纯的试剂，色谱分析用水符分GB/T6682中二级水的规定。4.1中醇：色谱纯。
4.2甲酸：色谱纯。
4.3氨水。
4.4亚铁氰化钾溶液（0.25Io1/L)：称取亚铁氰化钾LK,Fc(CN)：3H,门10.6g，加水溶解并稀释至100ml.
4.5乙酸锌溶液（1.0mol/L)：称取乙酸锌Zm(CH,CO)：·2H,0]22g，人冰乙酸3ml.加水稀释至100ml.
4. 6 磷酸盐缓冲液(pH一6. 7):分别称取磷酸二氢钾(KH,P)2. 5 g 和磷酸氢二钾(K,HP()-3II,0)2.5g.用水溶解后定容至1000ml。4.72%氮水溶液：量取氨水2mL，加水至100mL混寸，4.85%甲酸中醇溶液：量取甲酸5mL加甲醇至100ml,混勾。4.9流动相：量取磷酸盐缓冲液(4.6)900ml.加人甲醇100ml.,混勾。4.10本甲酸对照品：CH0，纯度298%。4.11山梨酸对照品：（%II.（，纯度98%4.12标准溶液的配制
4.12.1标准溶液贮备液：准确称取适量苯甲酸和山梨腰对照品各50.0mg，用甲醇溶解并定容至1
NY/T 2297--2012
50ml。此贮备液浓度为1.0mg/ml，2%～8℃冷藏保存，有效期为3个月。4.12.2混合标准工竹溶液：分别准确吸取适量苯甲酸和山梨酸标准溶液贮备液（4.12.1)，用流动相（4.9）配制成浓度分别为2.0μg/ml.5.0g/ml.10.0μg/mL、25.0μg/ml.和50.0ug/mL的混合标准工作落液，2℃～8℃冷藏保存，有效期为1个月。4.13厨相举取小柱：混合型明离了交换柱，60mg/3ml，或性能相当者。5仪器和设备
5.1高效液相包谱仪：配备紫外检测器或二极管阵列检测器。5.2实验用样品粉碎机，
5.3天平：感量0.01g
5.4分析天平：感量0.1mg
5.5离心机：转速为50001/min及以上。5.6超声波消洗器。
5.7涡旋泌合器。
5.8振荡器。
5.9密封盖塑料离心管：50ml。
5.10固粘举取装置。
5. 11滤膜:0. 45 μrm,有机系。6试样的制备
按GB/T14699.1的规定采集试样后，按GB/T20195的规定选取其有代表性的实验室样品1kg四分法缩减分取200 g左右，粉猝过(0.45mm孔筛,混匀装人磨山瓶中备用。7分析步骤
7.1握取
准确称取试样2g（精确至0.01^）,置于离心管(5.9)中，准确加人2%氮水溶液(1.7)21i，超声提取10 min,振荡提取10min,准确加人亚铁氰化钾溶液(4.1)2iL,乙酸锌溶液(4.5)2mL,涡旋混匀以5000r/min离心5min：精密吸取上清液5ml.于25mL容量瓶.用2%氮水溶液（4.7)容，备用7.2净化
依次用甲醇3ml水3mL活化固相萃取小柱（4.13),精密吸取提取液5.0mL过此小柱。再依次用2%氨水溶波(4.7)3mL和甲醇3mL淋洗，抽下小柱.用5%币酸甲醇溶液（4.8)2:0mL洗脱，洗脱液过0.45um滤膜后，供高效液相色谱测定。7.3高效液相色谱条件
色谱柱：C/柱，柱长250mm，内径4.6mm，粒径5m，或性能相当者流动相：磷酸盐级冲液（4.6）1-甲醇—90+10..流速:1.0mL/min.
检测波长230nm。
柱温：30℃.
