NY/T 3001-2016
基本信息
标准号:
NY/T 3001-2016
中文名称:饲料中氨基酸的测定 毛细管电泳法
标准类别:农业行业标准(NY)
标准状态:现行
出版语种:简体中文
下载格式:.rar .pdf
下载大小:10370KB
相关标签:
饲料
氨基酸
测定
毛细管
电泳
标准分类号
关联标准
出版信息
相关单位信息
标准简介
NY/T 3001-2016 饲料中氨基酸的测定 毛细管电泳法
NY/T3001-2016
标准压缩包解压密码:www.bzxz.net
标准内容
ICS65.120
中华人民共和国农业行业标准
NY/T 3001—2016
饲料中氨基酸的测定
毛细管电泳法
Determination of amino acidsinfeedCapillaryelectrophoresis
2016-11-01发布
2017-04-01实施
中华人民共和国农业部发布
本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草,本标准由农业部畜牧业司提出。本标准由全国饲料工业标准化技术委员会(SAC/TC76)归口NY/T3001—2016
本标准起草单位:中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所[国家饲料质量监督检验中心(北京))。
本标准主要起草人:李丽蓓、冯忠华、王彤、饶正华、崔品、魏书林、张苏、严明、严寒、唐健、田静刘晓露
1范围
饲料中氨基酸的测定
毛细管电泳法
本标准规定了饲料中氮基酸测定的毛细管电泳法。NY/T3001—2016
本标准适用于配合饲料、浓缩饲料、添加剂预混合饲料和饲料原料中氨基酸含量的测定。可测定的氨基酸种类包括胱氨酸、颗氨酸、精氨酸、天门冬氨酸、谷氨酸、组氨酸、脯氨酸、苏氨酸、丝氨酸、甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸与异亮氨酸之和、酪氨酸和苯丙氨酸的测定,不适用于蛋氨酸和色氨酸含量的测定。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用义件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T14699.1饲料采样
GB/T15399—1994饲料中含硫氨基酸测定方法—离子交换色谱法GB/T182462000饲料中氨基酸的测定GB/T20195动物饲料试样的制备
3原理
样品需在6mol/L盐酸中水解成单一氨基酸,经异硫氰酸苯酯溶液(PITC)衍生,再用毛细管电泳的方法进行分离和定量。但待测氨基酸不同.前处理方法有所不同。其中,胱氨酸必须在水解前用过甲酸氧化为磺基内氨酸,才能衍生测定,而酪氨酸必须用未氧化的样品水解测定;其他氨基酸则可选用上述任一方法处理测定。
4试剂和材料
除特殊注明外,本标准所用试剂均为分析纯和符合GB/T6682规定的级水。4.1碳酸钠溶液:c(Na2))=0.1mol/L:取(0.715士0.001)g碳酸钠.加15mL.水于25ml.的容量瓶中溶解,用水定容。溶液在塑料瓶中保存2个月。4.2异硫氰酸茉酯溶液(PITC溶液):取0.4ml.PITC于25mL棕色容量瓶中,用2-丙醇定容至刻度并且充分混合均匀。溶液在2℃~8℃的冰箱中保存2个月。取用PITC溶液尽量在通风柜中进行。4.3氢氧化钠溶液:称取2g氢氧化钠于250mL玻璃杯中.用水稀释至100mL。在塑料瓶中保存6个月。
4.4盐酸,cHCl)=1.0mol/I吸取8.3mL浓盐酸,置于容量瓶中,用水稀释并定容至100mL。4.5磷酸氢二钠溶液:取(4.78士0.01)g十二水磷酸氢二钠于100mL容量瓶中,溶解后定容。溶液保存2个月。
4.6磷酸二氢钠溶液:取(2.28十0.01)g一水合磷酸二氢钠或(2.57士0.01)g二水合磷酸二氢钠于100ml容量瓶中,溶解后定容至刻度。溶液保存2个月。4.7磷酸盐缓冲液(pH7.7~7.8):取50mL磷酸氢二钠溶液(4.5)和5ml磷酸二氢钠溶液(4.6)于100mL容量瓶中.用水定容。溶液保存2个月。1
NY/T3001—2016
