NY/T 3050-2016 羊奶真实性鉴定技术规程 NY/T3050-2016 标准压缩包解压密码：www.bzxz.net

ICS67.100.01
中华人民共和国农业行业标准
NY/T3050—2016
羊奶真实性鉴定技术规程
Code of practice for adulteration in goat milk product2016-12-23发布
2017-04-01实施
中华人民共和国农业部
本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。本标准由农业部畜牧业司提出。本标准由全国畜牧业标准化技术委员会（SAC/TC274)归口。NY/T3050—2016
本标准起草单位：中国农业科学院北京畜牧兽医研究所、农业部奶产品质量安全风险评估实验室(北京）、青岛农业大学、安徽农业大学、安徽省农业科学院畜牧兽医研究所。本标准主要起草人：郑楠、届雪寅、杨晋辉、杨永新、胡菌、周雪巍、李松励、叶巧燕、于建国、文芳、许晓敏、韩荣伟、张养东、程建波、王加启。I
1范围
羊奶真实性鉴定技术规程
NY/T3050—2016
本标准规定了聚合酶链式反应（PCR)方法、二维凝胶电泳（2-DE)法及酶联免疫吸附（ELISA)法，对生羊奶、超高温灭菌（UHT）液态羊奶和羊奶粉中掺人牛源性奶成分的定性检测方法。本标准第一法和第二法适用于生羊奶、UHT灭菌液态羊奶及羊奶粉；第三法适用于生羊奶。本标准第法的检出限为：生羊奶中掺假2.0%生牛奶，生羊奶掺假0.2%牛奶粉，UHT液态羊奶掺假5.0%UHT液态牛奶，羊奶粉掺假2.0%牛奶粉：第二法的检出限为生羊奶掺假5.0%生牛奶，生羊奶掺假1.0%牛奶粉，UHT液态羊奶掺假5.0%UHT液态牛奶，羊奶粉掺假2.0%牛奶粉；第三法的检出限为生羊奶掺假0.1%生牛奶。2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法第一法聚合酶链式反应（PCR）法3原理
提取奶及奶制品中体细胞DVA，利用牛特异性的引物通过PCR扩增牛特定的DVA序列，电泳分离PCR产物，以牛源性成分PCR产物作对照，初步判断是否含有牛源性奶成分。通过对PCR扩增的特定DVA片段进行测序，与标准序列进行比较，确认检测结果4试剂和材料
除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂，水应符合GB/T6682一级水的要求。4.1无水乙醇。
4.275%乙醇
4.3三羟甲基氨基甲烷(Tris）。4.4琼脂糖：电泳级。
4.5蛋白酶K:20g/L
4.6核酸荧光染料。
4.7DNA分子量标记(Marker)：50bp~500bp。4.8牛源性成分检测用引物（对)序列：正向：5GCCATATACTCTCCTTGGTGACA-3；反向：5-GTAGGCTTGGGAATAGTACGA-3。4.9磷酸盐缓冲液（PBS缓冲液）：分别称取磷酸二氢钾0.27g、磷酸氢二钠1.42g、氯化钠8.0g、氯化钾0.2g，于800mL水中充分溶解，用浓盐酸调节溶液pH至7.4.加水定容至1L.分装后高压灭菌。4.10氯化钠溶液（0.9g/L)：称取0.90g氯化钠，于800mL水中充分溶解后，加水定容至1L。4.11乳化级冲液：取430mL浓度为0.9g/L的氯化钠溶液（4.10），加人10mL聚乙二醇对异辛基苯NY/T3050—2016
基醚（TritonX-100）、60mL无水乙醇（4.1)，混合均匀。4.12三羟甲基氨基甲烷盐酸（Tris-HCl)溶液（1mol/L)：称取121.1gTris（4.3)，于800mL水中充分溶解。冷却至室温后，用盐酸调节溶液的pH至8.0,加水定容至1L,分装后高压灭菌。4.13氢氧化钠溶液（10mol/L）：称取40.0g氢氧化钠，于80mL水中充分溶解后，加水定容至100mL。
4.14EDTA溶液（0.5mol/L）：称取186.1g二水乙二胺四乙酸二钠，加入700mL水中，在磁力搅拌器上剧烈搅拌，用10mol/L氢氧化钠溶液（4.13)调pH至8.0，加水定容至1L，分装后高压灭菌。4.15溴代十六烷基三甲胺（CTAB)提取缓冲液.分别称取81.82g氯化钠、20.0g溴代十六烷基三甲胺（CTAB)，于800mL水中充分溶解后：加人100mLTris-HCI溶液（4.12）和40mLEDTA溶液（4.14），加水定容至1L，分装后高压灭菌O
