NY/T 2336-2013
基本信息
标准号： NY/T 2336-2013
中文名称：柑桔及制品中多甲氧基黄酮含量的测定 高效液相色谱法
标准类别：农业行业标准(NY)
标准状态：现行
出版语种：简体中文
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相关标签： 柑桔 制品 甲氧基 黄酮 含量 测定 高效 色谱法
标准分类号
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出版信息
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标准简介
NY/T 2336-2013 柑桔及制品中多甲氧基黄酮含量的测定 高效液相色谱法
NY/T2336-2013
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标准内容
ICS 67.080.10
中华人民共和国农业行业标准
NY/T2336—2013
柑橘及制品中多甲氧基黄酮含量的测定高效液相色谱法
Determination of polymethoxylated flavones in citrus andderived productsHPLC
2013-05-20发布
2013-08-01实施
中华人民共和国农业部发布
本标准按照GB/TJ.1一2009给山的规则起草，本标准出农业部种植业管理司提：本标准由全国果品标准化技术委员会（SAC/TC501)归II，NY/T2336—2013
本标准起草单位：中国农业科学院柑橘研究所、农业部柑橘及苗木质量监督检验测试中心、西南大本标柏主要起草人：焦必宁、赵其阳、苏学素、陈爱华、王成秋，张耀海、薛杨、陈卫军。1范围
柑橘及制品中多甲氧基黄酮含量的测定高效液相色谱法
NY/T 2336—2013
本标谁规定了柑橘及其制品中多巾氧4黄酮（甜橙黄酮、川皮升和蜜橘黄酮）含量的液相色谱测定方法，
本标准适用丁柑橘及其制品中多甲氧基黄酮(甜橙黄酮、川皮苷和蜜橘黄)含景的测定。本标准定量测定范围：甜橙黄酮、川皮苷和蜜橘黄翻均为0.02mg/I.~30rng/L本标准方法定量限：甜橙黄、川皮苷和蜜橘黄酮均为0.02mg/kg。本标准方法检出限：甜橙黄削、川皮苷和蜜橘黄酮均为0.01mg/kg。2规范性引用文件
下列文件对了本文件的应用是必不可少的，凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是-不注口期的引用文件，其最新版本（包所有的修改单)适用下本文件、GB/T6682分析实验室用水规桥和试验方法3原理
试料中的多甲氧基黄酮经甲醇超声提取，净化.孔滤膜过滤，高效液相色谱法測定.外标法定量。4试剂和材料
除非5有说明，在分析于仅使用确认为分析纯的试剂和3T6682规是的一级水。4.1甲醇(CH,OH).色谱纯。
4.2乙酸溶液「g(CHCO0H)=0.5%：量取5imL乙酸，定容至1000mL4.3川皮苷标准品（纯度96.0%）4.4蜜橘黄酮标谁品（纯度296.0%）。4.5乱裙黄酮标准品（纯度≥96.0%）4.6多甲氧黄酮标准储备溶液：分别称取5.0Ccmg（精确到0.01mg)甜橙黄响、川皮苷和蜜橘黄酮标准品，溶于甲醇中，用醇定容至50mL.配制成质量浓度为100mg/L的标准储备液。于一50℃冰箱中贮存，有效期3个月。
5仪器和设备
5.1高效液相色谱仪：带紫外检测器（UV),5.2分析天平：感量0.001g和0.0001g。5.3组织捣碎机。
5.4超市波清洗器。
5.5旋转蒸发仪。
5.6超低温冰箱。
5.7离心机。
NY/T 2336—2013
5.8泌滤膜：0.15μm.有机机。
6分析步骤
6.1试样制备
6.1.1鲜果果实样品：果皮、果肉和种广分开处理。按四分法缩分后将其切碎，放人纽织格伴机巾揭成匀浆后段样，
6.1.2罐以样鼠：样品放人纠织捣锌机中匀浆后取样，6.1.3果汁及饮料样品：充分泥句后直接取样。6.2提取
6.2.1鲜果果皮、种子
称取试样1 g精确到0.001 g）丁 3 ml.离心管人巾醇10.00 ml. 50%条件下超声处理3gmin，以10000r/min离心10min.收集上清液于穿量瓶中，残渣以1℃ml.甲醇亚复提取两次，合并上清液,川甲醇定容系50ml.,0.45 μm微孔滤膜过滤后待测6.2.2果肉、罐头、果汁及饮料
称取试样5g精确到0.C0lg)于50nL离心管中,加人10.00申醇.超声处埋10min.以1000r/min离心10min.收集清澈于容量施中,残渣以10inI甲醇重复提取次.合并上清液，用印醇定容至25ml，取提取液111L，在50℃下减压旋转浓缔至近干，加人醇2.00mL,过0.45μutn微孔滤膜后待测。
6.3仪器参考条件
色谱柱：Cl色谱烂（4.6mmX250 mm,粒度5um)或同等性能的色谱性托源:35℃.
