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NY/T 3002-2016

基本信息

标准号: NY/T 3002-2016

中文名称:饲料中动物源性成分检测 显微镜法

标准类别:农业行业标准(NY)

标准状态:现行

出版语种:简体中文

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相关标签: 饲料 动物 成分 检测 显微镜

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标准内容

ICS65.120
中华人民共和国农业行业标准
NY/T3002—2016
饲料中动物源性成分检测
显微镜法
Analysis for the determination of constituents of animal origin in feed-Microscopymethod
2016-11-01发布
中华人民共和国农业部
2017-04-01实施
本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草本标准由农业部畜牧业司提出
本标准由全国饲料T业标准化技术委员会(SAC/TC76)归口。本标准起草单位:中国农业大学NY/T3002—2016
本标准主要起草人:刘贤、杨增玲、韩鲁佳、陈龙健、黄光群、肖卫华、姜训鹏、吕程序。1范围
饲料中动物源性成分检测
本标准规定了饲料中动物源性成分的显微镜检测方法,显微镜法
NY/T3002—2016
本标准适用于饲料原料以及备禽饲料中陆生动物肉骨粉和鱼粉的显微镜定性检测。本标准方法的检出限为0.1%W/W
规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用PBLAS用变件,使能日期的版本适用于本义SHN
?其最影版
件。凡是不注日期的引
用文件
包活听有的
GB/T 603
制品的
中听用制剂
RESEAR
GB/T 6003
第工邮
GB/T6683
GB/T 14699
GB/T 20195
3原理
基于骨、软骨
和畜禽饲料口
4试剂及制剂
除另有说明
GB/T 603的
4.1浓缩剂
四氯乙烯
4.2染色剂
茜素红溶液:取
4.3封固剂
4.3.1丙三醇。
4.3.2石蜡。
4.3.3紫外固化光学胶。
4.4染色封固剂
有水规格
试样的情
物手发以发
勿源性成分进行
为化学
骨和鱼鳞等典刑的
成别分析
中研华
影微馆
对饲料原料
所用制剂制备应符合
红至该溶液。
4.4.1斐林溶液:称最6.9g五水合硫酸铜溶于100mL水中,制备溶液A分别称取34.6g四水合酒石酸钾钠和12g氢氧化钠溶于100mL水中,制备溶液B。使用前,取溶液A和溶液B按1:1(V/V)混合。4.4.2胱氨酸溶液:分别称取2g酷酸铅和10g氢氧化钠.溶于100ml.水中。4.5清洗剂
4.5.1乙醇:≥95%。
4.5.2丙酮。
4.6漂白剂
NY/T3002—2016
次氯酸钠溶液:8%~14%有效氯
5仪器和设备
5.1分析天平:感量为0.001g和0.01g5.2样品磨或研钵
5.3试验筛:筛孔尺寸1mm,500um和250μm,试验筛应符合GB/T6003.1的要求5.4锥形玻璃分液漏斗:容积250ml,聚四氟乙烯或磨砂玻璃活塞.活塞开口直径应≥4mm。5.5生物显微镜:放大100倍400倍,明场透射光。5.6实验室常用玻璃器皿,
5.7玻片:平板载玻片、单凹载玻片和盖玻片(20mm×20mm)。5.8实验室用镊子、探针。
5.9紫外灯:波长范围350nm~380mm。5.10电热板(50℃)或酒精灯。5.11涡旋泥合器。
电热干燥箱。
6采样与试样制备
6.1采样
按GB/T14699.1规定的方法采样。6.2试样制备
为避免交叉污染,所有重复使用的设备使用前应仔细清洁。分液漏斗应拆分清洗,先人工预清洗后清洗机清洗。试验筛应使用硬纤维刷进行清理。筛分鱼粉等含高脂质成分样品的试验筛,宜采用丙酮和气枪进行清理。
6.2.1样品干燥
水分含量14%的样品,处理前应使用电热干燥箱进行十燥(103士2)℃16.2.2样品预筛分
为避免物流等环节可能造成的交叉污染,对于颗粒饲料和谷粒,宜采用1mm试验筛进行预筛分,筛上物和筛下物宜作为独立样品进行后续制备和分析。6.2.3分样与粉碎
按GB/T20195规定的方法,抽取有代表性的样品,用四分法缩减取样不少于50g。粉碎过1mm试验筛,混勾备用
