GB/T 39995-2021
基本信息
标准号： GB/T 39995-2021
中文名称：甾醇类物质的测定
标准类别：国家标准(GB)
标准状态：现行
发布日期：2021-04-30
实施日期：2021-11-01
出版语种：简体中文
下载格式：.zip .pdf
下载大小：2935903
标准分类号
标准ICS号： 数学、自然科学>>07.080生物学、植物学、动物学
中标分类号：综合>>基础学科>>A40基础学科综合
关联标准
出版信息
出版社：中国标准出版社
页数：12页
标准价格：29.0
出版日期：2021-04-01
相关单位信息
起草人：冯德建、张雅芬、李延芳、吴微、叶子弘、黄秀丽、王晓琴、马爱进、李怀平、俞晓平、黄超群、叶善蓉、周李华、崔海峰、许益鹏、申屠旭萍、李翼、陈丽
起草单位：中国测试技术研究院生物研究所、中国计量大学、四川大学、惠州市食品药品检验所、北京工商大学、浙江省检验检疫科学技术研究院、河北省食品检验研究院、北京萨姆博科技有限公司
归口单位：全国生化检测标准化技术委员会(SAC/TC 387)
提出单位：全国生化检测标准化技术委员会(SAC/TC 387)
发布部门：国家市场监督管理总局 国家标准化管理委员会
标准简介
GB/T 39995-2021.Determination of sterols.
1范围
GB/T 39995规定了甾醇类物质的液相色谱-质谱/质谱测定方法。
GB/T 39995适用于猪油、菜籽油、核桃、山楂、油麦菜、葛根、大米、小麦、黑青豆中游离态的胆甾烷醇、菜籽甾醇、菜油甾醇、豆甾醇、β-谷甾醇、岩藻甾醇、羊毛甾醇、豆甾烷醇、麦角甾醇含量的测定。
2规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法
GB/T 15687动植物油脂试样的制备
3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
3.1
甾醇类物质 sterols
一类含环戊烷骈多氢菲碳架结构的化合物。
4原理
样品经无水乙醇回流提取,提取液过0.22μm尼龙滤膜后供液相色谱质谱/质谱仪测定,标准曲线内标法定量。
5试剂或材料
除非另有说明,本方法使用的试剂均为分析纯。水为GB/T 6682规定的一级水。
5.1甲醇:色谱纯。
5.2无水乙醇:色谱纯。
5.3甾醇标准品:胆甾烷醇、菜籽甾醇、菜油甾醇、豆甾醇、β谷甾醇、岩藻甾醇、羊毛甾醇、豆甾烷醇、麦角甾醇、6-酮胆甾烷醇,化合物信息参见附录A中表A.1,纯度均≥93%。
5.4内标储备液:准确称取适量6-酮胆甾烷醇标准品(精确至0.01mg),用无水乙醇溶解并配制成质量浓度为500 mg/L的内标储备溶液,于0 °C~4 °C下避光保存备用,有效期为1个月。
5.5 内标工作溶液:准确移取内标储备液2.0 mL于1000 mL容量瓶中,加无水乙醇稀释并定容至刻度,混匀,配制成质量浓度为1.0μg/mL内标工作溶液,现配现用。
本文件规定了甾醇类物质的液相色谱-质谱/质谱测定方法。 本文件适用于猪油、菜籽油、核桃、山楂、油麦菜、葛根、大米、小麦、黑青豆中游离态的胆甾烷醇、菜籽甾醇、菜油甾醇、豆甾醇、β-谷甾醇、岩藻甾醇、羊毛甾醇、豆甾烷醇、麦角甾醇含量的测定。
1范围
GB/T 39995规定了甾醇类物质的液相色谱-质谱/质谱测定方法。
GB/T 39995适用于猪油、菜籽油、核桃、山楂、油麦菜、葛根、大米、小麦、黑青豆中游离态的胆甾烷醇、菜籽甾醇、菜油甾醇、豆甾醇、β-谷甾醇、岩藻甾醇、羊毛甾醇、豆甾烷醇、麦角甾醇含量的测定。