进样量：10μl，
检测波长：330mm
流动相:见表1。
表1流动相梯度洗脱程序
6.4标准工作曲线
A扣乙酸溶液
B相(甲醇;
取标准储备溶液（4.6)用甲醇稀释配成质量浓度为0.02mg/1.C.1cmg/1.0.50mmg/L.2.5mg/L10.0ng/工、20.0mg/L、30.0mg/1的标准T作溶液.按6.3逆行测定。以甜橙黄、川皮和董橘黄酮质员浓度为横坐标相应的积分峰面积为纵坐标，绘制标准山线或求线性回归方程。6.5测定此内容来自标准下载网
取门相府的标准工作液和待测液顺序进样，以保留时间定性，以色谱峰积积分值定量，站样溶滋中甜橙黄酮、川皮苷和蜜橘黄酮响应值均应在定量测定范调之内。色谱图参见附录A。6.6空白试验
除不加试样外，其他步骤同试样操作求骤进行，7结果计算
NY/T2336—2013
试样中甜橙黄酮、川皮苷和蜜橘黄酮的含量以质量分数α计，单位以毫克每千克（mg/kg）表示.按式()计。
式中：
= @x VX 1000
β一样液中甜橙黄酮、川皮告和蜜橘黄酮测定的质量浓度，单位为毫克每升(mng/1.)；-样液最终定容体积,单位为毫升（mL）；m-试样质量，单位为克(g)；
2—-稀释倍数(鲜果果皮、种子为 1,果肉、罐头、果汁及饮料为 0.2)。测定结果取两次平行测定结果的算术平均值，计算结果保留三位有效数字。精密度
8.1重复性
在重友性条件，获得的两次独立测定结果的绝对差值不超过算术平均值的15%，8.2再现性
在再现性条件下，得的两次独立测定结果的绝对差值不超过算术平均值的16%。NY/T 2336—2013
附录A
(资料性附录）
甜橙黄酮、川皮苷和蜜黄酮混合标准溶液色谱图甜橙黄酮、川皮节利蜜橘黄酮混合标准溶液色谱图见图A.1。T4
引性前：
」皮卒；
密境頭酮，
图A.15.00mg/L甜橙黄酮、川皮苷和密橘黄酮混合标准溶液色谱图20 NK)
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中华人民共和国农业行业标准
NY/T2336—2013
柑橘及制品中多甲氧基黄酮含量的测定高效液相色谱法
Determination of polymethoxylated flavones in citrus andderived productsHPLC
2013-05-20发布
2013-08-01实施
中华人民共和国农业部发布
本标准按照GB/TJ.1一2009给山的规则起草，本标准出农业部种植业管理司提：本标准由全国果品标准化技术委员会（SAC/TC501)归II，NY/T2336—2013
本标准起草单位：中国农业科学院柑橘研究所、农业部柑橘及苗木质量监督检验测试中心、西南大本标柏主要起草人：焦必宁、赵其阳、苏学素、陈爱华、王成秋，张耀海、薛杨、陈卫军。1范围
柑橘及制品中多甲氧基黄酮含量的测定高效液相色谱法
NY/T 2336—2013
本标谁规定了柑橘及其制品中多巾氧4黄酮（甜橙黄酮、川皮升和蜜橘黄酮）含量的液相色谱测定方法，
本标准适用丁柑橘及其制品中多甲氧基黄酮(甜橙黄酮、川皮苷和蜜橘黄)含景的测定。本标准定量测定范围：甜橙黄酮、川皮苷和蜜橘黄翻均为0.02mg/I.~30rng/L本标准方法定量限：甜橙黄、川皮苷和蜜橘黄酮均为0.02mg/kg。本标准方法检出限：甜橙黄削、川皮苷和蜜橘黄酮均为0.01mg/kg。2规范性引用文件
下列文件对了本文件的应用是必不可少的，凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是-不注口期的引用文件，其最新版本（包所有的修改单)适用下本文件、GB/T6682分析实验室用水规桥和试验方法3原理
试料中的多甲氧基黄酮经甲醇超声提取，净化.孔滤膜过滤，高效液相色谱法測定.外标法定量。4试剂和材料
除非5有说明，在分析于仅使用确认为分析纯的试剂和3T6682规是的一级水。4.1甲醇(CH,OH).色谱纯。