4.16Tris饱和苯酚、三氯甲烷和异戊醇混合液UB饱和苯酸）+V.0SH
25+24+1。
氯甲烷）+V（异戊醇）=
Tris-HCI溶液（4.12)
和2mI.EDTA溶液（4.14），加水定容分装后高压灭窗
复，用灭菌水或TE缓冲液（4.17)将引物（4.8）稀释4.18引物溶液
4.192xTauMix：内舍DNATag聚合酶0.05U/Mg4.2050XTAE级冲液O称取Tris4/3)242.0gCumep
.ommal
700mL菌水中充
ANTP各
添牌后，加人EDTA溶液
，冰乙酸57ml，充分溶解后加水定容至(4.14)100ml
TAE缓冲液：取10mL501AE缓冲液（420)，加大菊水定容至4.210.5X
26×上样级汁bzxZ.net
5仪器
内含EDTA30mmolA
5.1PCR扩增仪
5.2电泳仪
5.3凝胶成像仪
5.4核酸蛋白分析
5.5离心机：转速不
5.6高压灭菌锅
电子天平：感量
mg和o.o1
5.8恒温水浴锅：60℃可挡
5.9pH计。
5.10掌式离心机。
5.11磁力搅拌器。
三醇369
溴酚蓝0.05%内
5.12移液器：量程为10μL、200uL、1mL和5mL。6分析步骤
6.1体细胞分离
飘来豆
蓝0.035%。
取液体样品50mL，或将奶粉样品按1：8比例配制成复原乳后，取50mL。于3000r/min4℃离心15min，用1mLPBS缓冲液（4.9)将底部沉淀悬浮，转移于1.5mL离心管中，3000r/min离心10min，弃去上清液。向离心管中加入1mLPBS缓冲液悬浮沉淀，1000r/min离心10min，弃去上清液。加人150uL乳化缓冲液（4.11）及1mLPBS缓冲液悬浮沉淀，于40℃恒温水浴锅加热10min后2
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3000r/min离心10min，弃去上清液。加人1mLPBS缓冲液洗涤沉淀，12000r/min离心10min，得到体细胞。待测或一20℃冷冻保存。6.2模板DNA提取及纯化
6.2.1CTAB法提取模板DNA及纯化向上述得到的体细胞（6.1)中，加人800uLCTAB提取缓冲液（4.15），60L蛋白酶K（4.5），60℃恒温水浴锅中加热2h，其间不时轻弹混勾。12000r/min离心10min，除去杂质。吸取上清液于2mL离心管中，加入等体积的Tris饱和苯酚、三氯甲烷和异戊醇混合液（4.16），轻缓颠倒混勾后，12000r/min离心15min。吸取上清液，置于另一支2mL离心管中，加人等体积的Tris饱和苯酚、三氯甲烷和异戊醇混合液（4.16），12000r/min离心10min。将上清液转移于1.5ml.离心管中，加入两倍体积的无水乙醇溶液（4.1），混匀后于一20℃放置30min。12000r/min离心10min，弃去上清液，加入1ml.75%乙醇洗涤沉淀（4.2），12000r/min离心5min，弃去上清液。室温下挥发干残留乙醇，加人30μL~50μLTE缓冲液（4.17)溶解DNA沉淀。可利用核酸蛋白分析仪或紫外分光光度计测定提取DNA浓度及纯度（见附录A）。若蛋白残留量高，可向溶解的DNA中加人500μL.灭菌水和等体积的Tris饱和苯酚、三氯中烷和异戊醇混合液（4.16)抽提，并重复之后操作步骤。得到的模板DNA待测或置20℃冻存。
同时，用不含牛源性的样品做阴性对照，用含有牛源性的样品做阳性对照。6.2.2试剂盒提取模板DNA及纯化可用等效DNA提取试剂盒提取模板DVA及纯化柱纯化DNA，按说明书操作。6.3PCR扩增
在200uLPCR反应管中依次加入浓度为10μmol/L正向和反向引物（4.18）各1μL，2XTaqMix缓冲液10μL（4.19），模板DNA2μL~3μL，灭菌水补足体积至20uL。每个试样2个重复，同时进行以灭菌水作为模板的空白对照。掌式离心机离心10s后，放入PCR仪中进行扩增。PCR扩增程序为：94℃预变性4min94℃变性45s，63℃退火30s，72℃延仲1min，30个循坏；72℃延仲7min，4℃保存。
