NY/T 2313-2013 甘蓝抗枯萎病鉴定技术规程 NY/T2313-2013 标准压缩包解压密码：www.bzxz.net

ICS 65.020
中华人民共和国农业行业标准
NY/T 2313--2013
甘蓝抗枯萎病鉴定技术规程
Rule for evaluation of cabbage resistance to fusarium wilt2013-05-20发布
2013-08-01实施
中华人民共和国农业部
本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准农业部种植业管理司提出。本标推全国蔬菜标准化技术委员会（SAC/TC467)归I1本标准起草单位：中国农业科学院蔬菜花卉研究所。NY/T2313—2013
本标准土要起草人：杨宁红、谢内炎、冯兰杏、杨翠荣、龚慧芝、苑振川、陈国华、凌键。I
1范围
甘蓝抗枯萎病鉴定技术规程
本标准规定甘蓝抗粘菱病鉴定方法和评价法。本标准适而于甘蓝（BrassicaoleraceaI.）抗枯萎病的室内鉴定及抗性评价2规范性引用文件
NY/T 2313--2013
下列文件对丁本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注且期的版本适用于本文件。凡是不注期的引用文件.其最新版本（包括所有的修改单)适用于本文件。VY/T1857.3黄瓜抗枯萎病鉴定技术规程3术语和定义
VY/T1857.3界定的以及下列术语和定义适用「本文件，3.1
甘蓝枯萎病cabhage lusarium wilt出尖孢镰刃菌黏团专化型「Fusarizn rox:yspurunSchl.f.sp.congtutinan（Wohenw.）Snyder&IIansrn所引起的植株一侧或整个下部片黄化，叶柄和茎部的维管组织变揭，植株小而萎蕉，病抹逐渐死亡等症状为主的甘监土传病害。4试剂与耗材
4.1PL培养液
马铃薯去皮切片，称取200g加1000ml.蒸馏水，煮沸10min~~20min，月纱布过滤，补加蒸馏水至1000mI，加乳糖20，溶化后于121℃高压灭菌30min.4.2PDA培养基
马铃薯去皮切片，称取200g-加1000ml.蒸馏水，煮沸10min-~20min，用纱布过滤，补加蒸馏水至1000mL，加20g琼脂粉、加热溶化后，再加人葡萄精20g，搅拌均勾并溶化后，于121℃高压灭菌30min
4.31%的次氯酸钠(NaCIO)溶液
取1nl.次氯酸钠于99mL灭菌水中，摇匀。4.4耗材
培养皿、锥形瓶，纱布、酒精灯，育苗钵、育苗盘等。5仪器设备
恒温摇床、恒温培养箱、冰箱、火菌锅、超净工作台、显微镜、移液器、血球计数板。6枯萎病菌接种体制备
6.1病原物分离
从甘蓝枯萎病发病植株叶柄、茎基部用常规组织分离法分离枯蒸病病原物。分离物鉴定参觅附录A。确认为尖孢镰力菌黏团专化型（Fusariunrarysporumf.sp.conglutinans)后，采用单孢分离法进行NY/T 2313--2013
分离物纯化，经科赫（koch)法则验证后，保存备用6.2生理小种鉴定
对用汀抗病性鉴定接种的病原分离物进行牛理小种的鉴定，鉴定方法参见26.3接种体繁殖和保存
6.3.1接种体的繁殖
使用国内优势小种小种1作为接种病原物。繁殖方法为：将保存的甘蓝枯萎病菌置于25℃TDA半板培养基七培养3d活化后，接种于盛有PL培养液的锥形瓶中，置于25℃～28℃摇床上，以120rpm振荡培养3d~~1d。增养液经两层医用纱布过滤即得以小型孢子为主的孢子悬浮液，然后用蒸馏水稀释滤液至所需接种浓度，
6.3.2病原物保存
常用保存方法为将甘蓝枯萎病菌接种于PT)A斜面培养基上，在25℃的恒温箱中培养7d，置1℃~8℃冰箱内保存；或在斜面十加-层灭菌矿物油（超过斜面顶部1cm）后置冰箱冷藏室或室温下保存。将书蓝帖萎病菌接种于含20%丙三醇的液体中，置80℃冰箱中冷冻保存。7室内抗性鉴定
7.1鉴定室
人工接种鉴定空应具备人工调节温度、湿度及光照的条件，使人工接种后具备良好的发病环境7.2鉴定设计
鉴定材料随机排列或顺序排列，每份鉴定材料重复3次,符·重复1C株苗。7.3鉴定对照材料
设甘蓝品种“诊奇”为抗病对照品种，“北农卓生”为感病对照品种。7.4鉴定材料育苗
鉴定种子在1%的次氯酸钠溶液中浸种5min~~lonlill.清水冲洗后置于25℃的恒温培养箱中催芽，种了萌发后播种千育苗盘内。育苗基质为炭、蛭石和菜田-（2：1：1）经高滥蒸汽灭菌（134，30min）。在日光温室毕育出，室内漏度自天为20℃-25℃，夜晚为18~20（，所有幼节应生长健壮、-致。
7.5接种
7.5.1接种时期bZxz.net
甘蓝生育期2期～3叶期。
