NY/T 2549-2014
基本信息
标准号： NY/T 2549-2014
中文名称：饲料中黄曲霉毒素B1的测定 免疫亲和荧光光度法
标准类别：农业行业标准(NY)
标准状态：现行
出版语种：简体中文
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标准分类号
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出版信息
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标准简介
NY/T 2549-2014 饲料中黄曲霉毒素B1的测定 免疫亲和荧光光度法
NY/T2549-2014
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标准内容
ICS 65.120
中华人民共和国农业行业标准
NY/T2549—2014
饲料中黄曲霉毒素B.的测定
免疫亲和荧光光度法
Determination of aflatoxin B, in feed-Imnunoaffinity fluorescencemethod2014-03-24 发布
2014-06-01实施
中华人民共和国农业部
本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。本标推由中华人民共和国农业部提出并归口，NY/T 2549—2014
本标准起草单位：中国农业科学院油料作物研究所、农业部油料及制品质量监督检验测试中心，本标推主要起草人：李培武、张文、胡小风、丁小霞、张奇、周海燕、陈小媚、唐晓情、张兆威、王督T
1范围
NY/T 2549—2014
饲料中黄曲霉毒素B，的测定免疫亲和荧光光度法本标准规楚了免疫亲和荧光光度法测定饲料中黄曲霉毒素B，的方法。本标准适用于饲料及饲料原料中黄曲舞毒素的测定。本标准黄曲霉毒素B，检出限为0.3g/kg2规范性引用文件
下列文件对丁本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注口期的版本适用于本文件。凡是不沌月期的引用义件.其最新版本（包括所有的修收单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格利试验方法3理
试样中黄曲链毒素B，与免疫亲和柱中固定相上抗体发生特异性结合：其他与抗体不发生免疫亲和反成的成分随流动相流出，利用甲醇使固定相上抗体变性，将固定相上抗体结台的黄曲震毒素巧洗脱：荧光定量检测，
4试剂
除非别有规定，仅使用分析纯试剂，4.1水，按膜GB/T6682中的要求，二级，4.2氯化汞(Hg(l）。
4.3硫酸奎宁((HN.OS)。
4.4甲醇CHO)。
4.5浓硫酸(H25()）
4.670%甲醇溶液：取70ml中醇（4.4)、加30ml.水（4.1)，混匀4.7黄曲霉毒素B1荧光增强剂：准确称2.72g氯化录（4.2），溶丁水中，定容至1.01.。4.81000ng/mL黄曲霉毒素B.标准溶液。4.9100ng/mL黄曲霉毒素B标准储备液：准确吸取黄曲等毒素标准溶液（4.8)1mL十10ml.容量瓶中,如甲醇是容。4℃叮保存3个刀。替告：
由于黄山需素毒性很强，试验人员应注意自我保扩。摄作时，应避免吸人、接触员曲霉毒素标准溶液。标准溶液配置应在通风橱内进行，工作时应戴眼镜、穿工作服、戴医用乳胶手套。凡接触黄面每毒素的容器，需浸人10次氯酸钠溶液12h以上。同时，为广降低接触黄曲霉毒素的机会，本标准鼓励直接购买并使用曲霉毒素的有证标准储备液。4.10黄曲霉毒素B：标阵T作液：分别准确吸取黄曲筛毒素B，标准储备液（1.9)0.00nL、0.01mL、C.05mL、C.25mI.,0.50ml.、1.00ml、3.00 ml.丁10 rmJ.容量瓶中,甲醇定容，分别相当于0.0ng/ml、0.1ng/mL,0.5hg/ml.2.5ng/ml..5.0ng/ml.、10.0ng/inl..30.0ng/tml.浓度标准T作溶液4.11黄曲霉毒素13，免疫亲和微柱：柱容量30ng+AFB免疫亲和柱与其他种类黄曲需寿素的交叉反应率均≤10%：
NY/T2549--2014
5仪器设备
5.1黄曲寄毒索荧光速测仪或荧光光度计：能在激发波长为（360士5）nm，检测波长为（440+5）nm条作下测定。
5.2析天平：越量0.1g，
5.3质机：转速大于等于20000r/min。5.4漩涡混合器。bzxZ.net
5.5恒温装置：(37.0±2.0)℃。5.6微量移液器：10μL-100μL，100L1000，5.7中速定性滤纸。
5.8玻璃纤维滤纸。
5.9泵流操作架或固相萃取装置。5.10分样筛：20日。
6分析步骤
6.1试样制备
样品粉碎至全部通过分样筛（5.10），充分混合。6.2提取