6.4电泳检测PCR扩增产物
称取适量琼脂糖（4.1)，加人0.5XTAE缓冲液（4.21)配制成2%的琼脂糖溶液，微波加热至完全溶解，冷却至60℃左右，按每100mL琼脂糖溶液加入5uL核酸荧光染料（4.6）的比例，加人核酸荧光染料。摇勾后倒入电泳板，放置合适的梳子，制成约5Imrm厚的凝胶，室温下遮光冷却至凝固。取下梳子，放人含有0.5×TAE电泳缓冲液（4.21）的电泳槽中，液面高于凝胶2mm~3mm。将5μL~8uLPCR扩增产物（6.3）与1山6X上样缓冲液（4.22)混合后，加人点样孔中。同时，加入5uLDNA分子量标记（4.7）于每个点样孔中。5V/cm~8V/cm恒压电泳，时间20min~30min。结束后，将凝胶取出置于凝胶成像仪进行成像，根据DNA分子量标记判断目的条带大小。7结果分析及表述
7.1当阴性对照和（或)空白对照在271bp处出现条带，而阳性对照在271bp处未出现条带时，本次测定结果无效。应重新进行实验，并排除污染因素。7.2当阴性对照及空白对照在271bp处未出现条带，而阳性对照在271bp出现条带时，则待测样品判定如下：
a）待测样品在271bp处未出现扩增条带.则未检出牛源性奶成分；b）待测样品在271bp处出现扩增条带，则为疑似含有牛源性奶成分。此时，可用正向引物和反向引物分别对PCR扩增产物进行测序，将序列中两端引物碱基除去后，与附录B的DNA序列进行比对，判定如下：
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符合程度在98%以下，未检出牛源性奶成分：1）
2）符合程度在98%及以上，则检出牛源性奶成分。注：当平行PCR产物序列（不含两端引物碱基）结果不一致，则本次测定结果无效。应重新进行实验，直至测序结果一致。
第二法二维凝胶电泳(2-DE）法
8原理
二维凝胶电泳，即第一向等电聚焦电泳是根据蛋白质等电点分离，第二向十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳是根据蛋白质的相对分子质量分离。样品中的蛋白质组分经过等电点和蛋白质的相对分子质量分离后，在凝胶板上聚集为位置不同的蛋白点。根据牛源性与羊源性β-乳球蛋白的等电点和相对分子质量的不同，在凝胶上进行分离，通过与对照样品凝胶图谱对比，判断是否含有牛源性奶成分。9试剂和材料
除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂，水为GB/T6682中规定的一级水。9.1尿素。
9.2三羟甲基氨基甲烷(Tris)。
9.3十烷基磺酸钠（SDS)
9.4二硫苏糖醇。
9.5甘氨酸。
9.6预制IPG胶条：pH3~10或pH4~7。9.7维凝胶电泳两性电解质液：pH4~7.pH3~10。注：两性电解质的选择取决于IPG胶条（9.6)的pH范围，pH3~pH10胶条选择两性电解液的pH范围为3~10，pH4-~pH7胶条选择两性电解液pH为4~6和5~7.添加体积为上样体积的0.5%-~1%9.8电泳矿物油，纯度>99.0%。
9.9水化上样缓冲液：分别称取尿素（9.1)4.20g，硫腺1.52g.3-［（3-胆固醇氨丙基）二甲基氨基」1丙磺酸0.40g，加水溶解后，定容至10mL，分装后在一20℃条件下冷冻保存。使用时复融，加人二硫苏糖醇（9.4)0.098g.两性电解质液pH3~10（9.7)50uL,或pH4-~6和pH5~~7的电解质液（9.7)各25μL，溴酚蓝指示剂（9.23)10μL。注：水化上样缓冲液一旦复融不能再冷冻。9.10聚丙烯酰胺储液（30%）：分别称取内丙烯酰胺150.0g.甲义双丙烯酰胺4.0g，加水溶解后，定容至500ml。
9.11.三羟甲基氨基甲烷盐酸（Tris-HCl)溶液（1.5mol/L)：称取Tris(9.2)90.75g，溶于400mL的水中，用盐酸调pH至8.8.加水定容至500mL4℃冷藏。9.12十二烷基磺酸钠溶液（10%）：称取10.0g的SDS（9.3）于80mL水中，加热溶解后，定容至100ml..