4.8B-环糊精溶液:取(0.570±0.001)gβ-环糊精倒人50mL烧杯中,加人25mL~~30mL水并充分混合至完全溶解。若有必要,可将烧杯放在水浴锅中加热(温度不超过50℃)。溶解后转移至50ml的容量瓶中,用水定容并充分混合。溶液保存2个月。4.9背景电解液:取1CmLB-环糊精溶液(4.11)和10mL磷酸缓冲液(4.10)于25ml.容量瓶中,用水定容至刻度。溶液保存2周
4.1013种单一氨基酸储备溶液,4.0mg/ml:称取精氨酸盐酸盐(0.024200.00001)g,一水合组氨酸盐酸盐(0.02700±0.00001)g赖氨酸盐酸盐(0.02490±0.00001)g,丙氨酸、天冬氨酸、氨酸、甘氨酸、谷氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸各(0.02000+0.00001)g分别置于10mL带盖瓶中,分别准确加入5mL水溶解。若有必要,可在水浴锅中缓慢加热60℃~70℃来充分地溶解氨基其他氨基酸溶液保存4个月
酸。天冬氨酸和谷氨酸储备液保存1个月PNG免费标准下载网bzxz
夜.1.ormP分别最lo
技腺和3l水的准合RD
4.11苯丙氨酸和酪氨酸储备溶液JDA
液保存2个月。
4.12磺基丙氨酸谱备溶液,
收10.010.00主0.co
该储备质可
保存3个
解并定容至10ml
4.1313种氨基酸混合
00001)g的两种氨基酸,用1mL
使其完全溶解。储备
名磺基丙氨酸
于小玻璃瓶中,加水济
液:分别最山丙氩酸、精氨酸颜氨酸、组复氨酸、异亮氨酸、亮
价信备液(411))手带
氨酸、赖氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸的储备液(4.10)和200乱柔丙氨酸和酪水
盖小瓶中,加入
1充分混金。每种氨基酸的质量浓度为0.1mg1乐准溶液:分期取天冬氨酸
4.143种氨基酸混
储备液(4)
氨酸的
(4.12),加人1850
5仪器和设备
开充分混合
每种氨其酸的质量浓度均为0.1mg/ml文正服
5.1毛细管电泳仪
nm的紫外检测器
5.2天平:感量
5.3 pH计:(1~
5.4离心机:转速
干燥箱:恒温精确
热空气风扇或氮吹
滤膜:0.22m
6试样的制备和保存
min以
天细管
安游液保存2周
长范围
为240nm~260
按GB14699.1的规定抽取有代表性的样品,按四分法取样。按GB/T20195的规定制备试样,粉碎过0.25mm孔径筛,充分混匀。装人密闭容器中保存。7分析步骤
7.1样品前处理
7.1.1酸水解法
取0.1g(精确到0.0001g)试样于水解管中,按GB/T18246-2000中7.1.1.1常规酸水解法水解。水解后,取出水解管,冷却至室温,用滤纸过滤,弃去初始滤液,收集剩下滤液于带盖的容器中.待衍生、测定。
7.1.2氧化水解法
NY/T3001—2016
取0.1000g(精确到0.0001g)试样按GB/T15399—1994中7.1的规定执行。水解后,取出水解管冷却至室温,用滤纸过滤,弃去初始滤液,收集剩下的滤液于带盖的容器中,待衍生、测定。7.1.3异硫氰酸苯酯溶液(PITC)衍生取50上述两种水解物(7.1.1和7.1.2)于水解瓶中,并用热空气风扇或氮吹仪(5.6)吹干。依次加人150uL碳酸钠溶液(4.1)和300uLPITC溶液(4.2)并振荡直到沉淀溶解。盖上瓶盖放在室温下反应35min,再用热空气风扇或氮吹仪(5.6)吹干。用500uL水溶解残留物.5000r/min离心5min,上清液过0.22um滤膜(5.7)后用于上机分析
7.2标准曲线的制备
RUBLISY
7.2.113种混合氨基酸的标准曲线吸取13种氨基酸混合标准溶液①租300
磷酸钠溶
离心管中.依次加
在室温下反应
5min,上清液过0
40mg/L.60
肩或氮欢保
上机分析。
7.2.23种混合氨基酸的标准曲线种氨基酸混合标准溶液414)0
心管中,以下操作按
7.3测定
测试操
温度,
进样:
压力,n
时间,
高压,kv
分析:
压力,mb
时间.min
在规定的方法进行
分别置于3个1.5ml.聚丙烯
旋或振荡,然后盖上瓶盖放
溶解戏留物,5000r/min离心
基酸浓度分别为20mg/L、
作条件
个1.5mL聚丙烯离
