NY/T 546-2015 猪传染性萎缩性鼻炎诊断技术 NY/T546-2015 标准压缩包解压密码：www.bzxz.net

ICS 11.220
中华人民共和国农业行业标准
NY/T 546—2015
代替Y/T546—2002
猪传染性萎缩性鼻炎诊断技术
Detection of infectious atrophic rhinitis forswine
2015-05-21发布
2015-08-01实施
中华人民共和国农业部
本标准按照GB/1＇1.12009给出的规则起草。2002《猪传染性萎缩性异炎诊断技术》。本标准代替NYT546
本标准与NY/T546—2002相比、病原部分增加了病原菌的PCR诊断方法。本标准由中华人民共和国农业部提毕。本标准由全国动物防疫标准化技术委员会(SAC/TC181)山口。本标准起草单位：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所。本标推士要起草人：彭发泉.杨旭夫、苑士祥、干春水。本标准的历次版木发布情况为：-NY/I 546—2002。
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1范围
猪传染性萎缩性鼻炎诊断技术
本标准规定了猪传染性菱缩性鼻炎的诊断标准及技术方法。本标适用于猪传染性萎缩性炭的诊断和检疫2规范性引用文件
NY/T 546-2015
下列文件对十本文件的应用是必不川少的。凡是注日期的引用文件，仅注且期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件.其最新版本（包括所有的修改单）适于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和实验方法GB19489实验室生物安个通用要求GR/T27401实验室质量控制规范动物检疫3术语和定义
下列术语和定义适用丁本文件，3.1
支气管败血波氏杆菌bordetellahronchiseptica波化杆菌属。
产毒素性多杀巴氏杆菌toxigenicpasteurella muttocida巴氏杆菌属：
4缩略语
下列缩略语适用于本文件。
AR:atrphic rhinitis菱缩性鼻炎。DNA:deoxyribanucleic acid脱氧核糖核酸。NLHMA：新莓素洁霉素血液马琼脂。HFMA:血红素呋喃唑酮改良麦康凯琼脂PBS:phosphatebuffersolution磷酸盐缓冲液。PCRpolytnerasechzinreaction聚合酶链式反应。Taq 酶:taq DNA polymeraaeTaq DNA聚合酶，5临床诊断
5.1流行特点
猪传染性蒸缩性鼻淡是出于仔猪生后早期在鼻腔感染支气管败血波氏杆菌「机菌或其厉重复感染产毒素性多杀氏杆菌（土要为英膜型，也有莱膜A型）引起的，这两种致病菌均产生细胞内皮肤坏死毒素，在感染过程中释放，穿透被破坏的鼻黏膜屏障，作用于牛长迅速的仔猪鼻甲骨及鼻中隔纽织，引起骨吸收，骨坏死及胃再造障碍变化，并可引起身骨恪钙代谢障碍和淋巴免疫系统抑制。致病力不同的菌株产生素的能力也不同；毒素的致病作用具有明显的年龄和剂量依赖性。病菌迪常通过病猪和带菌猪的鼻汁，经直接或问接接触而传播。支气管败血波氏杆菌越在生后早龄感染，病变越重。1月1