9.13过硫酸铵溶液（10%）：称取过硫酸铵1.0g，加水溶解后，定容于10mL的水中，现配现用。9.14聚内烯酰胺凝胶（10%）：分别吸取20.0ml30%聚丙烯酰胺储液（9.10），12.5ml1.5mol/1Tris-HCI溶液（9.11)0.5mL10%SDS溶液（9.12)0.5ml10%过硫酸铵溶液（9.13)，20μLN，V，V，N-四甲基乙二胺，加水溶解后，定容至50mL.。9.15胶条平衡缓冲液母液：分别称取尿素（9.1)36.0g.SDS（9.3)2.0g加人25mL1.5mol/LTris-HCl(9.11)，20ml.甘油，加水溶解后，定容至100mL。分装后，在一20℃条件下冷冻保存。4
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9.16胶条平衡缓冲液I：取胶条平衡缓冲液母液（9.15)10ml.,加入二硫苏糖醇（9.4)0.2g，充分混匀，现用现配。
9.17胶条平衡缓冲液Ⅱ：取胶条平衡缓冲液母液（9.15)10mL，加人碘代乙酰胺0.25g，充分混勾，现用现配。
9.1810X电泳缓冲液：分别称取Tris（9.2)30.0g.甘氨酸（9.5)144.0gSDS（9.3)10.0g，加水溶解后，定容至1L，室温保存。使用时，将其稀释10倍，制成1×电泳缓冲液。9.19低熔点琼脂糖封胶液：分别称取低熔点琼脂糖0.50g，Tris（9.2)0.303g，甘氨酸（9.5)1.44g，10%SDS溶液（9.12)1mL.0.05%溴酚蓝指示剂（9.23)100αL，加水溶解至澄清，室温保存，使用时加热溶解，并快速冷却至室温。
注：实验过程中应控制温度低于38℃，避免尿素发生氨中酰化，发生蛋白等电点偏移现象。加热配制的试剂需要完全冷却后，才可继续试验。
9.20固定液：分别量取无水乙醇40mL、乙酸10ml、水50mL，混勾后常温保存。9.21氢氧化钠溶液（0.05mol/L)：称取0.2g氢氧化钠，于80mL水中充分溶解后，加水定容至100mL。
9.22考马斯亮蓝G250染色液：分别称取硫酸铵100.0g，考马斯亮蓝G2500.12g，加水溶解后，加人无水乙醇20mL、磷酸10mL，定容至100mL，室温避光保存。9.233,3°5,5四溴苯酚磺酰酰（溴酚蓝）指示剂（0.05%）：称取溴酚蓝0.1g，加入0.05mol/L氢氧化钠溶液（9.21)3.0mL，溶解后，加水定容至200mlL。9.24蛋白浓度测定试剂盒：内含牛血清标准白蛋白(BSA)和染色液。10仪器
10.1等电聚焦仪：电压可达10000V，配有等电聚焦盘和水化盘。10.2聚丙烯酰胺凝胶电泳仪：配套有玻璃板、灌胶装置，10.3扫描仪：分辨率大于600dpi。10.4离心机：转速不小于5000r/min，4℃可控。10.5水平摇床。
10.6电子天平：感量0.01g
10.7pH计。
10.8旋涡振荡仪。
10.9移液器：量程为10μl、200μL、1mL和5mL。11
分析步骤
11.1试液制备
取液体样品50mL.或将奶粉样品按1：8比例配制成复原乳后，取50ml。于5000r/min4℃离心15min20min.除去脂肪层，吸取上清液，待测或一20℃冷冻保存。利用蛋白浓度测定试剂盒（9.24）测定上清液中的蛋白浓度、
注：蛋白浓度测定试剂盒操作按其说明书操作11.2等电聚焦电泳
脱脂乳蛋白上样量为250ug~300ug，根据测得的蛋白浓度折算上样体积。取300L～500ul水化上样缓冲液（9.9），加入样品后，涡旋振荡混勾。注：将水化上样缓冲液加人蛋白样品中，终溶液中尿素的浓度应≥6.5mol/L。5