注1:13种氨基酸的迁移出峰顺序:Arg.Lys,Tyr,Phe,His,Leu+Hle.Val.P'ro.Thr.Ser.Ala.Gly.注2:3种氨基酸的迁移出峰顺序:ohaAsp.cys7.3.2定量测定
按由低浓度到高浓度的顺序,分别将混合氨基酸的标准曲线加载到毛细管电泳仪上测定(所得电泳谱图见附录A),然后测定相应的衍生化试样。以迁移出峰时间定性(识别窗口宽度5%),外标法(以氨基酸浓度为纵坐标,峰面积为横坐标,绘制标准曲线)处量该法可测定各种氨氢基酸浓度范围见附录A,13种和3种氨基酸的毛细管电泳图谱参见附录B。如果一种或者儿种氨基酸的质量浓度超过了标准曲线的最高点:进一步对水解后的衍生物进行稀释
注1:每个测试溶液至少2张电泳图。注2:在进行5个7个样品检测后,应在仪器进出口换上新的背景电解液。3
NY/T3001—2016
注3:测定前后毛细管操作处理与冲洗方法参见附录C8结果计算与表示
8.1结果计算
试样中氨基酸(胱氨酸除外)含量X以质量分数(%)计,按式(1)计算。Xi
XDX100
mxV.x1000
式中:
试样水解物体积,单位为毫升(ml);每毫升上机溶液中氨基酸的质量,单位为微克每毫升(ug/ml);用于衍生的水解物的体积,单位为毫升(mL);稀释倍数:
称取的试样质量,单位为毫克(g):转换系数;
百分比系数。
试样中胱氨酸含量X以质量分数(%)计:按式(2)计算XxX.×120.2-2
式中:
半胱氨酸分子量;
磺基内氨酸分子量。
测定结果用平行测定的算术平均值表示,结果保留两位小数。9重复性
当含量小于或等于0.5%时,在重复性条件下获得的两次独立测定结果与其算术平均值的差值不大于这两个测定值算术平均值的10%;当含量大于0.5%时·在重复性条件下获得的两次独立测定结果与其算术平均值的差值不大于这两个测定值算术平均值的8%。
氨基酸的种类和测量范围见表A,1。表A.1
氨基酸
丙氨酸
精氨酸
天冬氨酸
缬氨酸
组氨酸
甘氨酸
谷氨酸
亮氨酸+异亮氨酸
赖氨酸
脯氨酸
丝氨酸
酪氨酸
苏氨酸
苯丙氨酸
胱氨酸
附录A
(规范性附录)
测量范围
氨基酸的种类和测量范围
Leu, e
Cys-Cys
NY/T3001—2016
测量范围,%
0.5~-10.0
0.25~-10.0
0.5~~10.0
0.25~-10.0
0.25~-20.0
0.25~-10.0
0.25~-10.0
0.25~10.0
C.25~10.0
0.25~-10.0
NY/T3001—2016
附录B
(资料性附录)
13种和3种氨基酸的毛细管电泳图谱B.113种混合氨基酸标准溶液的电泳图谱见图B.1。
图B.113种混合氨基酸标准溶液(20mg/L)的电泳图谱B.2
3种混合氨基酸标准溶液的电泳图谱见图B.2。
3种混合氨基酸标准溶液(20mg/L)的毛细管电泳图谱14
C.1新毛细管的处理
附录C
(资料性附录)
毛细管的处理
NY/T3001—2016
新毛细管的处理要结合毛细管电泳系统操作手册。若没有要求,依次用水、盐酸(4.4)、水、氢氧化钠溶液(4.3)、水和背景电解液(4.9)冲洗毛细管。每一步的时间为10min:C.2毛细管的日常处理
冲洗毛细管的顺序,先用水冲洗3min.然后用氢氧化钠溶液(4.3)冲洗5min,再用水冲洗5min:最后用背景电解液(4.9)冲洗10min。C.3试验前后毛细管的处理
每种溶液分析前,用背景电解液(4.9)冲洗毛细管3min。当分析样品溶液时,可能会产生背景响应不规则的飘移。如果出现这种现象,推荐使用:增加背景电解液冲洗的时间;在加高电压的情况下用背景电解液冲洗3min;更换人口和出口的背景电解液;依次用水(3min)、氢氧化钠溶液(5min)、水(3min)和背景电解液(10min)冲洗毛细管。在短时间(如过夜)放置时,用以下程序冲洗:水(2min)、盐酸(5min)、水(5min)保持毛细管的底部淹没在水中。
C.4毛细管的储存
短期的储存(不超过1周)毛细管应按照短期放置的情况储存。长期的储存(超过1周).用以下溶液充分地冲洗:先用水冲洗2min,再用氢氧化钠溶液(4.3)冲洗5min.接着用水冲洗5min.然后用盐酸(4.4)冲洗5min.用水冲洗10min,最后空气吹扫10min.保持毛细管干燥。
小提示:此标准内容仅展示完整标准里的部分截取内容,若需要完整标准请到上方自行免费下载完整标准文档。