NY/T 2378-2013
基本信息
标准号： NY/T 2378-2013
中文名称：葡萄苗木脱毒技术规范
标准类别：农业行业标准(NY)
标准状态：现行
出版语种：简体中文
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标准分类号
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标准简介
NY/T 2378-2013 葡萄苗木脱毒技术规范
NY/T2378-2013
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标准内容
ICS65.020
中华人民共和国农业行业标准
NY/T2378—2013
葡萄苗木脱毒技术规范
Technical code for the elimination of viruses from grapevine nursery stock2013-09-10发布
2014-01-01实施
中华人民共和国农业部
3发布
本标准按照GB/T1.1—2009给山的规则起草。本标准由农业部种植业管理司提出。本标准出全国果品标准化技术委员会（SAC/TC510)归口。NY/T2378—2013
本标准起草单位：中国农业科学院果树研究所、农业部果品及苗木质量监督检验测试中心（兴城）。本标准主要起草人：蒂雅风、张尊平、范旭东、任芳、刘风之、聂继云。1范围
葡萄苗木脱毒技术规范
本标唯规定了葡萄苗术脱毒的术语和定义，脱毒对象和脱毒方法。本标准适用于葡萄加工品种、鲜食品种和砧木品种的脱毒。2规范性引用文件
NY/T 237B—2013
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注口期的引文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单)适于木文件。NY/I1843葡萄无病萃母本树和苗木NY/I2377葡萄病毒检测技术规范3术语利定义
下列术讲和定义适用于本文件。3. 1
葡萄诸木grapevine nursery stock采用接穗和砖木嫁接繁育的葡葡嫁接苗，以及通过插、组织培养等方法繁育的葡自根苗。3.2
脱毒 virus elimination
采取-一定的技术措施，从感染病毒的植株得到无病毒后代植株（不含有葡萄扇叫病毒、葡菊卷叶相关病毒 1、葡萄卷叶相关病毒 3、葡萄病毒 A和葡薇斑点病毒)的过程3.3
茎尖培养shoot tip colture
将嫩梢的生长点连厕叶原基，大小约0.2ctn～0.3的茎尖接种于试管内无菌培养基上，促其长成完整植株的过程。
葡萄试管苗grapevineplantletinwitro指通过离体培养方法获得的无菌葡萄瓶苗。3.5
热处理beal trealnient
将盆表苗或试管苗置于恒温培养箱中，于38℃柜温或38℃与32℃变温，每天光照12h16h条件下生长，通过高温抑制病毒扩散，以获得无病毒蒂尖的过程。4脱毒对象
4.1葡葡叶病毒（Grapewinefanteaftrus，GFLV)。4.2葡菊：叶相美纳毒I(Grapevineleufrull-ussoriutedwirusI,GLRaV-1)。4.3葡萄豫叶相关病毒3(Grupewire leufroll-associated virus3,GiRaV-3)4.4前萄病A(GrapewinevirusA,GVA)。4.5葡斑点病毒（Grapevinefleckvirus，GFkV）1
NY/T2378—2013
4.6其他病毒脱除参照本标准。
5脱毒方法
5.1器材
超净作台、高压火菌锅.光照培养箱、体视显微镜、阝H计、电磁炉、电冰箱、电了天平、消毒器、变头摄了（5cm），解部孔解部组级培养瓶，封时膜，培养血，三角瓶等。5.2盆栽苗热处理
取待脱萍制萄品种的盆栽背暨于溢温宅中，苗木动发芽后，放人光照培养箱中。拉温热处理：在(38士1)℃条件下理30~~10d。变温热处卑：32℃和38℃每隔8h变换一次，处理60d。每大光照12h以1，光照强度为50001x～100001x，处理结束后从该益裁苗上前剪取顶芽，进行茎尖培养，茎炎培养方泌见4.