7.5.2接种浓度
接种体悬浮液的浓度为1×105孢于/ml.。7.5.3接种方法
接种采用浸根接种法。将幼苗连根轻轻拔起后抖落下浮根部泥土，然后将根全部浸丁接种悬浮液内10min～15min,将接种后的监苗定植于装有育苗基质的育苗体中，每钵1株。7.6接种后管理
接种后将植株置于鉴定室内：每天光照14h，强为70uFm“s，保持植株正常生长的上壤混度接种期间鉴定空温度控制在26℃~29%范围内。8病情调查
8.1调查时间
接种后10d~13d调查病情，根据此期间感病的对照品种病级扩展到感病病级的时间作适当调整。2
8.2病情级别划分
幼苗病情级别及其相对应的症状描述见表1、图1。表1甘蓝抗枯萎病室内鉴定病情级别的划分病情级别
8.3调查方法
症状描述
无症状
1片叶叶脉轻微变黄
2片叶叶脉轻至中度变黄
NY/T2313—2013
除心叶外，其余叶中度变黄或萎全部叶片重度变黄或菱為
植株完全菱燕并死亡
图1甘蓝苗期枯萎病病情相应级别调查每份鉴定材料接种株发病情况，根据病害症状描述，逐份材料进行调查，记载单株病情级别，并计算每份鉴定材料的病情指数（DI)。病情指数(DI）按式(1)计算。
式中：
各病情级别的代表数值；
各病情级别的植株数；
调查总植株数：
最高病情级别的代表数值。
计算结果取3次重复平均值。
抗病性评价
9.1抗病性评价标准
NY/T2313—2013
依据鉴定材料的病情指数(DI)平均值确定其抗性水平.划分标准见表2。表2甘蓝对枯萎病抗性的评价标准摘情指数(DI)
50D270
9.2鉴定有效性判别
抗性评价
免（I)
高杭（HR）
抗病(R)
中批（MR）
感病(S)
高感（IIS)
当感病对照材料达倒其机应感病程度(D1→50),抗病对材料与实际抗性程度相符.该批次抗枯萎病鉴定视为有效。
鉴定材料处理
鉴定完毕后将甘蓝发病植株、残体集中焚烧或深翊处理,接种土壤高温灭菌，11
鉴定记载
甘抗枯萎病鉴定结果记载表格参儿附录C.A1学名
附录A
（资料性附录）
甘蓝枯萎病病原菌
NY/T2313—2013
尖孢镰刀菌黏团专化型[FusuriunorysporumSchl.f.sp.conglutinans（Wollenw.）Snyder&Hansen，属半知菌亚门瘤座菌目镰刀菌属真菌。A.2形态描述
病原菌在PDA培养基上，菌落正面呈白色，圆形，菌丝生长茂盛，较紧凌：菌落背面略呈浅黄色。菌丝丝状，无色，有隔。在人工培养基和自然条件下能产生小型分生孢子、大型分生孢子和厚垣孢子3种类型的孢子。小型分生孢子多数单胞，无色，个别具1隔膜，长椭圆至短杆状，直或略弯，大小为（6m18mm）×（2.8um~4.5m），多数为10um×3m：双胞的孢子长约18μm，下部的细胞较宽，顶端渐尖；大型分生孢子圆筒形至镰刀形，两端尖，基部具小突起，多具2个～3个隔膜，大小（25m~33m）×（3.5um~5.5m）；厚垣孢子顶生或间生，表面不光滑，球状至长椭圆状，直径多数为15um，少数达18μm（图A.1、图A.2)。注：左为菌落正面、右为菌落背面图A.1甘蓝枯萎病菌培养性状
注：引自Annalsof theMissouri Botanical Garden,1990图A.2甘蓝枯菱病菌分生孢子（左）、厚垣孢子（右）NY/T2313—2013
B. 1采用的鉴别寄主
附录B
（规范性附录】
甘蓝枯菱病菌生理小种
鉴别寄主为3个甘蓝材料：GoldenAcrc（84）、WisconsinGoldenAere、BI-16。2生理小种鉴定
见表B.1.
表 B. 1 甘蓝枯萎病菌生理小种鉴定鉴别寄主
iokdeu Acrec84)
Wimonsiun CGolden Acre
生小种
注 1:S.感病型,R:抗病型。
注2:1理小种鉴定参考文献：BoslandlP.W.&P.H.William。1987.AnevalurationofFusnritm farysporunefTumcrucifers hased on pathogenicity. isozyme polymnorphisn, vegetative rormimlihility, and geugraphice origin. Cal.J. Potany 65: 2 067 - 2 073.鉴定结果记载见表（.1。
品种/种质
挪种口期
接钟:育期
生小种类型
附录C
（资料性附录）
鉴定结果原始记录表
甘蓝抗枯萎病鉴定结果记载表
复区号
接种片期
病情级别
接种病原菌分离物编号
一炭传日期
病情格数
NY/T 2313--2013
平均病指
鉴延技术负责人（签字)：
抗性评价
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