6.2.4沉淀物的提取与制备
准确称取10g试样(鱼粉、其他纯动物源性产品、矿物成分或沉淀物比例高于10%的预混料应称取3g),精确至0.01g,置于分液漏斗中,加人50mL四氯乙烯,连续振荡混合至少30s,再量取不少于50mL四氯乙烯.连续沿分液漏斗内壁倒人彻底洗净着壁试样.静置5min,打开活塞,分离沉淀物十滤纸过滤后风干。准确称量风T后沉淀物(精确至0.001g),统一过500μm试验筛。若筛上物>5%,应采用250μm试验筛进行筛分。筛上物和筛下物两部分均应进行分析。注:上述操作应在通风柜内进行。6.2.5悬浮物的提取与制备
倒置分液漏斗,将提取沉淀物后剩余的悬浮物从分液漏斗倒表面血,风干后收集并准确称重(精确至0.001g),统一过500μm试验筛。若筛上物>5%,应采用250um试验筛进行筛分,筛上物和筛下2
物两部分均应进行分析。
注:上述操作应在通风柜内进行。6.3试样染色处理与玻片制备
6.3.1沉淀物染色
采用茜素红溶液进行染色,具体染色步骤如下:NY/T 3002—2016
a)将制备的沉淀物移至玻璃试管中,加入5ml.乙醇清洗,涡旋混合30s后,静置1.5min,倒出上清液,再加人5mL乙醇,重复操作1次。b)加人1mL次氯酸钠溶液,沉淀物脱色反应持续10min。加满水,静置2min~3min,倒出上清液
c)加入茜素红溶液2滴~10滴.涡旋混合。反应30s后,加入5mL乙醇清洗,涡旋混合30s,静置1min,倒出上清液,再加入5mL乙醇,重复操作1次;加入5mL丙酮清洗,涡旋混合30s:静置1min.倒出上清液
d)置染色后的沉淀物于电热十燥箱干燥(60℃,2h)。经染色处理,沉淀物中的动物骨、软骨组成呈红色6.3.2沉淀物玻片制备
依检测需要,选择经染色处理的沉淀物制备玻片。若样品经过筛分,则筛上物和筛下物均制备玻片,>250um的沉淀物使用单叫载玻片,250um的沉淀物使用平板载玻片。玻片制备数量应满足执行7.1分析流程的要求6.3.2.1非永久性玻片
取清洁载玻片置于台面,加5滴~7滴丙一醇(避免产生气泡),取约10rng沉淀物分散其中凌透,用探针搅拌使分散均勾,加盖玻片.用石蜡密封。6.3.2.2永久性玻片
取清洁载玻片置于台面,加5滴~7滴紫外固化光学胶(避免产生气泡),取约10mg沉淀物分散其中浸透,用探针搅拌分散均勾,及时加盖玻片(1min内完成).移置紫外灯下照射至少2min。6.3.3悬浮物染色与玻片制备
6.3.3.1肌纤维
采用斐林溶液进行染色。取清洁载玻片置于台面,加适量斐林溶液,取少量悬浮物分散其中没透,用探针搅拌分散均匀,加盖玻片。为免褪色影响使用,宜尽快使用为佳:经斐林溶液染色处理,肌纤维呈淡粉紫色。6.3.3.2羽毛和动物毛发
采用胱氨酸溶液进行染色。取清洁载玻片置于台面,加适量胱氨酸溶液,取少量悬浮物分散其中浸透,用探针搅拌分散均匀,加盖玻片,静置反应至明显变色。可通过使用电热板(50℃)或酒精灯加热玻片(避免沸腾)加快染色反应。经胱氨酸溶液染色处理,羽毛和动物毛发呈深棕色。7显微镜观察
7.1分析流程
应严格按规定流程进行显微镜观察分析。饲料原料以及备禽饲料中动物源性成分镜检分析流程如图1所示,鱼粉中陆生动物源性成分的镜检分析流程如图2所示。每个镜检玻片均应使用不同放大倍数观察镜检分析流程中每个步骤规定的镜检玻片数量应严格遵守。每个分析流程最多观察6个玻片。依据附录A动物源性成分典型图谱对显微镜观察结果进行判定3
NY/T3002—2016
3个沉淀物玻片
+1个悬浮吻玻片
检出5个以上动
物源性成分颗粒
「个沉定物玻片
检出5个以上动~
物源性反分颗粒
1个悬浮物玻片
检出动物源
性成分颗粒
3个沉淀物玻片
95%样品粒径≤:500μm
按8.3给出鱼粉成分
分析结果
250μm筛分
3个沉凝物玻片(<250μm)
+1个悬浮物坡片(<250μm)
按7.2.2重复
角粉成分颗
动物源性成
分颗粒形态
陆生动物
陆生动物源性
成分颗粒数
按8.3给出陆生动物
源性成分分析结果
按7.2.2重复
按8.1给出分析结果
检出5个以上动
物源性成分颗粒
1个沉淀物玻片(>250μm)
检出5个以上动
物源性成分颗粒
1个甚浮物坡片(>250μm)
检出动物源
性成分颗粒
饲料原料以及畜禽饲料中动物源性成分分析流程图95%样品粒径≤500um
检出5个以上陆生
动物源性成分颗粒
2个沉淀物玻片
检出5个以上陆生~
动物源性成分颗粒
1个悬浮物玻片
检出陆生动物