5.3试管苗热处理
待脱毒试管苗转接后，于25℃~28℃继代培养10d~15d,置恒温培养箱中（32℃)培养1周：然后升温至(38二1)℃每大光照1211以上，光照强度15001x~2000lx，依据不同葡萄品种特性恒温热处理30d～40)d或变温热处理（温度为32℃和38℃每隔8h变换一次）60d。为防止培养基十燥：热处理期间,可如人少量灭菌的1/2MS培养基。热处理到期后，从试管苗上剥取0. 2cml-~0.3cm茎尖进行培养。
5.4茎尖培养
5.4.1培养基制备：采用MS基本培养基，添加植物生长调节剂、蔗糖、琼脂等，配制培养基纳具体操作程序参见附录A。
5.4.2盆裁苗热处理后紫尖分离培养：从热处理到期的盆裁苗上，采集牛长旺感、长约1cml2cm的顶梢,去掉叶片，在超净工作台上进行消毒处理。先用75%洒精浸泡0.5min·经蒸懈水冲洗后放人0. 1%升求中消毒 5 min-~10 min,无菌水浸洗 3欲~5 次,取出后置于无菌培养Ⅲ [:,在解剖镜下剥取0.2 cm-~0. 3cm大小的墨尖，接种在分化增殖培养基L。5.4.3试管苗热处理所签尖分离培养：从热处理到期的试臂萌上取梢，在无菌培养业上剥取0.2 cm-~0.3cm 大小的茎炎,接种在分化增殖培养基上5.4.4蒸尖增殖：将按种的境养瓶置于25℃-~28℃、光照强度10001x~-20001x、每天光照时间12l的组培室中培养，根据生长状况，每1个-~2个月转接1次，转接时，先将试管苗基部愈伤组织切除，再切成带1个腋芽的茎段，接种在增殖培养基工。巾同一个茎尖增殖得到的组培苗为个芽系，统一缔。继代5次~~6 次，同一芽系的试管带数量达到5瓶以上时，进行病毒检测，5.4.5病毒检测：尖培养状得的所有芽系均需进行病毒检测，以初步明确脱毒结果。具体检测方法NY/T 2377。
5.4.6生根移栽：养季，经检测不节病战的芽系，切取带1个芽的茎段，接种到牛根培养感上，在组培牵培养1个月后，将培养瓶置于智能温室或月光温室中，闭瓶炼曲1周2周。移裁前，在瓶中加少量水使培养基软化。移栽时，从瓶中取山幼苗，将试管苗根部附着的培养基洗十净，栽人装有基质（蛭石：草一］：1)的塑料营养钵中。试管苗移裁后，加盖塑料薄膜和遮阳网保湿,遮阴，保持空气机对湿度80%以1，温度控制在20~28。
5.4.7移栽试管尚病毒检测：恐作春季和秋季，从移裁成活的试管苗上采集嫩和休眠枝条迹行病毒检测，其体检测方法见入Y/23775.4.8脱毒绍果判定，拟据试管苗和移裁成活苗的病毒检测结果判定脱毒结果，如术检测到本标准规定的脱毒对象，没有表现低何病避病症状，1I生长和结果性状符合该品种特性，则可以作为无病毒原种保存，为儿病毒讨本树和前木繁键供繁殖材料.其体要求参见N/T1843，2
A.I常月溶液配制免费标准bzxz.net
附录A
[资料性附录】
葡萄培养基制备
NY/T 2378—2013
除特说明外，均用蒸馏水溶解和定容，各种母液配完后，分别用玻璃瓶贮存，并Ⅱ贴上标签，注明母液号、配制倍数和日期等，置4℃冰箱保存。制备培养基用的母液和植物生长调节剂溶液配好后应尽快使用，保:存期最好不超过4个月，如发现沉淀，则应丢弃。A. 1. 1NS 母液
T号呼液（溶解定容至1000mL，50X）NHNO
Ⅱ号持液（溶解定容至500mL，100×）H,BO
MnSO,*HO
ZnS04 :7H20
NaeMo(), : 2H,0
Cus - 5H,(0 (62. 5 mg/ 250 mL)CCl, 6H,0 (62.5mg/250 ml.)
Ⅱ号液（落解定容至500拉L，100×）CaCl, : 2H0
V号用液（溶解定容至500mL，100×）Mgs0. . 71,0
V号母液（溶解定容至500mL，100×）Nα2—EDTA
FeS, - 7H,C
W号卡液<辫解定容垒500mL，100×）肌醇(Myo inositol)
酸（Nicotinic acid)
维生素B
甘氨酸
A.1.2生长调节剂
一般配成1mg/10m.的贮存溶液，IAA、GA、IRA、NAA等先用少量乙醇溶解BA先用少量1 mol/L盐酸溶解，再加蒸水定容。A. 1. 31.0 mol/L盐酸和1. 0mol/LNaOH调整pH用)1. 0 mc/I, HC1:取 8. 1 ml, 浓 IICl,定容至 100 mL,3
NY/T 2378-2013
1. 0 mol/L Na(H:称1 g Na0H溶解所定容至 100 ml.A.2制备培养基
A.2.1培养基种类
分化增殖培养基：1/2MS(每1［.取1号母腋10 mI,取Ⅱ号、山号，IV号、V号、号丹液各5ml)附加 GA, 0. 1 mg/ L-~0. 5 mg/I, IBA 0. 1 mg/L. ~0. 5 mg/ L,BA 0. 5 mg/I~~1. 0 mg/ I,蔗糖 30 g/ 1..琼脂5g/1
生根培养基：1/2MS(每11.嵌1号母液10ml.,取Ⅱ号、血号、IV号。V号、И号母液各5ml.)附加IBA 0. 1 m/ 1-~0. 3 mg/ L(或 NAA 0. 05 mg/ L -~0. 2 mg/ L,IAA 0. 2 mg/ L-~0. 5 mg/ L),蔗糖15 g/ L,琼脂 5 g/ L..