2规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法
GB/T 15687动植物油脂试样的制备
3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
3.1
甾醇类物质 sterols
一类含环戊烷骈多氢菲碳架结构的化合物。
4原理
样品经无水乙醇回流提取,提取液过0.22μm尼龙滤膜后供液相色谱质谱/质谱仪测定,标准曲线内标法定量。
5试剂或材料
除非另有说明,本方法使用的试剂均为分析纯。水为GB/T 6682规定的一级水。
5.1甲醇:色谱纯。
5.2无水乙醇:色谱纯。
5.3甾醇标准品:胆甾烷醇、菜籽甾醇、菜油甾醇、豆甾醇、β谷甾醇、岩藻甾醇、羊毛甾醇、豆甾烷醇、麦角甾醇、6-酮胆甾烷醇,化合物信息参见附录A中表A.1,纯度均≥93%。
5.4内标储备液:准确称取适量6-酮胆甾烷醇标准品(精确至0.01mg),用无水乙醇溶解并配制成质量浓度为500 mg/L的内标储备溶液,于0 °C~4 °C下避光保存备用,有效期为1个月。
5.5 内标工作溶液:准确移取内标储备液2.0 mL于1000 mL容量瓶中,加无水乙醇稀释并定容至刻度,混匀,配制成质量浓度为1.0μg/mL内标工作溶液,现配现用。
本文件规定了甾醇类物质的液相色谱-质谱/质谱测定方法。 本文件适用于猪油、菜籽油、核桃、山楂、油麦菜、葛根、大米、小麦、黑青豆中游离态的胆甾烷醇、菜籽甾醇、菜油甾醇、豆甾醇、β-谷甾醇、岩藻甾醇、羊毛甾醇、豆甾烷醇、麦角甾醇含量的测定。
标准图片预览
标准内容
1CS07.080
CCS A 40
中华人民共和国国家标准
GB/T39995—2021
留醇类物质的测定
Determinationof sterols
2021-04-30发布
国家市场监督管理总局
国家标准化管理委员会
2021-11-01实施
中华人民共租国
国家标滩
笛醇类物质的测定
GB/T39305—2021
中国标准山版社出版发行
北京市朝阳区和平里西街币2号（100029)北京市西城区三里河北街16号（100043)网址：spc.org.cn
服务热线：4001580010
2021年4月第一版
书号: 155066 -1-67034
版权专有
侵权必究
-rKaeerkca-
GB/T 39995—2021
本文件按照GB/T1.12020%标准化工作导则」第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任本文件由全国生化检测标准化技术委员会（SAC/TC387)提出并归口本文件起草单位：中国测诚技术研究院生物研究所、中国计量人学、四川人学、惠州市食品药品检验所、北京工商人学、浙江省检验检疫科学技术研究院、河北省食品检验研究院、北京萨姆博科技有限公司，
木文件主要起草人：冯德建、张雅芬、夺延芳、吴微、叶子弘、黄秀丽、王晓琴、马爱逊、李怀平、俞晓平、黄超群、叶善蓉、周李华、崔海峰、许益鹏、中居加萍、李翼、陈丽、关娟、贾英民、张岩、郝帅-riKaeerKAca-
-riKacerKAca-
1范围bzxz.net
留醇类物质的测定
本文件规定了留醇类物质的液相色谱-质谱/质谱测定方法。GB/T 39995—2021