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沿聚焦盘槽边缘加人样品，避免产生气泡。待所有样品加人后，用平头镊子去除预制IPG胶条（9.6）上的保护层。将IPG胶条置于聚焦盘中样品溶液上，移动胶条，除去气泡。沿胶条，在塑料支撑膜上滴加2mL~3mL矿物油（9.8），盖上盖子。设置等电聚焦程序（可参照表C.1或表C.2）。聚焦结束后，立即进行第二向聚丙烯酰胺凝胶电泳，或将胶条置于样品水化盘中，一20℃冰箱保存。注：胶条在电泳之前宜先经过至少11h的溶胀，确保所有脱脂乳蛋白溶液都被胶条所吸收。同时，用不含牛源性奶成分的羊奶样品做阴性对照，用牛奶样品做阳性对照。11.3聚丙烯酰胺凝胶电泳
11.3.1将10%的聚内烯酰胺凝胶（9.14)注人玻璃板夹层中，上部留1cm的空间，用水封闭并压平胶面，聚合60min~90min。凝胶凝固后，倒去凝胶上面的水，并用水反复冲洗胶面2次～~3次后，用滤纸吸干。
11.3.2将等电聚焦电泳结束后的胶条（或取出冷冻保存的胶条，置于干燥滤纸上解冻）.用水冲洗，并用滤纸吸除多余的矿物质油和水。将胶条转移至水化盘中进行第一次平衡，加人5mL胶条平衡缓冲液I（9.16）。于水平摇床上级慢摇晃10min~-15min后，倒掉水化盘中的液体，并用滤纸吸除胶条上的缓冲液。加入胶条平衡缓冲液Ⅱ（9.17），进行第二次平衡。用平头镊子将IPG胶条从样品水化盘中移出，置于长玻璃板上，浸泡在1X电泳缓冲液（9.18）中15min~30min。加入低熔点琼脂糖封胶液（9.19），使之与聚丙烯酰胺凝胶（11.3.1)胶面完全接触并除去气泡。静置至低熔点琼脂糖封胶液完全凝固，将凝胶转移至电泳槽中。在电泳槽加入电泳缓冲液，接通电源。起始时，用低电流（5mA/胶条）或低电压（50V），待样品走出IPG胶条并浓缩成条线后，加大电流（30mA/胶条）或电压（200V），待溴酚蓝指示剂（9.23)达到底部边缘时即可停止电泳。打开两层玻璃，取出凝胶并标记，于固定液（9.20）中固定2h，考马斯亮蓝G250染色液（9.22）中染色16h~-24h后，用水漂洗18h以上，置于扫描仪中进行扫描。12结果表述
与阳性对照样品3-乳球蛋白位置相比较（可参照附录D），具体表述如下：a）待测样品与阳性样品在相同等电点位置及相对分子质量处无蛋白点出现时.则待测样品中未检出牛源性奶成分；
待测样品与阳性样品在相同等电点位置及相对分子质量处有蛋白点出现时，则待测样品中检b）
出牛源性奶成分。
注：若有必要对阳性结果做进一步确认，宜将目标区域的凝胶切割回收，利用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱进行鉴定，通过MASCOT搜索无允余的美国国立生物技术信息中心数据库比对鉴定蛋白。第三法酶联免疫吸附（ELISA）法13原理
通过对生牛奶中的天然成分免疫球蛋白G的检测，确定牛源性成分。试样中的牛免疫球蛋白G与微孔板中包被的特异性抗体结合后，加人针对牛免疫球蛋白G的过氧化物酶标记的抗体，与抗原结合。加人底物和显色液显色，在450nm处测量吸光度值，与标准溶液比较定性。14试剂和材料
除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂，水为GB/T6682中规定的一级水。14.1酶联反应试剂盒中的试剂（4℃冷藏保存）注：不同试剂盒制造商间的产品组成和操作会有微小差异，应按其说明书操作。14.1.1包被有牛免疫球蛋白G抗体的微孔板。6
14.1.2标准溶液：分别含有10%、1%和0.1%的牛奶成分。注：与样品稀释相同倍数。
14.1.3酶连接物稀释缓冲液：磷酸盐。NY/T3050—2016
14.1.4酶标抗体：含有过氧化物酶标记的牛免疫球蛋白G抗体。使用时，充分摇匀后应使用酶连接物稀释缓冲液（14.1.3），以V（酶标抗体）十V，（稀释缓冲液）=1十10的比例进行稀释，现用现配。14.1.5底物：过氧化腺。
14.1.6显色液：四甲基对二氨基联苯14.1.7反应终止液：0.5mol/L硫酸。15仪器
15.1酶标仪。
15.2移液器：量程为100μL和500μL16操作步骤
16.1试液制备
将生乳样品用水稀释100倍。