A.2.2培养基制备
A.2.2.1根据所需培养幕和类和数量依次吸取T号M号母液，例如配1/2MS培养基2I.,则加入1号母液20n山，Ⅱ号～W号呼液各lomLA.2.2.2加入生长谢节剂。例如,BA的使用浓度为1.0mg/L,则配2L培养基加人20.0m浓度为1.0tng/10的BA液，
A.2.2.3加蒸露水定容，充分混句，用1.0mol/L盐酸或1.0tmol/LNa0H调pH至5.6~-5.8。A.2.2.4稍加热，放人琼脂，待其溶化后，加人蔗糖，充分搅拌溶解。A.2.2.5分装培养属，150ml.的-角瓶,每瓶可装40ml ~50ml,1[培养基可灌20瓶~-25瓶。使用月他养容器时，也应保持培养本的厚度为1.em：1.5cm，以确保试管尚行足够的生长空间，个月～2个月内培养基不下「裂。A2.2.6将三俏瓶封口包扎后，放人高压灭菌锅内，121℃、1.1kg/cum2消毒15min～20min。消毒完毕，放尽消毒锅中的热空气，记即敢出平激，冷却后即可接种试管苗。培养其制备好后，应尽快用究，若剩余，可置丁冰箱冷藏率中黑暗保存（保存期不宜超过2周），以减缓营养物质和植物生长调节剂的分解，葡菊组培快时，培养基中激素的浓度和种类成根据品种和试臀苗生长情进行适度谢整.以得最律效果，
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中华人民共和国农业行业标准
NY/T2378—2013
葡萄苗木脱毒技术规范
Technical code for the elimination of viruses from grapevine nursery stock2013-09-10发布
2014-01-01实施
中华人民共和国农业部
3发布
本标准按照GB/T1.1—2009给山的规则起草。本标准由农业部种植业管理司提出。本标准出全国果品标准化技术委员会（SAC/TC510)归口。NY/T2378—2013
本标准起草单位：中国农业科学院果树研究所、农业部果品及苗木质量监督检验测试中心（兴城）。本标准主要起草人：蒂雅风、张尊平、范旭东、任芳、刘风之、聂继云。1范围
葡萄苗木脱毒技术规范
本标唯规定了葡萄苗术脱毒的术语和定义，脱毒对象和脱毒方法。本标准适用于葡萄加工品种、鲜食品种和砧木品种的脱毒。2规范性引用文件
NY/T 237B—2013
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注口期的引文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单)适于木文件。NY/I1843葡萄无病萃母本树和苗木NY/I2377葡萄病毒检测技术规范3术语利定义
下列术讲和定义适用于本文件。3. 1
葡萄诸木grapevine nursery stock采用接穗和砖木嫁接繁育的葡葡嫁接苗，以及通过插、组织培养等方法繁育的葡自根苗。3.2
脱毒 virus elimination
采取-一定的技术措施，从感染病毒的植株得到无病毒后代植株（不含有葡萄扇叫病毒、葡菊卷叶相关病毒 1、葡萄卷叶相关病毒 3、葡萄病毒 A和葡薇斑点病毒)的过程3.3
茎尖培养shoot tip colture
将嫩梢的生长点连厕叶原基，大小约0.2ctn～0.3的茎尖接种于试管内无菌培养基上，促其长成完整植株的过程。
葡萄试管苗grapevineplantletinwitro指通过离体培养方法获得的无菌葡萄瓶苗。3.5
热处理beal trealnient
将盆表苗或试管苗置于恒温培养箱中，于38℃柜温或38℃与32℃变温，每天光照12h16h条件下生长，通过高温抑制病毒扩散，以获得无病毒蒂尖的过程。4脱毒对象
4.1葡葡叶病毒（Grapewinefanteaftrus，GFLV)。4.2葡菊：叶相美纳毒I(Grapevineleufrull-ussoriutedwirusI,GLRaV-1)。4.3葡萄豫叶相关病毒3(Grupewire leufroll-associated virus3,GiRaV-3)4.4前萄病A(GrapewinevirusA,GVA)。4.5葡斑点病毒（Grapevinefleckvirus，GFkV）1
NY/T2378—2013
4.6其他病毒脱除参照本标准。
5脱毒方法
5.1器材
超净作台、高压火菌锅.光照培养箱、体视显微镜、阝H计、电磁炉、电冰箱、电了天平、消毒器、变头摄了（5cm），解部孔解部组级培养瓶，封时膜，培养血，三角瓶等。5.2盆栽苗热处理
取待脱萍制萄品种的盆栽背暨于溢温宅中，苗木动发芽后，放人光照培养箱中。拉温热处理：在(38士1)℃条件下理30~~10d。变温热处卑：32℃和38℃每隔8h变换一次，处理60d。每大光照12h以1，光照强度为50001x～100001x，处理结束后从该益裁苗上前剪取顶芽，进行茎尖培养，茎炎培养方泌见4.