源件成分颗粒
按8.3给出分析结果
陆生动物源
性成分颗粒数
按7.2.2重复分析
按8.1给出分析结果bzxZ.net
250um筛分
3个沉淀物玻片(<250μm)
检出5个以上陆生
动物源性成分颗粒
2个流旋物玻片(>250μm)
检出5个以上陆生
动物源性成分颗粒
1个悬浮物玻片(>250um)
检出陆生动物
源性减分颗粒
图2鱼粉中陆生动物源性成分分析流程图7.2重复分析次数
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7.2.1如果按上述分析流程未检出动物源性成分,无需重复分析,应按8.1规定给出分析结果7.2.2如果按上述分析流程检出的动物源性成分颗粒数量为1个~5个,应按6.2.3重新分样与粉碎,取50g进行重复分析,如果重复分析检出的动物源性成分颗粒数量为0个~5个,应按8.2给出分析结果;否则,应按6.2.3再重新分样与粉碎,取50g再次进行重复分析。但是,如果前两次分析检出的动物源性成分颗粒总数大于15个,应按8.3直接给出分析结果。如果3次分析检出的动物源性成分颗粒总数大于15个,应按8.3给山分析结果:否则,应按8.2给出分析结果,7.2.3如果按上述分析流程检出的动物源性成分颗粒数量大于5个,也无需重复分析.应按8.3给出分析结果。
8结果表示
注:结果表示包含制备试样的类别(沉淀物、悬浮物)、重复分析次数以及是否检出陆生动物源和鱼粉成分等信息。8.1未检出动物源性成分颗粒
结果表示为:采用显微镜法,在送检样品中未检出陆生动物源性成分或者表示为:采用显微镜法,在送检样品中未检出鱼粉成分。8.2平均检出1个~5个动物源性成分颗粒结果表示为:采用显微镜法,在送检样品中检出的陆生动物源性成分颗粒平均数量≤5个,检出的颗粒判定为…·(骨、软骨、肌纤维、毛发、羽毛等)。此结果低于显微镜法的检出限,不排除假阳性的可能。
或者表示为:采用显微镜法,在送检样品中检出的鱼粉成分颗粒平均数量≤5个,检出的颗粒判定为……(鱼骨、软骨、肌纤维、鱼鳞等)。此结果低于显微镜法的检出限,不排除假阳性的可能如果样品经过预筛分,结果表示中应说明检出的动物源性成分颗粒源白的独立样品(筛下物、颗粒或谷粒)。如果只在筛下物中检出,则不排除环境污染的可能8.3平均检出5个以上动物源性成分颗粒结果表示为:采用显微镜法,在送检样品中平均检出5个以上陆生动物源性成分颗粒,检出的颗粒判为··(骨、软骨、肌纤维、毛发、羽毛等)。或者表示为:采用显微镜法,在送检样品中平均检出5个以上角粉成分颗粒,检出的题粒判定为(鱼骨、软骨、肌纤维、鱼鳞等)。如果样品经过预筛分,结果表示中应说明检出的动物源性成分颗粒源自的独立样品(筛下物、颗粒或谷粒)。如果只在筛下物中检出,则不排除环境污染的可能NY/T3002—2016
A.1鱼骨
见图A.1图A4。
(资料性附录)
动物源性成分典型显微镜图谱
(100信:细长管状,达角锐利)图A1鱼骨
(200倍:组长管状,边角锐利,不规则细长腔隙与丝网状导管呈黑色)图A.2鱼
(100倍:鱼绳,细长管状,边角锐利.表层黑色)图A.3鱼骨
见图A.5。
陆生动物骨
见图A.6图A.9。
(260倍:长管形,边角锐利,不规则细长腔隙与网状导管呈黑色)图A4鱼骨
(200倍:鳞片状,边角锐利.似瓦片吾压排列)图A.5鱼鳞
(200倍:不规则多边体,黑色腔隙寄集多呈圆形,导管细短,沿腔分布)骨
NY/T3002—2016
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A.4软骨
见图A.10。
(209倍;不规则多边体,黑色腔隙呈椭圆形,导管细短,沿腔隙分布)图A7牛骨
(200倍;不规则多边体,黑色腔隙呈椭形.导管组短、沿腔隙分布》图A8羊骨
(200倍:不规则多边体,黑色腔隙呈椭圆形,导管组短、沿胜隙分布)图A9猪
A.5肌纤维
见图A.11。
A.6羽毛
见图A.12。
(200倍;不规则多边体,球形腔隙,无导管)图A10软骨
(200倍:淡粉紫色规则矩形,表面平行细纹分有规则)图A.11
肌纤维
(1c0倍+深棕色.羽枝清晰)
图A.12羽毛
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哺乳动物毛发
见图A.13。
(100倍;深棕色,光滑组长表面,中心黑色髓质清断)哺乳动物毛发
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