标准号：GB 31660.6-2019 标准名称：动物性食品中5种α2-受体激动剂残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 英文名称：Determination of five kinds of alpha-ago ists residues in animal derived food by liquid chromatography- tandem mass spectrometry method 标准格式：PDF 发布时间：2019-09-06 实施时间：2020-04-01 标准大小：314K 标准介绍：食品安全国家标准 本标准规定了动物性食品中5种2-受体激动剂的制样和液相色谱串联质谱测定方法。 本标准适用于猪肌肉、肝脏和肾脏组织及鸡肌肉和肝脏组织中替扎尼定、赛拉嗪、溴莫 尼定、安普乐定和可乐定残留量的测定。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本 适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件 GBT6682分析实验室用水规格和试验方法 试样中残留的α受体激动剂，用碳酸钠缓冲溶液、乙酸乙酯提取，固相萃取柱净 液相色谱串联质谱测定，外标法定量 除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为符合GBT6682规定的一级水 4.1试剂 41.1乙腈(CHCN)：色谱纯 4.1.2甲酸( HCOOH)：色谱纯 4.1.3甲醇(CH3OH) 414氨水(NHOH) 41.5无水碳酸钠(Na2CO3)。 41.6碳酸氢钠( Nahco3) 41.7乙酸乙酯(CH3 COOC,H) 4.2溶液配制 42.1碳酸钠溶液：取无水碳酸钠10.6g,用水溶解并稀释至100mL 42.2碳酸氢钠溶液：取碳酸氢钠84g,用水溶解并稀释至100mL 42.3碳酸钠缓冲溶液：取碳酸钠溶液90mL、碳酸氢钠溶液10mL,混匀，现用现配。 42.4甲酸溶液(0.2%)：取甲酸1mL,用水溶解并稀释至500mL。4.2.5甲酸-乙腈溶液：取02%甲酸溶液80mL,加乙腈20m,混匀4.2.6氨水甲醇溶液(5%)：取氨水5mL,用甲醇溶解并稀释至100mL。

中华人民共和国国家标准
GB31660.62019
食品安全国家标准
动物性食品中5种α2-受体激动剂残留量的测定
液相色谱-串联质谱法
National food safety standard-Determination of five kinds of alpha-agonists residues in animaderivedfoodby Iiquid chromatography-tandemmass spectrometrymethod2019-09-06发布
中华人民共和国农业农村部
中华人民共和国国家卫生健康委员会国家市场监督管理总局
2020-04-01实施
本标准系首次发布。
GB31660.62019
1范围
食品安全国家标准
GB31660.62019
动物性食品中5种α2-受体激动剂残留量的测定液相色谱-串联质谱法
本标准规定了动物性食品中5种2-受体激动剂的制样和液相色谱-串联质谱测定方法本标准适用于猪肌肉、肝脏和肾脏组织及鸡肌肉和肝脏组织中替扎尼定、赛拉嗪、溴莫尼定、安普乐定和可乐定残留量的测定规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3原理
试样中残留的α2-受体激动剂，用碳酸钠缓冲溶液、乙酸乙酯提取，固相萃取柱净化，液相色谱-串联质谱测定，外标法定量。4试剂和材料
除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为符合GB/T6682规定的一级水。4.1试剂
4.1.1乙（CHCN）：色谱纯。
4.1.2甲酸（HCOOH）：色谱纯
4.1.3甲醇（CH,OH）。
氨水（NHOH）。
无水碳酸钠（Na2CO3）。
碳酸氢钠（NaHCO,）。
乙酸乙酯（CHCOOCH）。
4.2溶液配制
碳酸钠溶液：取无水碳酸钠10.6g，用水溶解并稀释至100mL。碳酸氢钠溶液：取碳酸氢钠8.4g，用水溶解并稀释至100mL。碳酸钠缓冲溶液：取碳酸钠溶液90mL、碳酸氢钠溶液10mL，混匀，现用现配。甲酸溶液（0.2%）：取甲酸1mL，用水溶解并稀释至500mL。4.2.4
甲酸-乙晴溶液：取0.2%甲酸溶液80mL，加乙睛20mL，混匀。4.2.5
4.2.6氨水甲醇溶液（5%）：取氨水5mL，用甲醇溶解并稀释至100mL。4.3标准品
盐酸替扎尼定（Tizanidinehydrochloride,C,H.CIN,S·HCl,CAS:64461-82-1）、盐酸赛拉嗪（XylazineHydrochloride,Cr2HiN,S,CAS:7361-61-7）、溴莫尼定（Brimonidine,C1HoBrNsCAS:59803-98-4）、盐酸安普乐定（Apraclonidinehydrochloride,C,HioN4Cl2·HCl1
GB31660.62019
CAS:73218-79-8）和盐酸可乐定（Clonidinehydrochloride,CHioClN3，CAS:4205-91-8）：含量均≥98%。
4.4标准溶液制备
4.4.1标准贮备液：取盐酸替扎尼定、盐酸赛拉嗪、溴莫尼定、盐酸安普乐定和盐酸可乐定标准品各约10mg，精密称定，分别于10mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，配制成浓度均为1mg/mL的盐酸替扎尼定、盐酸赛拉嗪、溴莫尼定、盐酸安普乐定和盐酸可乐定标准贮备液。2～8℃保存，有效期6个月。4.4.2混合标准工作液：分别精密量取上述标准购备液各1mL，手100mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，配制成浓度为10μg/mL的混合标准工作液。于2～8℃保存，有效期1个月。