进样量:10μl.a
7.4高效液相色谱测定
将试样制备液(7.2)和混合标准工作落液（4.12.2)分别注人高效液机色谱仪，单点或多点校正外标2
NY/T2297—2012
法定量，标准色谱图参见附录A。若分析物浓度不在线性范围内时,应将分析物稀释再进行检测。8结果计算与表示
8.1结果计算
饲料中苯甲酸或山梨酸的含量X，以毫克每干克（Ig/kg)表示，单点校正接式(1)计算X - AXGXy.XVX1000
A,×m×V.×1000
A：试样溶液峰面积值：
C、标准工作腋浓度，单位为微克每毫升(ug/ mL)；V、一标准工作液进样体积，单位为微升（uI)；A、标准工作液峰面积值：
m称取试样的质量,单位为克(g)：洗脱液体积，单位为衰升(mL）；V
V,一-试样溶液进样体积,单位为微（μL);t
一稀释倍数。
多点校正按式(2)计算：
武中：
X = Cx×V×1000
m × 1000
Cx一》-标雅曲线上查得的试样中苯甲酸或山梨酸的浓度，单位为微克每毫升（ug/mL）；m一-称取试样的质量，单位为克(g）：V—洗脱液休积，单位为毫升（ml.)；22下载标准就来标准下载网
一稀释倍数。
8.2结果表示
按平行测定的算术平均值表示，计算结果保留三位有效数字。9精密度
在重复性条件下获得的两次测定结果的绝对偏差值不得超过算术平均值的10%，3
NY/T22972012
附录A
(资料性附录)
苯甲酸和山梨酸标准液相色谱图苯甲酸和il梨酸(10.0/ml)标准液相色谱图见图A1。mAUJ
26839-
苯甲酸和山梨酸(10.0μg/mL)标准液相色谱图16
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中华人民共和国农业行业标准
NY/T 2297--2012
饲料中苯甲酸和山梨酸的测定
高效液相色谱法
Determination of benzoic acid and sorbic acid in feeds-High performance liquid chromatography2012-12-24发布
2013-03-01实施
中华人民共和国农业部
本标准按照GB/T1.1给出的规则起草，本标准由农业部畜牧业可提出。言
本标准由全国饲料工业标准化技术委员会（SAC/TC76)归口本标准起草单位：农业部饲料质量监督检验测试中心（成都)。NY/T 2297--2012
本标滩主要起草人：张静、魏敏、1宇萍、赵立军、林顺全、高庆军、冯娅、陈红、程传民。1
1范围
饲料中苯甲酸和山梨酸的测定
高效液相色谱法
本标准规定广饲料中苯甲酸和山梨酸的高效液机色谱测定方法。NY/T 2297—2012
本标准适用于配合饲料、浓缩饲料、添加剂预混合饲料和精料补充料中苯巾酸利山梨酸的测定。本标准的检测限：苯甲酸和山梨酸均为20mg/kg。本标准的定最限：苯甲酸和山梨酸均为50mg/k。2规范性引用文件
下列文件对于本义件的应用是必不可少的：凡是注日期的引用文件，仪注口期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法达GB/T14699.1饲料样
GB/T20195动物饲料试样的制备
3原理
饲料中的苯中殿和山梨酸经提取液提取、离心后.取部分匕清液经混合型阴离子固相苯取柱净化，用高效液相色谱仪紫外检测器检测，外标法定量。4试剂和材料
除非另有说明，在分析中仅使用分析纯的试剂，色谱分析用水符分GB/T6682中二级水的规定。4.1中醇：色谱纯。
4.2甲酸：色谱纯。
4.3氨水。
4.4亚铁氰化钾溶液（0.25Io1/L)：称取亚铁氰化钾LK,Fc(CN)：3H,门10.6g，加水溶解并稀释至100ml.
4.5乙酸锌溶液（1.0mol/L)：称取乙酸锌Zm(CH,CO)：·2H,0]22g，人冰乙酸3ml.加水稀释至100ml.