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龄以后懋染时、多为中等或轻症病例.11鼻印容易再生修复；2月龄～3月龄时感染·仅呈纠织学的轻症经过，不起肉眼的鼻甲骨萎缩病变。支气管败血波低杆菌引起的穿用骨萎缩，只在少数严重病例伴有鼻部变形变化。多杀巴氏杆菌的穿腔感染在猪的凡龄上晚支气管败血波氏杆菌。产母性多杀巴氏杆菌菌株尽管在实验室人工感染证明在辅助刺激下可单独引起猪的萎缩性鼻炎，但至今在疫群仍发现是支气管败血波氏杆菌1相菌的重复或继发感染病原菌。产毒素性多杀巴氏杆菌菌株与支气答败血波氏杆菌1相菌菌株重复或继发感染，可在更勺长的仔猪引起不可逆的持续的鼻甲骨萎病变「即所谓“进行性萎缩性炎”pragressiveatrophicrhinitis）」.在疫群中产生较多的鼻部变形病猪·尤以早龄感染两种菌的强毒力株时为严重。饲养管埋理和环境应激因素及其他继发病原，均可影响行猪的发病程度。5.2临床症状
5.2.1仔猪群
有：定数的仔猪流汁、流沮、经常喷嚏、鼻塞或咳嗽，但无热：个别身汁混有血液。一些竹猪发育迟滞·犬齿部位的上唇侧方肿胀，5.2.2育成猪群和成猪群
鼻塞,不能良时问将鼻端留在粉料中采食；帕l+铜槽沿染有而液。a
两侧内服角下方颊部形成“润斑”。b
景部利颜面变形
1）上额短缔·前齿咬合不齐（评定标谁：下切齿在上中切齿之后为阴性，反之为阳性}；端向侧弯曲或鼻部向侧正斜：
3）鼻背部横皱褶逐渐增；
）眼上缘水平上的算梁变平变宽。d）伴有牛长欠佳，
5.2.3检疫对象猪群
发现有上述征候群，可以临床上初步诊断猪样有支气管败血波氏杆菌1相菌的传染或与产毒素性多杀巴氏打菌的混台感染,特别是5.2.2中c)具有本病临床指征意义.需进行检菌、血清学试验及病理解剖检查，予以确诊
5.3病理变化
5.3.1户体外观检查
主要检查有无异部和额面变形及发退顿，记录其状态和程度，对上颚短缩可以做定性，下中切齿在上中划齿之后判为\”，反之判定为十”；测量上中切齿与下中切齿的离元程度，如3㎡m或+12mm 分别判定为.rF常或阳性。
5.3.2算部横断检查
5.3.2.1查鼻腔是在鼻部做1个3个横断,检查横断面。部的标准横断水平在工题第一前白齿的前缘（此部巾管卷曲发育最充分）：先除去术部皮肉、然后用锐利的细齿手或钢锯以垂直行向横断部。可再向前（通过上颚犬齿)或问后做第和第二新的横断,其距离大猪为1.5cm~-2cm,哺乳仔猪约0. 5cm
5.3.2.2为便于检查断面.先川脱脂棉轻轻除去钨屑，如果拍照，应将鼻道内的凝血块等填物除人，使断而构造清晰完整。必要附，峻水纸峻除休，5.3.2.3检查鼻道内分泌物的性状和数及黏膜的变化(水肿、发炎.出血、腐烂等）。5.3.2.4主要检查鼻甲骨、鼻隔和腔周围肯的对称、完整性、形态和质地（变形,骨质软化或疏松、萎缩以个消失)以及侧鼻腔的容积。如果需要、可以测量鼻中隔的倾斜或弯曲程度、鼻腔纵径及两侧鼻腔的最人横径。除肉限检查外：应对鼻巾肯进行触诊，以确定卷曲及其基础部骨板的质地（正常骨板坚破，蒸缩者软化以至消失）。鼻Ⅲ骨萎缩士要发牛于下鼻叫骨，特别是腹卷曲。鼻腔标准横断的2
萎缩性鼻炎分级标准见附录A。
5.3.3肺部检查