准确称取25.0g试伴十烧杯中，册入100.0rrL甲醇溶液（4.6)，用均质机（5.3）20000r/min提取2mi后-静置1 min,中速定性滤纸(5.7)过滤。取10 ml.滤液.用20 ml.水稀释.漩涡混合器(5.1)混勾，经玻璃纤维滤纸（5.8)过滤，备用，6.3纯化
将黄霉毒素B:免疫亲和微柱(4.11)与泵流操作架或固相萃取装置(5.9)连接，加人10.0ml.纯水平衡微柱.当微柱中仅余少量液体时，加人10.0ml.稀释后的提取液（6.2）.流速为1.5ml./min通过微柱：取10.mL水分两次淋洗，微柱中液体被抽干时.停止抽滤，弃去全部流出液。加1.0mL甲醇(4.4）丁微柱中，流速为1rnL/min.抽滤至微柱中液体全部流出：收集全部洗脱液于比色杯（光径为1cm),加入1. 0 ml.纯水,混勾待测。6.4标准曲线
将配制好的黄曲霉毒素1的标准工作液（4.10),在黄曲霉毒素荧光速测仪或荧北光度计(5.1)上-激发波长36nm、检测波长440nm条件下测量本底荧光值，再加人0.2ml.的荧光增强剂（4.7）.再次测量荧光值。将增强斥的荧光值与衣底荧光值的值与黄曲荐毒素B标准溶液液度建立标准曲线，6.5黄曲霉毒素含量测定
采川黄曲霍毒素荧光速测仪或荧光光度计（5.1)在激发波长360nm，捡测波长440nm条件卜测定待测液的荧光值，然后向比色杯中加人黄曲等毒素B，荧光增强剂(4.7)0.2mL混后-再饮测定其荧光值，将增强厉的荧光值与本底荧光值代人标准曲线.计笋得到测定液中黄曲毒素，含量，如样品中黄曲霉毒素B含量超过标准曲线范周.则稀释后再次测量。7结果计算与表示
试样中黄曲聋毒素B：含量以质量分数X计，数值以微克每下克(ng/kg)表示,按式(1)计算X_Vxn.
式中:
NY/T 2549—2014
从标准曲线上查得的测定液中黄曲需素B含量的数值，单位为纳克每毫升（nA/mL）：V样品测定液体积的数值，单位为毫升（m)；n——试样稀释倍数的数值：
—试样质量的数值，单位为.克（总）。计算结果保留到小数点后一位,
8精密度
8.1重复性
在重复性条件下，黄曲霉毒素B含量不人F10.0/kg时，两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的20%；黄曲霉毒素B，含量大于10.Cμg/kg时.两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的15%
8.2再现性
在再现性条件下，黄曲案毒素B1含量不大于10.0u/kg时.两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的30%：黄曲霉毒素3含量大于J0.0/kg时-两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的20%。
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中华人民共和国农业行业标准
NY/T2549—2014
饲料中黄曲霉毒素B.的测定
免疫亲和荧光光度法
Determination of aflatoxin B, in feed-Imnunoaffinity fluorescencemethod2014-03-24 发布
2014-06-01实施
中华人民共和国农业部
本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。本标推由中华人民共和国农业部提出并归口，NY/T 2549—2014
本标准起草单位：中国农业科学院油料作物研究所、农业部油料及制品质量监督检验测试中心，本标推主要起草人：李培武、张文、胡小风、丁小霞、张奇、周海燕、陈小媚、唐晓情、张兆威、王督T
1范围
NY/T 2549—2014
饲料中黄曲霉毒素B，的测定免疫亲和荧光光度法本标准规楚了免疫亲和荧光光度法测定饲料中黄曲霉毒素B，的方法。本标准适用于饲料及饲料原料中黄曲舞毒素的测定。本标准黄曲霉毒素B，检出限为0.3g/kg2规范性引用文件
下列文件对丁本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注口期的版本适用于本文件。凡是不沌月期的引用义件.其最新版本（包括所有的修收单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格利试验方法3理
试样中黄曲链毒素B，与免疫亲和柱中固定相上抗体发生特异性结合：其他与抗体不发生免疫亲和反成的成分随流动相流出，利用甲醇使固定相上抗体变性，将固定相上抗体结台的黄曲震毒素巧洗脱：荧光定量检测，
4试剂
除非别有规定，仅使用分析纯试剂，4.1水，按膜GB/T6682中的要求，二级，4.2氯化汞(Hg(l）。
4.3硫酸奎宁((HN.OS)。
4.4甲醇CHO)。
4.5浓硫酸(H25()）