16.2试剂盒测定
将酶联反应试剂盒（14.1）于室温下（20℃~25℃）充分回温、将足够两次平行的标准溶液检测和样品检测所需数量的孔条（14.1.1)插入微孔板架，记录下标准溶液和试液的位置。将100μL标准溶液（14.1.2）及试液（16.1)加到相应的微孔中，在室温条件下（20℃~25℃）孵育30min。倒出孔中的液体，将微孔板架倒置在吸水纸上拍打（每轮拍打3次）以完全除去孔中的液体。每孔加入250水洗涤微孔。上述操作重复进行两遍按上述顺序，向每一个微孔中加人100L稀释后的酶标抗体（14.1.4），充分混合，在室温条件下（20℃～25℃）孵育30min。倒出孔中的液体，将微孔板架倒置在吸水纸上拍打（每轮拍打3次）以完全除去孔中的液体。每孔加人250L水洗涤微孔。上述操作重复进行两遍。按上述顺序，向每一个微孔中加入50山底物（14.1.5）和50μL发色剂（14.1.6），充分混合后在室温（20℃~~25℃）条件下暗处孵育30min。按上述顺序，向每一个微孔中加入100μl反应终止液（14.1.7），充分混合，30min内置于酶标仪450nm处测量吸光度值并记录。17结果表述
计算每个标准溶液吸光度值的平均值。具体表述如下：a）待测样品吸光度值小于含牛奶成分0.1%的标准溶液，表明样品中不含或含有小于0.1%的牛奶成分；
待测样品吸光度值位于含牛奶成分1%和0.1%的标准溶液之间，表明样品中含有大于0.1%b）
且小于1%的牛奶成分；
c）待测样品吸光度值大于含牛奶成分1%的标准溶液，表明样品中含有大于1%的牛奶成分。7
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A.1DNA浓度及纯度的测定
附录A
（规范性附录）
DNA浓度及纯度的测定及范围
取适量DNA溶液（6.2.1)，加灭菌水稀释一定倍数后，利用核酸蛋白分析仪或紫外分光光度计测定260nm和280nm的吸光度值。
A.1.1DNA溶液的浓度
DNA溶液的浓度以质量浓度c计，数值以微克每毫升（μug/mL）表示，按式（A.1)计算。c-A2eXNX50-
式中：
260nm处的吸光度值；
稀释倍数。
2DNA溶液的纯度
以A260/A280值表示DVA的纯度。A.2浓度及纯度的范围
A.2.1当c值大于40μg/mL，且A2Go/A2a值为1.7~1.9时，进行下一步PCR扩增实验；当Ao/A2值小于1.7或大于1.9时，则蛋白残留量过高.应再次纯化后，进行PCR扩增实验，2当c值小于40μg/mL，应重新进行提取，并减少TE缓冲液的加人量A.2.2
（规范性附录）
牛源性特定DNA序列
牛源性PCR扩增产物序列（无引物序列)如下：NY/T3050—2016
TAAGGGTTACGAGAGGGAGACCTAAAATTACAGGGGTAATAAAAGAGGTAAATAAATTTTCGTTCATTTTGTTTCTCAAGGGGTGTTTTGTTTTAATATTTTTGTTGGTGTCAGTTCTGGATTGTGATAAAAGTTGTGTTTTGAAACTTTTAGTTGAAAGATGATAAAAAGGGTCAAGAATATTGATAAGATCATTGTCAGTCATGTTGACGTGTCTAGTTGCGGCANY/T3050—2016
11cm胶条等电聚焦条件设置
见表C.1。
电压，V
17cm胶条等电聚焦条件设置
见表C.2。
电压，V
（资料性附录）
胶条等电聚焦条件
11cm胶条等电聚焦条件设置
升压方式
线性升压
快速升压
线性升压
快速升压
快速升压
设置时间
12h16h
40000vxh
任意时间
17cm胶条等电聚焦条件设置
升压方式
线性升压
快速升压
线性升压
快速升压
快速升压
设置时间
12h~16h
60000Vxh
任意时间
主动水化
主动水化
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