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少数病竹猪伴有波氏杆菌性支气管肺炎。肺炎区主要在于肺前叶及后叶的腹面部分，特别足肺门部附近·也叮能散在于肺的背面部分，病变至斑块状或条状发生。急性死亡病例均为红色肺炎灿。5.3.4具有鼻甲骨萎缩病变的病猪不论有或无临床穿部弯曲等颜面变形症状，判定为萎缩性鼻炎病猪，6实验室诊断
6.1仪器、材料与试剂
除特别说明以外，本标准所用试剂均为分析纯.水为符合（13/T6682的灭菌双蒸水或超纯水。6.1.1试剂
蛋白陈、琼脂粉、氯化钠、氯化钾、葡萄糖、乳糖、二号肌盐、巾性红、呋喃唑酮二甲基甲酰胺、牛或绵羊红细胞裂解液、丁琼脂、脱纤牛血、硫酸新霉素、盐酸洁霉素.多型蛋白麻、牛肉膏、磷酸二：氨钾、磷酸氢.钠、硫代硫酸钠、硫酸亚铁铵、混合指示剂、尿素、酸性品红、马铃薯、H油、盐酸、dVIPs、Tag酶6.1.2材料
无菌棉拭子、无菌1.5mL离心管、无菌试诚管、PCR管、一次性培养血。6.2病原分离
由猪鼻腔采取鼻黏液，同时进行支气管败血波氏打菌1相菌及产毒素性多杀巴氏杆菌的分离。猪群检疫以1周龄～16周龄特别是4周龄-~8周龄猪的检菌率最高。6.2、1鼻黏液的采取
6.2.1.1由两侧鼻腔采取鼻黏液，可用一-根棉头拭了向时采取两侧募黏液，或每侧穿黏液分别用一根棉头拭广菜胶：
6.2.1.2扰子的长度和粗细视猪的大小而定，应光滑可弯曲，出竹皮等材料前成，前部饨圆，缠包脱脂棉，装人容器.高压火菌。
6.2.1.3小猪可仰卧保定，大猪用鼻拧子保定。用柠么多余酒精的酒精棉先将鼻孔内缘清拭.然后清拭鼻孔周围。
6.2.1.4拭子插入兜孔后，先通过前庭弯曲部，然后白达鼻道中部，旋转执子将穿分秘物取出。将拭了插人灭菌空试管中(不要贴壁推进),用试管棉塞将拭子杆上端固定。6.2.1.5夏天不能立即涂抹培养基时，应将拭子试管立即放入冰箱或冰瓶内。鼻黏液应在当天最好在儿小时内涂抹培养基，拭了仍保存于4℃冰箱备复检。6.2.1.6采取鼻汁时病猪往往喷嚏，术者应汁意消毒手，防止材料交叉污染：6.2.1.7解剖猪时，成采取免腔后部（至筛板前壁)和气管的分泌物及肺组织进行培养，鼻锯开术部及鼻锯应火焰消毒，由鼻断端插人拭子直达筛板，采取两侧鼻腔后部的分泌物。气管出门插人拭子达气管下部.在气管壁旋转拭子取出气管上下部的分泌物。肺在肺门部采取肺组织，如有肺炎并在病变部采取组织块；也可以用拭子插入肺断面采取肺汁和碎组织，6.2.2分离培养
所有病料都直接涂抹在已干燥的分离平板上。分离支气管败血波长杆菌使用血红素吹响唑酮改良友康凯琼脂（HFMA)平板（配方见附录B)，分离多杀巴氏杆菌使用新霉素洁霉素血液*5丁琼脂（N1.H-MA）板（配方见附录（)。棉拭子应尽量将全部分泌物浓厚涂抹丁平板表面.组织块则将各断面同样浓厚涂抹。重要的检疫，如种猪检疫对每份腔病料应涂抹每种分离平板2个，不同种分离平板不能混涂同一拭了（因抑菌剂不同）。对伴有肠道感染（腹泻)的或环境严重污染的猪群，每份鼻腔病料可用3
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一个平板做浓厚涂抹-另一个平板做刻线接种，即先将棉拭于病料在平板的一角做浓厚涂抹,然后以铅閣做划线稀释接种。