4.2乙酸溶液「g(CHCO0H)=0.5%：量取5imL乙酸，定容至1000mL4.3川皮苷标准品（纯度96.0%）4.4蜜橘黄酮标谁品（纯度296.0%）。4.5乱裙黄酮标准品（纯度≥96.0%）4.6多甲氧黄酮标准储备溶液：分别称取5.0Ccmg（精确到0.01mg)甜橙黄响、川皮苷和蜜橘黄酮标准品，溶于甲醇中，用醇定容至50mL.配制成质量浓度为100mg/L的标准储备液。于一50℃冰箱中贮存，有效期3个月。
5仪器和设备
5.1高效液相色谱仪：带紫外检测器（UV),5.2分析天平：感量0.001g和0.0001g。5.3组织捣碎机。
5.4超市波清洗器。
5.5旋转蒸发仪。
5.6超低温冰箱。
5.7离心机。
NY/T 2336—2013
5.8泌滤膜：0.15μm.有机机。
6分析步骤
6.1试样制备
6.1.1鲜果果实样品：果皮、果肉和种广分开处理。按四分法缩分后将其切碎，放人纽织格伴机巾揭成匀浆后段样，
6.1.2罐以样鼠：样品放人纠织捣锌机中匀浆后取样，6.1.3果汁及饮料样品：充分泥句后直接取样。6.2提取
6.2.1鲜果果皮、种子
称取试样1 g精确到0.001 g）丁 3 ml.离心管人巾醇10.00 ml. 50%条件下超声处理3gmin，以10000r/min离心10min.收集上清液于穿量瓶中，残渣以1℃ml.甲醇亚复提取两次，合并上清液,川甲醇定容系50ml.,0.45 μm微孔滤膜过滤后待测6.2.2果肉、罐头、果汁及饮料
称取试样5g精确到0.C0lg)于50nL离心管中,加人10.00申醇.超声处埋10min.以1000r/min离心10min.收集清澈于容量施中,残渣以10inI甲醇重复提取次.合并上清液，用印醇定容至25ml，取提取液111L，在50℃下减压旋转浓缔至近干，加人醇2.00mL,过0.45μutn微孔滤膜后待测。
6.3仪器参考条件
色谱柱：Cl色谱烂（4.6mmX250 mm,粒度5um)或同等性能的色谱性托源:35℃.
进样量：10μl，
检测波长：330mm
流动相:见表1。
表1流动相梯度洗脱程序
6.4标准工作曲线
A扣乙酸溶液
B相(甲醇;
取标准储备溶液（4.6)用甲醇稀释配成质量浓度为0.02mg/1.C.1cmg/1.0.50mmg/L.2.5mg/L10.0ng/工、20.0mg/L、30.0mg/1的标准T作溶液.按6.3逆行测定。以甜橙黄、川皮和董橘黄酮质员浓度为横坐标相应的积分峰面积为纵坐标，绘制标准山线或求线性回归方程。6.5测定此内容来自标准下载网
取门相府的标准工作液和待测液顺序进样，以保留时间定性，以色谱峰积积分值定量，站样溶滋中甜橙黄酮、川皮苷和蜜橘黄酮响应值均应在定量测定范调之内。色谱图参见附录A。6.6空白试验
除不加试样外，其他步骤同试样操作求骤进行，7结果计算
NY/T2336—2013
试样中甜橙黄酮、川皮苷和蜜橘黄酮的含量以质量分数α计，单位以毫克每千克（mg/kg）表示.按式()计。
式中：
= @x VX 1000
β一样液中甜橙黄酮、川皮告和蜜橘黄酮测定的质量浓度，单位为毫克每升(mng/1.)；-样液最终定容体积,单位为毫升（mL）；m-试样质量，单位为克(g)；
2—-稀释倍数(鲜果果皮、种子为 1,果肉、罐头、果汁及饮料为 0.2)。测定结果取两次平行测定结果的算术平均值，计算结果保留三位有效数字。精密度
8.1重复性
在重友性条件，获得的两次独立测定结果的绝对差值不超过算术平均值的15%，8.2再现性
在再现性条件下，得的两次独立测定结果的绝对差值不超过算术平均值的16%。NY/T 2336—2013
附录A
(资料性附录）
甜橙黄酮、川皮苷和蜜黄酮混合标准溶液色谱图甜橙黄酮、川皮节利蜜橘黄酮混合标准溶液色谱图见图A.1。T4
引性前：
」皮卒；
密境頭酮，
图A.15.00mg/L甜橙黄酮、川皮苷和密橘黄酮混合标准溶液色谱图20 NK)
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