4.4.3标准曲线制备：分别精密量取混合标准工作液适量，用甲酸-乙溶液稀释配制成浓度为0.5、1、10、50和100ug/L系列混合标准工作液，临用现配4.5材料
4.5.1固相萃取MCX柱：60mg/3mL，或相当者。4.5.2滤膜：有机相，0.22μm。5仪器和设备
5.1液相色谱-串联质谱仪：配电喷雾电离源。5.2分析天平：感量0.00001g和0.01g。5.3均质机。
5.4离心机。
5.5涡旋振荡器。
5.6旋转蒸发仪。
固相萃取装置。
5.8鸡心瓶。
5.9离心管：50mL。
试料的制备与保存
6.1试料的制备
取适量新鲜或解冻的空白或供试组织，绞碎并使均质。取均质的供试样品，作为供试试料。取均质的空白样品，作为空白试料。一取均质的空白样品，添加适宜浓度的标准工作液，作为空白添加试料。6.2样品的保存
-20℃以下保存。
测定步骤
7.1提取
GB31660.62019
取试料2g（准确至土20mg），于50mL离心管中，加碳酸钠缓冲液5mL，振荡混匀，加乙酸乙酯10mL，充分振荡，于8000r/min离心5min，取上清液于鸡心瓶中，下层溶液中加乙酸乙酯10mL重复提取一次，合并两次上清液。于55℃旋转蒸发至干，加甲酸-乙睛溶液4.0mL溶解残余物，备用。
7.2净化
MCX柱依次用甲醇、水各3mL活化。取备用液过柱，用水3mL、甲醇3mL分别淋洗，挤干，氨水甲醇溶液6mL洗脱，收集洗脱液，于60℃旋转蒸发至干，用甲酸-乙睛溶液1.0mL溶解残余物，滤过，液相色谱-串联质谱测定。7.3测定
7.3.1色谱条件
a）色谱柱：Ci8（100mmx3.0mm，粒径1.8jμm），或相当者：b）柱温：30℃；
c）进样量：10μL；
d）流速：0.3mL/min；
e）流动相：A：乙睛：B：0.2%甲酸溶液，梯度洗脱程序见表1。表1梯度洗脱程序
7.3.2质谱条件
a）离子源：电喷雾离子源；
b）扫描方式：正离子扫描；
c）检测方式：多反应监测；
d）离子源温度：150℃：
A：乙腈
B：0.2%甲酸溶液
e）脱溶剂温度：500℃；
f）毛细管电压：3.0V；
g）定性离子对、定量离子对及锥孔电压和碰撞能量见表2。表25种α2受体激动剂类药物的质谱参数被测物名称
替扎尼定
赛拉嗪
溴莫尼定
安普乐定
可乐定
7.4测定法
7.4.1定性测定
定性离子对
254.1>44.1
254.1>210.0
221.1>90.0
221.1>164.0
292.2>170.2
292.2>212.3
245.2>174.2
245.2>209.2
230.0>160.0
230.0>213.0
定量离子对
254.1>44.1
221.1>90.0
292.2>212.3
245.2>174.2
230.0>213.0
锥孔电
GB31660.62019
碰撞能量
在同样测试条件下，试样液中α2-受体激动剂的保留时间与标准工作液中相应α2-受体激动剂的保留时间之比，偏差在±5%以内，且检测到离子的相对丰度，应当与浓度相当的校正标准溶液相对丰度一致，其允许偏差应符合表3要求。表3定性确证时相对离子丰度的最大允许误差相对离子丰度%
允许的最大偏差%
7.4.2定量测定
取试样溶液和相应的标准工作液，按外标法以峰面积定量，标准工作液及试样溶液中的α2受体激动剂类响应值均应在仪器检测的线性范围内。在上述条件下，αz受体激动剂标准溶液特征离子质量色谱图见附录A。7.5空自试验
除不加试料外，采用完全相同的步骤进行平行操作。结果计算和表述
试料中待测药物的残留量按式（1）计算：4
式中：
C,×A×V
GB31660.62019
（1）
-供试试料中相应的α2受体激动剂类药物残留量，单位为微克每千克（ug/kg）：-标准溶液中相应的α2受体激动剂类药物浓度，单位为微克每升（μug/L）；-试样溶液中相应的α2受体激动剂类药物的色谱峰面积：As—标准溶液中相应的α2受体激动剂类药物色谱峰面积：V溶解残余物所用的溶液体积，单位为毫升（mL)；m供试试料质量，单位为克（g)；计算结果需扣除空白值，测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留两位有效数字9
检测方法灵敏度、准确度和精密度灵敏度wwW.bzxz.Net
本方法的检测限为0.5μg/kg，定量限为1μg/kg。9.2准确度
本方法在1～100μg/kg添加浓度水平上的回收率为60%～100%。9.3精密度
本方法批内相对标准偏差≤15%，批间相对标准偏差≤20%。5
附录A
（资料性附录）
特征离子质量色谱图
GB31660.62019
3: MRM of 2 Channels ES+
245.2 :174.2(Apraconidine)
5: MRM of 2 Channels Es+
292.2 ≥ 212.3 (Brmoni cine)5.34e5
4: MRM of 2 Channels ES+
254.051 = 44.1 (Tizani cline)3.89e5
2: MRM of2 Channels ES+
230 > 213 (Cloni dine)
1: MRM of 2 Channels ES+
221.1 ≥ 90 (Xyezine)
++++++++++ Tirne
110ug/La,受体激动剂类药物标准溶液特征离子质量色谱图图A.1
1-赛拉嗪特征离子质量色谱图（221.1>90.0）2-可乐定特征离子质量色谱图（230.0>213.0）3-替扎尼定特征离子质量色谱图（254.1>44.1）4-溴莫尼定特征离子质量色谱图（292.2>212.3）5-安普乐定特征离子质量色谱图（245.2>174.2）6
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