6.2.2.1猪支气管败血波氏杆菡的分离培养将接种的FHMA平板于37°.培养40h~-72l,猪支气管败血波氏杆菌集落不变红.直径为1mm~2mTm.整，光滑、隆起、透明，咚呈茶色，较人的集落中心较厚，战茶黄色对光观察旱强蓝色，用支气管败血波氏杆菌（K抗血清做活菌平板凝集反应呈迅速的典型凝集，有些例集落黏稠或十韧.在玻片上不能做成哟勺菌液,须移植。代才能正常进行活随平板凝集试验，未发现典型集落时.对所有可集落,均斋做沾菌平板凝集试验，以防遗漏，如菌落小，可移柏增菌后进行检脊。如平板上有人肠杆菌类细菌（变红、粉红或不变红）或绿脓杆菌类细菌（产生或不产生绿色素们不变红）覆盖，应将冰箱保存的棉拭广再进行较稀的涂抹或划线培养检查·战重新采取劳江培养检查板目的菌集落计数分级见附录D。6.2.2.2产毒素性多杀巴氏杆菌的分离培养将接种的NL.HMA平板十37℃培养I8h~-24l,根据菌落形态和荧光结构、挑取可凝集落移植鉴定，多亲凸氏杆菌集落直径约1mm~-2mm-圆整、光滑、隆起、透明，集落或呈黏液状融合；对光观察有明显荧光：以15\折射光线于赔室内在实休显微镜下扩大约10倍观察，呈特征的橘红或妖红色光泽，结构均质，即F)虹光型或F)类似菌落。间有变异型菌落，光泽变浅或无光泽，有粗纹或结构发粗.或夹有浅色分化扇状区等。
平板目的菌集落计数分级见附录D。6.3分离物的特性鉴定
6.3.1猪支气管败血波氏杆菌分离物的特性鉴定6.3.1.1一般特性鉴定
革兰氏阴性小杆菌，鼠化和发酵（O)/F)试验阴性，即非氧化非发酵严格好氧菌，具有以下生化特性一般 37℃培养 3d5d记录最后结果）：糖管：包括乳糖、葡萄携、点糖在内的所有类不氧化、不发酵（不酸、不产气），迅速分解蛋白at
炼期显产碱.液面有厚菌膜；
不产生靛基质；
r）不产牛硫化氢或轻微产生：
MR试验及VP试验均阴性
e）还原硝酸盐；
f）分解尿素及利用橡酸,均旱明显的阳性反应；g
不澈化明腰：
h）石蕊牛乳产碱不消化
1）有运动性，在半固体平板表面呈明显的膜状扩散生长，扩散膜边沿比较光滑；但0.05为~0.1%琼脂半固体高层穿刺37℃培养，只在表面或表层生长，不呈扩散生长。6.3. 1.2菌相鉴定
将分离平板上的典型单个菌落划种于绵羊血收良鲍姜氏琼脂（配方见附录E）板（凝结水已-十燥）上，」37℃潮凝温箱中培养40H~-451，1相菌落小，光滑.乳门色，不透明·边沿整齐，降起品半圆形或珠状，钩取时质地致密案软，易制成均勾菌液，幽落周用有明显的β溶血环，菌体呈整齐的革兰氏阴性球杆状或球状，活菌玻片凝集定和试验.对K抗血清呈迅速的典型凝集，对（）抗血清完全不凝集。「相菌感染病例在板上，位不出现中间相和Ⅲ相菌落、叫相菌落扇平，光消，透明度天，旱灰白色·比1相菌落大数倍·质地较稀软，不溶面。活菌玻片凝集定相试验，刘（抗面清呈明显凝集：对K抗血清完全不凝集。中间相菌落形态在「相及Ⅲ相之间，刘对K及（)抗血清都凝集。中间相及川相菌，以杆状为-1
6.3.2产毒素性多杀巴氏杆菌分离物的特性鉴定6.3.2.1—般特性监定
6.3.2.1.1革兰氏阴性小杆菌呈两极染色，不溶血，无运动性。具有以下生化特性：NY/T 546—2015
a）糖管：对蒸糖、葡萄糖、木糖、日露醇及果糖产酸；对乳糖、麦芽糖、刚拉伯糖及杨苷不产酸：b）VP、MR、尿素酶、枸檬酸盐利用、明胶液化、右蕊牛乳均为阴性；c）不产生硫化氢；
tl）硝酸还原及靛基质产生均为阳性：6.3.2.1.2对分离平板上的川疑菌落，也可先根据三糖铁脲半固休高层(配方见附录F)小管穿刺生长特点进行筛检：