5.3试管苗热处理
待脱毒试管苗转接后，于25℃~28℃继代培养10d~15d,置恒温培养箱中（32℃)培养1周：然后升温至(38二1)℃每大光照1211以上，光照强度15001x~2000lx，依据不同葡萄品种特性恒温热处理30d～40)d或变温热处理（温度为32℃和38℃每隔8h变换一次）60d。为防止培养基十燥：热处理期间,可如人少量灭菌的1/2MS培养基。热处理到期后，从试管苗上剥取0. 2cml-~0.3cm茎尖进行培养。
5.4茎尖培养
5.4.1培养基制备：采用MS基本培养基，添加植物生长调节剂、蔗糖、琼脂等，配制培养基纳具体操作程序参见附录A。
5.4.2盆裁苗热处理后紫尖分离培养：从热处理到期的盆裁苗上，采集牛长旺感、长约1cml2cm的顶梢,去掉叶片，在超净工作台上进行消毒处理。先用75%洒精浸泡0.5min·经蒸懈水冲洗后放人0. 1%升求中消毒 5 min-~10 min,无菌水浸洗 3欲~5 次,取出后置于无菌培养Ⅲ [:,在解剖镜下剥取0.2 cm-~0. 3cm大小的墨尖，接种在分化增殖培养基L。5.4.3试管苗热处理所签尖分离培养：从热处理到期的试臂萌上取梢，在无菌培养业上剥取0.2 cm-~0.3cm 大小的茎炎,接种在分化增殖培养基上5.4.4蒸尖增殖：将按种的境养瓶置于25℃-~28℃、光照强度10001x~-20001x、每天光照时间12l的组培室中培养，根据生长状况，每1个-~2个月转接1次，转接时，先将试管苗基部愈伤组织切除，再切成带1个腋芽的茎段，接种在增殖培养基工。巾同一个茎尖增殖得到的组培苗为个芽系，统一缔。继代5次~~6 次，同一芽系的试管带数量达到5瓶以上时，进行病毒检测，5.4.5病毒检测：尖培养状得的所有芽系均需进行病毒检测，以初步明确脱毒结果。具体检测方法NY/T 2377。
5.4.6生根移栽：养季，经检测不节病战的芽系，切取带1个芽的茎段，接种到牛根培养感上，在组培牵培养1个月后，将培养瓶置于智能温室或月光温室中，闭瓶炼曲1周2周。移裁前，在瓶中加少量水使培养基软化。移栽时，从瓶中取山幼苗，将试管苗根部附着的培养基洗十净，栽人装有基质（蛭石：草一］：1)的塑料营养钵中。试管苗移裁后，加盖塑料薄膜和遮阳网保湿,遮阴，保持空气机对湿度80%以1，温度控制在20~28。
5.4.7移栽试管尚病毒检测：恐作春季和秋季，从移裁成活的试管苗上采集嫩和休眠枝条迹行病毒检测，其体检测方法见入Y/23775.4.8脱毒绍果判定，拟据试管苗和移裁成活苗的病毒检测结果判定脱毒结果，如术检测到本标准规定的脱毒对象，没有表现低何病避病症状，1I生长和结果性状符合该品种特性，则可以作为无病毒原种保存，为儿病毒讨本树和前木繁键供繁殖材料.其体要求参见N/T1843，2
A.I常月溶液配制免费标准bzxz.net
附录A
[资料性附录】
葡萄培养基制备
NY/T 2378—2013
除特说明外，均用蒸馏水溶解和定容，各种母液配完后，分别用玻璃瓶贮存，并Ⅱ贴上标签，注明母液号、配制倍数和日期等，置4℃冰箱保存。制备培养基用的母液和植物生长调节剂溶液配好后应尽快使用，保:存期最好不超过4个月，如发现沉淀，则应丢弃。A. 1. 1NS 母液
T号呼液（溶解定容至1000mL，50X）NHNO
Ⅱ号持液（溶解定容至500mL，100×）H,BO
MnSO,*HO
ZnS04 :7H20
NaeMo(), : 2H,0
Cus - 5H,(0 (62. 5 mg/ 250 mL)CCl, 6H,0 (62.5mg/250 ml.)