4. 6 磷酸盐缓冲液(pH一6. 7):分别称取磷酸二氢钾(KH,P)2. 5 g 和磷酸氢二钾(K,HP()-3II,0)2.5g.用水溶解后定容至1000ml。4.72%氮水溶液：量取氨水2mL，加水至100mL混寸，4.85%甲酸中醇溶液：量取甲酸5mL加甲醇至100ml,混勾。4.9流动相：量取磷酸盐缓冲液(4.6)900ml.加人甲醇100ml.,混勾。4.10本甲酸对照品：CH0，纯度298%。4.11山梨酸对照品：（%II.（，纯度98%4.12标准溶液的配制
4.12.1标准溶液贮备液：准确称取适量苯甲酸和山梨腰对照品各50.0mg，用甲醇溶解并定容至1
NY/T 2297--2012
50ml。此贮备液浓度为1.0mg/ml，2%～8℃冷藏保存，有效期为3个月。4.12.2混合标准工竹溶液：分别准确吸取适量苯甲酸和山梨酸标准溶液贮备液（4.12.1)，用流动相（4.9）配制成浓度分别为2.0μg/ml.5.0g/ml.10.0μg/mL、25.0μg/ml.和50.0ug/mL的混合标准工作落液，2℃～8℃冷藏保存，有效期为1个月。4.13厨相举取小柱：混合型明离了交换柱，60mg/3ml，或性能相当者。5仪器和设备
5.1高效液相包谱仪：配备紫外检测器或二极管阵列检测器。5.2实验用样品粉碎机，
5.3天平：感量0.01g
5.4分析天平：感量0.1mg
5.5离心机：转速为50001/min及以上。5.6超声波消洗器。
5.7涡旋泌合器。
5.8振荡器。
5.9密封盖塑料离心管：50ml。
5.10固粘举取装置。
5. 11滤膜:0. 45 μrm,有机系。6试样的制备
按GB/T14699.1的规定采集试样后，按GB/T20195的规定选取其有代表性的实验室样品1kg四分法缩减分取200 g左右，粉猝过(0.45mm孔筛,混匀装人磨山瓶中备用。7分析步骤
7.1握取
准确称取试样2g（精确至0.01^）,置于离心管(5.9)中，准确加人2%氮水溶液(1.7)21i，超声提取10 min,振荡提取10min,准确加人亚铁氰化钾溶液(4.1)2iL,乙酸锌溶液(4.5)2mL,涡旋混匀以5000r/min离心5min：精密吸取上清液5ml.于25mL容量瓶.用2%氮水溶液（4.7)容，备用7.2净化
依次用甲醇3ml水3mL活化固相萃取小柱（4.13),精密吸取提取液5.0mL过此小柱。再依次用2%氨水溶波(4.7)3mL和甲醇3mL淋洗，抽下小柱.用5%币酸甲醇溶液（4.8)2:0mL洗脱，洗脱液过0.45um滤膜后，供高效液相色谱测定。7.3高效液相色谱条件
色谱柱：C/柱，柱长250mm，内径4.6mm，粒径5m，或性能相当者流动相：磷酸盐级冲液（4.6）1-甲醇—90+10..流速:1.0mL/min.
检测波长230nm。
柱温：30℃.
进样量:10μl.a
7.4高效液相色谱测定
将试样制备液(7.2)和混合标准工作落液（4.12.2)分别注人高效液机色谱仪，单点或多点校正外标2
NY/T2297—2012
法定量，标准色谱图参见附录A。若分析物浓度不在线性范围内时,应将分析物稀释再进行检测。8结果计算与表示
8.1结果计算
饲料中苯甲酸或山梨酸的含量X，以毫克每干克（Ig/kg)表示，单点校正接式(1)计算X - AXGXy.XVX1000
A,×m×V.×1000
A：试样溶液峰面积值：
C、标准工作腋浓度，单位为微克每毫升(ug/ mL)；V、一标准工作液进样体积，单位为微升（uI)；A、标准工作液峰面积值：
m称取试样的质量,单位为克(g)：洗脱液体积，单位为衰升(mL）；V
V,一-试样溶液进样体积,单位为微（μL);t
一稀释倍数。
多点校正按式(2)计算：
武中：
X = Cx×V×1000
m × 1000
Cx一》-标雅曲线上查得的试样中苯甲酸或山梨酸的浓度，单位为微克每毫升（ug/mL）；m一-称取试样的质量，单位为克(g）：V—洗脱液休积，单位为毫升（ml.)；22下载标准就来标准下载网
一稀释倍数。
8.2结果表示
按平行测定的算术平均值表示，计算结果保留三位有效数字。9精密度
在重复性条件下获得的两次测定结果的绝对偏差值不得超过算术平均值的10%，3
NY/T22972012
附录A
(资料性附录)
苯甲酸和山梨酸标准液相色谱图苯甲酸和il梨酸(10.0/ml)标准液相色谱图见图A1。mAUJ
26839-
苯甲酸和山梨酸(10.0μg/mL)标准液相色谱图16
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