将单个集落以接种针由斜面中心直插入底层，轻轻由原位抽出.再在斜面上轻轻涂抹，37℃:斜放培养18h，多杀巴氏杆菌生长特点：a）沿穿刺线呈不扩散生长：高层变橘黄色；b）斜面呈薄苔生长，变橘红或橘红黄色；c）凝结水变橘红色，轻浊生长，无菌膜：d）不产气、不变黑，
6.3.2.2皮肤坏死毒素产生能力检查体重350g～400g健康豚鼠，背部两侧注射部剪毛（注意不要损伤皮肤），使用1ml.注射器及4号~6号针头，皮内注射分离株马丁肉汤37℃36h（或36h~72h）培养物0.1mL。注射点距背巾线1.5c.各注射点相距2crn以上。设阳性及阴性参考菌株和同批马丁肉汤注射点为对照。并在大腿内侧肌内注射硫酸庆大霉素1j1U(1mL），注射后24h、48h及72h观察并测量注射点皮肤红肿及坏死区的大小。坏死区直径1.0cm左右为皮肤坏死毒素产生（DNT)阳性：0.5cm为川疑；无反应或仪红肿为阴性，可疑须复试。阳性株对照坏死区直径应>1.0cm，阴性株及马丁汤对照应均为阴性。阳性结果记为NT，性结果记为I>NT-。6.3.2.3英膜型简易鉴定法
6.3.2.3.1透明质酸产生试验（改良Carter氏法）在0.2%脱纤牛血马丁琼脂平板上于中线以直径2mm铂圈均匀横划·条已知产生透明质酸嗨的金黄色葡萄球菌（ATC25923)或等效的链球菌新鲜血斜培养物，将每株多茶巴氏杆菌分离物的而斜过夜培养物，与该线呈直角于两侧划线，各均匀划种一条同样宽的直线。并设英膜A型及D型多杀巴氏杆菌参考株做对照。37℃培养20h.A型株临接葡萄球菌菌菩应”牛生长抑制区。此段菌兴明显薄于远端未抑制区.荧光消失，长度可达1ctm，远端菌苔生长卡厚，特征虹光型（FO型）不变，两段差别明显，D型株则不产生生长抑制区，F)型虹光不变。个别A型分离物不产生明显多量的透明酸。本法及吖啶黄试验时判定为D)型，间接血凝试验(Sawada氏法)则判定为A型，6.3.2.3.2吖啶黄试验（改良Carter氏法）分离株的0.2%脱纤牛血马了琼脂18h~24h培养物，刮取菌苔，均勾悬浮十pH7.00.01mol/L溝酸盐缓冲生理盐水中。取0.5ml.细菌芯液加入小试管中，与等容量0.1%中性吖啶黄蒸馅水溶液振操混合，空温静置。1）型菌叫在5min后自凝，出现人块絮状物，30min后絮状物下沉.上消透明。其他型菌不出现或仅有细小的颗粒沉淀，上清浑浊。6. 4PCR 检测
6.4.1样品处理
6.4.1.1鼻或气管拭子
将鼻或气管拭厂权人1m.0.(）triol/I.PIS(pH7.4)缓冲液中（配方见附录G)，反复挤压，将混志NY/T 546--2015
澈作为聚合酶链式反应(FCR)的模板6.4.1.2肺组织
将肺组织样品剪碎.取1g加人1 mL 0.C:mol/1.FBS缓冲液中研磨后,用双层灭菌纱布过滤，收集过滤液于-2 mL 火菌离心管,4℃ 750C g 离心15 min。充上清-收集沉淀-用 0.1ml.PBS缓冲液重恐。
6.4.2PCR检测
6. 4. 2. 1反应体系(50 μL)
1oXFCR huff:r(含 Mg)
脱氧三磷酸核百酸混合波（tlNIPs.2C0umol/1.）上游物（10pmol/1）
下游引物(10μol/)
模板（十述制备样品）
无菡超纯水
TuyNA聚合酶(5 U/uL）
样品检测时.同时要设阳性对照和阴性对照。性对照模板为细菌的基因组·例性对照为不含模板的反应体系。检测所用引物序列见附件H，6.4.2.2PCR反应程序