Ⅱ号液（落解定容至500拉L，100×）CaCl, : 2H0
V号用液（溶解定容至500mL，100×）Mgs0. . 71,0
V号母液（溶解定容至500mL，100×）Nα2—EDTA
FeS, - 7H,C
W号卡液<辫解定容垒500mL，100×）肌醇(Myo inositol)
酸（Nicotinic acid)
维生素B
甘氨酸
A.1.2生长调节剂
一般配成1mg/10m.的贮存溶液，IAA、GA、IRA、NAA等先用少量乙醇溶解BA先用少量1 mol/L盐酸溶解，再加蒸水定容。A. 1. 31.0 mol/L盐酸和1. 0mol/LNaOH调整pH用)1. 0 mc/I, HC1:取 8. 1 ml, 浓 IICl,定容至 100 mL,3
NY/T 2378-2013
1. 0 mol/L Na(H:称1 g Na0H溶解所定容至 100 ml.A.2制备培养基
A.2.1培养基种类
分化增殖培养基：1/2MS(每1［.取1号母腋10 mI,取Ⅱ号、山号，IV号、V号、号丹液各5ml)附加 GA, 0. 1 mg/ L-~0. 5 mg/I, IBA 0. 1 mg/L. ~0. 5 mg/ L,BA 0. 5 mg/I~~1. 0 mg/ I,蔗糖 30 g/ 1..琼脂5g/1
生根培养基：1/2MS(每11.嵌1号母液10ml.,取Ⅱ号、血号、IV号。V号、И号母液各5ml.)附加IBA 0. 1 m/ 1-~0. 3 mg/ L(或 NAA 0. 05 mg/ L -~0. 2 mg/ L,IAA 0. 2 mg/ L-~0. 5 mg/ L),蔗糖15 g/ L,琼脂 5 g/ L..
A.2.2培养基制备
A.2.2.1根据所需培养幕和类和数量依次吸取T号M号母液，例如配1/2MS培养基2I.,则加入1号母液20n山，Ⅱ号～W号呼液各lomLA.2.2.2加入生长谢节剂。例如,BA的使用浓度为1.0mg/L,则配2L培养基加人20.0m浓度为1.0tng/10的BA液，
A.2.2.3加蒸露水定容，充分混句，用1.0mol/L盐酸或1.0tmol/LNa0H调pH至5.6~-5.8。A.2.2.4稍加热，放人琼脂，待其溶化后，加人蔗糖，充分搅拌溶解。A.2.2.5分装培养属，150ml.的-角瓶,每瓶可装40ml ~50ml,1[培养基可灌20瓶~-25瓶。使用月他养容器时，也应保持培养本的厚度为1.em：1.5cm，以确保试管尚行足够的生长空间，个月～2个月内培养基不下「裂。A2.2.6将三俏瓶封口包扎后，放人高压灭菌锅内，121℃、1.1kg/cum2消毒15min～20min。消毒完毕，放尽消毒锅中的热空气，记即敢出平激，冷却后即可接种试管苗。培养其制备好后，应尽快用究，若剩余，可置丁冰箱冷藏率中黑暗保存（保存期不宜超过2周），以减缓营养物质和植物生长调节剂的分解，葡菊组培快时，培养基中激素的浓度和种类成根据品种和试臀苗生长情进行适度谢整.以得最律效果，
小提示：此标准内容仅展示完整标准里的部分截取内容，若需要完整标准请到上方自行免费下载完整标准文档。