4.670%甲醇溶液：取70ml中醇（4.4)、加30ml.水（4.1)，混匀4.7黄曲霉毒素B1荧光增强剂：准确称2.72g氯化录（4.2），溶丁水中，定容至1.01.。4.81000ng/mL黄曲霉毒素B.标准溶液。4.9100ng/mL黄曲霉毒素B标准储备液：准确吸取黄曲等毒素标准溶液（4.8)1mL十10ml.容量瓶中,如甲醇是容。4℃叮保存3个刀。替告：
由于黄山需素毒性很强，试验人员应注意自我保扩。摄作时，应避免吸人、接触员曲霉毒素标准溶液。标准溶液配置应在通风橱内进行，工作时应戴眼镜、穿工作服、戴医用乳胶手套。凡接触黄面每毒素的容器，需浸人10次氯酸钠溶液12h以上。同时，为广降低接触黄曲霉毒素的机会，本标准鼓励直接购买并使用曲霉毒素的有证标准储备液。4.10黄曲霉毒素B：标阵T作液：分别准确吸取黄曲筛毒素B，标准储备液（1.9)0.00nL、0.01mL、C.05mL、C.25mI.,0.50ml.、1.00ml、3.00 ml.丁10 rmJ.容量瓶中,甲醇定容，分别相当于0.0ng/ml、0.1ng/mL,0.5hg/ml.2.5ng/ml..5.0ng/ml.、10.0ng/inl..30.0ng/tml.浓度标准T作溶液4.11黄曲霉毒素13，免疫亲和微柱：柱容量30ng+AFB免疫亲和柱与其他种类黄曲需寿素的交叉反应率均≤10%：
NY/T2549--2014
5仪器设备
5.1黄曲寄毒索荧光速测仪或荧光光度计：能在激发波长为（360士5）nm，检测波长为（440+5）nm条作下测定。
5.2析天平：越量0.1g，
5.3质机：转速大于等于20000r/min。5.4漩涡混合器。bzxZ.net
5.5恒温装置：(37.0±2.0)℃。5.6微量移液器：10μL-100μL，100L1000，5.7中速定性滤纸。
5.8玻璃纤维滤纸。
5.9泵流操作架或固相萃取装置。5.10分样筛：20日。
6分析步骤
6.1试样制备
样品粉碎至全部通过分样筛（5.10），充分混合。6.2提取
准确称取25.0g试伴十烧杯中，册入100.0rrL甲醇溶液（4.6)，用均质机（5.3）20000r/min提取2mi后-静置1 min,中速定性滤纸(5.7)过滤。取10 ml.滤液.用20 ml.水稀释.漩涡混合器(5.1)混勾，经玻璃纤维滤纸（5.8)过滤，备用，6.3纯化
将黄霉毒素B:免疫亲和微柱(4.11)与泵流操作架或固相萃取装置(5.9)连接，加人10.0ml.纯水平衡微柱.当微柱中仅余少量液体时，加人10.0ml.稀释后的提取液（6.2）.流速为1.5ml./min通过微柱：取10.mL水分两次淋洗，微柱中液体被抽干时.停止抽滤，弃去全部流出液。加1.0mL甲醇(4.4）丁微柱中，流速为1rnL/min.抽滤至微柱中液体全部流出：收集全部洗脱液于比色杯（光径为1cm),加入1. 0 ml.纯水,混勾待测。6.4标准曲线
将配制好的黄曲霉毒素1的标准工作液（4.10),在黄曲霉毒素荧光速测仪或荧北光度计(5.1)上-激发波长36nm、检测波长440nm条件下测量本底荧光值，再加人0.2ml.的荧光增强剂（4.7）.再次测量荧光值。将增强斥的荧光值与衣底荧光值的值与黄曲荐毒素B标准溶液液度建立标准曲线，6.5黄曲霉毒素含量测定
采川黄曲霍毒素荧光速测仪或荧光光度计（5.1)在激发波长360nm，捡测波长440nm条件卜测定待测液的荧光值，然后向比色杯中加人黄曲等毒素B，荧光增强剂(4.7)0.2mL混后-再饮测定其荧光值，将增强厉的荧光值与本底荧光值代人标准曲线.计笋得到测定液中黄曲毒素，含量，如样品中黄曲霉毒素B含量超过标准曲线范周.则稀释后再次测量。7结果计算与表示
试样中黄曲聋毒素B：含量以质量分数X计，数值以微克每下克(ng/kg)表示,按式(1)计算X_Vxn.
式中:
NY/T 2549—2014
从标准曲线上查得的测定液中黄曲需素B含量的数值，单位为纳克每毫升（nA/mL）：V样品测定液体积的数值，单位为毫升（m)；n——试样稀释倍数的数值：
—试样质量的数值，单位为.克（总）。计算结果保留到小数点后一位,
8精密度
8.1重复性
在重复性条件下，黄曲霉毒素B含量不人F10.0/kg时，两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的20%；黄曲霉毒素B，含量大于10.Cμg/kg时.两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的15%
8.2再现性
在再现性条件下，黄曲案毒素B1含量不大于10.0u/kg时.两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的30%：黄曲霉毒素3含量大于J0.0/kg时-两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的20%。
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