所有程序均95预变性5mm，然后扩增35个循环，如下：鉴定支气管败血波氏杆菌：（94%30s，55℃30s.72℃20s）35个循坏.72℃5mi；）！
鉴定多杀巴氏杆菌：（94℃30s.55℃1min，72℃30s）35个循环.72℃7minh)
鉴产毒素多杀巴氏杆菌：（9430 $.50%1min，72℃1min)35个循环,72℃7min；d）鉴定A,D型多杀凹氏杆菌:(9℃30 s,56℃30 s,72℃1min)35个循环,72℃10min6. 4.2. 3电泳检测
PCR反应结束取扩增产物5uL(包括被检样品、阳性对照、阿性刘照)与1ul上样缓冲液混合：同时取DL-2000DNA分子质量标准5I点样于1%琼脂糖凝胶巾，100V电泳30min。6. 4. 3PCR 试验结果判定
6.4.3.1将扩增产物电泳后用凝胶成像仪观察:DNA分子质量标准、阳性对照、阴性对照为如下结果附试验方成立：否卿应量新试验a】DL.-2000[0NA分子质量标准电泳道.从上到下依次出现2000bp、1009bp、750bp、500bp、250br、100bp共6条清晰的条带：阳性样品泳道出现一条约187bp清晰的条（猪支气管败血波氏杆菌）.157bp的条带（多茶b
巴氏杯菌）.812bp条带（产毒素多杀巴氏杆菌）：1050bp（A型多杀巴氏杆）或618bp条带（D型多杀已氏杆菌）；
c）阴性对照泳道不出现条带。
6.4.3.2被检样品结果判定
在同一块凝胶板上电泳后，当DNA分了质量标推，各组对照同时成立时，被检样品电泳道出现一条187bp的条带,判为猪支气管败血波氏杆菌阳性（1）；被检样品电泳道出现-条457bp的条带,判为多杀巴氏杆杯函阴性（十）；被检样品电泳道现一条812hp的条带判为产毒索多杀巴氏杆菌阳性（十）；被检样品电泳适山现--条1门切的条带，判为A型多条巴氏杆菌阳性（十）；被检样品电球道出现一条648 hp的条带,判为D)型多杀巴氏杆菌阳性（十）;被检样品泳道没有出现以上任一条带,判为阴性（一）。阳性和阴性对照结果不成立时,成检查试剂是否过期、污染等.试验需重做。结果判定参见附录1
6.5血清学检测
6.5.1使用范围
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6.5.1.1本试验足使用猪支气管败血波氏杆菌1相菌福尔马林死菌抗原，进行试管或平板凝集反成检测感染猪血清中的特异性K凝集抗体，其中，板凝集友成适用对本病进行人批量筛选试验·试管凝集反应作为定性试验
6.5.1.2哺乳尽期感染的仔猪群，白1几龄左右逐渐出现可检出的K抗体，到5月龄~~8月龄期间，阴性率可达90%以上，以后继续保持附性，最高K抗体价可达1：320～640或更高：3周龄以上的猪：般可在感染后10 d-~14 出现K抗体。6.5.1.3感染母猪通过初乳传递给仔猪的K抗体，一般在出生后1个月-~2个月内消失；注射过猪支气管败血波氏杆菌菌苗的母猪生下的仔猪，则被动抗体价延级消失。6.5.2试验材料
6.5.2.1抗原按说明书要求使用。6.5.2.2标准阳性和阴性对照血清按说明书要求使用。6.5.2.3被检血清必须新鲜无明品蛋白凝固，无济血现象和无恼败气味。6.5.2.4稀释液为pH7.0磷酸盐缓冲盐水。配方为：NaaHI().·12H2.4g（或NaIIP).1.2g），NaCI6.8g，KH2POU.7k蒸馏水1000mL，加温溶解.两层滤纸滤过，分装，高压灭菌。6.5.3操作方法及结果判定
6.5.3.1试管凝集试验
6.5.3.1.1被检血清和阴、阳性对照血消同时置于56℃水浴箱中火能30min6.5.3.1.2血清稀释方法：每份血清用一列小试管（口释8mtm~10mm）,第一管加人缓冲盐水C.8mL,以后各管均加入C.5rnL,加被检血清C.2mL于第一管中。换另一支吸管，将第管稀释血清允分混勾.吸取0.5ml.加人第二管-如此用同一吸管稀释，直至最后，管：取出0.5mI.弃去。每管为稀释心清0.5ml.。一般稀释到1：80.大批检疫时川稀释到1：40阳性对照血清稀释到1：160~-1：320:阴性对照血清垒少稀释到1：10。6.5.3.1.3向上述管内添加T作抗原0.5mL，振荡.使血清和抗原充分混匀。6.5.3.1.4放人37℃温箱18h-~20h。然后，取出在案温静置2，记录每管的反应。6.5.3.1.5每批试验均应设有阴、阳性血清对照和抗原缓冲盐水对照（抗原加缓冲盐水C.5mL）。6.5.3.1.6结果判定：
*11「”：表示100%菌体被凝集，液体完全透明，管底覆益明显的伞状凝集沉淀物。“11”：示75%菌体被凝集，液体略呈混泌，管底伞状凝集沉淀物明显。11：表示50%菌体被凝集。液体呈中等程度混浊，管底有中等量伞状凝集沉淀物！“”：表示25%菌体被凝集，液体不透明或透明度不明显，有不太显著的伞状凝集沉淀物。“一”：表示菌体无凝集。液体不透明，无仟何凝集沉淀物。细菌可能沉于管底，但光滑圆坨状，振荡时旱均勾混独。
当抗原缀冲盐水对照管、阴性血清对照管均呈阴性反应，阳性血清对照告反应达到原有滴度时·被检血清稀释度≥10出现”，「\以上，判定为猪支气管败血波氏杆菌阳性反应血清。6.5.3.2平板凝集试验
6.5.3.2.1被检血清和阴、阴性对照血清均不稀释：以不加热灭能。6.5.3.2.2丁清洁的玻璃板或玻璃平ⅢL上，用玻璃笔划成约2cm2的小方格，以「ml.吸管在格内加-小滴血清（约0.03mL），再充分混合一铂圈（直径8mm）抗原源液，轻轻摇动玻璃板或玻璃平血，十室温（20℃~25℃）放置2mim，室温在20℃以下时，适当延长至5min。NY/T546—2015
6.5.3.2.3每次平板试验均应设有阴、附性血清对照和抗原缓冲盐水对照，6.5.3.2.4结果判定：
“「·”表示100%菌体被凝集：抗原和血清混合后，2min内液滴中出现大凝集块或颗粒状凝集物，液体完全清亮：
\一十十”：表示约75头菌体被凝集，在2mim内液滴有明显凝集块，液体几乎完全透明。“一十”：表示约0%菌体被凝集。液滴中有少量可见的颗粒状凝集物，出现较迟缓，液休不透明。“一”：衣示25%以下菌体被凝集。液滴中有很少量仅仅可以看出的粒状物，山现迟缓，液休混浊。“”：示菌体尤任何凝集。液滴均勾混浊。当阳性血清对照旱“十一十十”反应，阴性血清和抗原缓冲盐水对照呈“一\反虚时：被检血清加抗原出现”：「\到”十++\反应,判定为猪支气管败血波氏杆菌阳性反成血清，“一十\反应判定为似，“「\至”“反应判定为阴性。7结果判定
对猪群的检疫成综合减川临床检查、细菌检查及血清学检查，并选择样品病猪作病理解剖捡查。检疫猪群诊断有鼻漏带血、泪斑、鼻案、喷嚏，特别有鼻部弯曲等颜面变形的临床指征病状·腔检出支气管败血波氏杆菌1相菌及/或产毒素性多杀凸氏杆菌，判定该猪群为传染性萎缩性兴炎疫群。具有鼻甲骨菱缔病变，无论有或无旁部弯曲等症状的猪，诊断为典型病变猪。检出支气管败血波氏杆菌1相菌及/或产毒素性多杀凹氏杆菌的猪，诊断为病原菌感染，排菌猪。检出猪支气管败血波氏杆菌K集抗体的猪，判定为猪支气管败血波氏杆菌感染血清阳转猪。疫样中的检菌及血清阴性的外观健康猪·需隔离多次复，才能做最后阴性判定。A.1正常(\_\)
附录A
（规范性附录】
鼻腔标准横断面的萎缩性鼻炎(AR)分级标准NY/T546—2015
两侧鼻甲骨对称，骨板竖硬，止常占有鼻腔容积（问腔正常），鼻中隔正直。两侧鼻腔容积对称.鼻腔魏径大丁横径。
A.2可疑(“2\)
鼻巾肯形态异常（变形）、不对称，不完全占有鼻腔容积。卷曲特别是腹卷曲疑有菱缩，但肉眼不能判定，鼻中隔或有轻度斜。
A.3轻度萎缩(\+\)
一侧或两侧卷曲主要是腹卷曲轻度或部分萎缩相应间腔加大；或卷曲变小，卷度变短，骨板变粗相应间腔增人。也有轻度菱缩和变粗同时存在的病例。或伴有鼻中隔轻度倾斜或弯曲。表现出两侧或背，腹卷曲及其相应间腔的轻度不对称,A.4中等萎缩(\++”)
腹卷曲基本萎缩，背卷曲部分萎缩，A.5重度菱缩(\+++\)
卷曲完全菱缩，背卷曲大部分菱缩。A.6完全萎缩(\++++”)
背卷曲及腹卷曲均完全菱缩。
甲骨中等划完全菱缩的病例，间或伴有鼻中隔不同程度的查斜和曲，两侧另腔容积不对称或鼻腔的横径大于纵砼。严重者腔周围骨(鼻骨、上题骨)可能菱缩变形。卷曲萎缩明显以至消失者不难判定，但是腹卷册的轻度菱缩有时难以判定，且易与发台不全混滑，卷曲往往只有变彤而看不到菱缩。甲仍轻度萎缩与发育不全的鉴别：腹鼻甲骨发育不全是腹卷曲小，卷曲不个，其呈色钩状.们骨板坚硬，儿乎正常占据鼻胜容积，两侧对称，其他鼻腔结构正常。如背卷曲同时变形，疑有萎缩，算中隔倾斜.则分级为\？”
NY/T 546--2015
B.1成分
附录B
（规范性附录”
血红素呋喃唑酮改良麦康凯琼脂(HFMA)培养基配制方法B.1.1基础琼脂(改良麦康凯琼脂)蛋白陈L日本人五牌多型蛋陈（Pulypeplone）或（xid牌胰蛋白豚(Tryplune）氯化钠
琼脂粉（肯岛)
葡萄糖
一号胆盐（xoid）
中性红
蒸馏水加至
0.003(1%水溶液3mL/L)
1 000 mL
加热溶化,分装。11u℃20i.pH7.0~～7.。培养基呈淡红色。贮存室温或4℃冰箱备用。B.1.2添加物
1不呋唑酮二甲基甲髋胺溶液
10%牛或绵羊红细胞裂解液
0.c5mL/100tmL（呋喃唑酮最后浓度为5ug/mL)n(最后浓度为：「000)
1℃冰箱保存备用。峡喃唑阐一甲基甲酰胺溶液临用时加热溶解。B.2配制方法
基础琼脂水浴加热充分溶化.凉至55℃~60℃，加入呋哺吡酮二基甲酰胺溶液及红细胞裂解液立即充分摇句倒平板每个皿20m（平血直径90cm）。干燥后使用，或置于4℃冰箱1周内使用。防霉生长可加人两性霉素B10ug/tmL或放线酮30ug/ml.50μg/ml对污染较重的鼻腔拭子，可再加人壮:观霉素5g/ml.~-10 μ/mL(活性成分）B.3用途
用十旁腔黏液分离支气管败血波氏杆菌，10
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