木文件适用丁猪油、菜籽油、核桃、山楂、油麦菜、葛根、大米、小麦、黑青立中游离态的胆烷醇、菜籽酱醇、荣油笛醇、豆笛醇、3-谷备醇、岩藻鱼醇、羊毛笛醇、豆笛烷醇、麦角留醇含量的测定。2规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款，其中，注Ⅱ期的引用义件，仅该日期刘应的版本适用丁本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修收单)适用丁本文件。
：分析实验室用水规格和试验方法GB/T 6682
GB/T15687动植物油脂试样的制备3术语和定义
下列术语和定义适用丁本文件。3.1
甾醇类物质sterols
类含环戊烷多氢非碳架结构的化合物，4原理
样品经无水乙醇回流提取，提取液过0.22um尼龙滤膜后供液相色谱-质谱/质谱仪测定，标准曲线内标法定量
5试剂或材料
除非另有说明本方法使用的试剂均为分析纯。水为（13/T6682规定的-级水，5.1甲醇：色谱纯。
5.2无水乙醇：色谱纯
5.3笛醇标准品：胆笛烷醇、菜籽笛醇、菜油留醇、豆笛醇、3-谷留醇、岩藻笛醇、羊毛留醇、豆笛烷醇、友角陷醇、6-酮胆件烷醇，化合物信息参见附录A中表A.1，纯度均丝93%。5.4内标储备液：准确称取适量6酮胆留烷醇标准品（精确至0.01m），用无水乙醇溶解并配制成质量浓度为500mg/1.的内标储备溶液，于0~4下避光保存备用，有效期为1个月。5.5内标工作溶液：准确移内标储备液2.0ImL丁1000nL容量瓶中，加水乙醇稀释并定容至刻度，混勺.配制成质量浓度为1.0pg/mL内标工作落液.现配现用5.6备婷单一标准储备液：分别准确称取适量的备醇标准品（精确至0.01mg），用无水乙醇溶解升配制1
rKaeerkAca-
GB/T39995—2021
成质量浓度均为500mg/L的醇单：标准储备溶液，于0℃~4℃下避光保存备用，有效期为1个片5.7留醇混合标准溶液：分别准确移取各备醇单一标准储备液2.0ml.于50ml.具塞离心管中，于10下氮气吹干，准确加人10ml.内标工作溶液复溶，混匀.配制成质量浓度均为100mg/1.的备醇混合标准溶液，现配现用。
5.8陷醇混合标准工作溶液：准确移取适量饰醇混合标准溶液.用内标工作溶液稀释配制成质量浓度分别为20mg/L、10mg/L、5mg/L、2.5mg/L、1.0mg/L、0.5mg/L、0.25mg/L的系列笛醇混合标准上作溶液，现配现用。
5.90.22um尼龙滤膜。
6仪器设备
液相色谱-质谱/质谱仪（IC-MS/MS）：配人气压化学离了源（APCI）6.2
分析天平感量为0.0001g.0.01g和0.01mg6.3涡旋混勺器。
回流冷凝装置。
氮吹仪。
粉碎机。
勾浆机。
6.8离心机。
7样品
7.1猪油、菜籽油
按（G13/T15687的规定进行制备，7.2核桃、山楂、大米、小麦、油麦菜、葛根、黑青豆取核桃、山楂、人米、小麦、黑青豆等有代表性干制样品约【kg·用粉碎机粉碎，混勾，制备好的试样均分成两份，装人洁净的盛样容器内·密封并标识.于0℃4℃下避光保存，尽快测定，取油友菜，葛根等有代表性新鲜样品约！k，用匀浆机制成匀浆，制备好的试样均分成两份，装人洁净的盛样容器内，密封并标识,现制现用。8试验步骤
8.1试样处理
8.1.1猪油、菜籽油
称取试样0.4g（精确至0.001g）于250mL圆底烧瓶中，加人70mL内标T作溶液（5.5）.称重.充分混句后放人向流冷凝器巾，加热并保持提取液微沸，30mim后停正加热并冷划至案温，用无水乙醇（5.2）补足失重，混匀.吸取5ml.提取液于8000r/min下离心5min.取2ml上清液过0.22pm尼龙滤膜.待测。
8.1.2核桃、山楂、大米、小麦、油麦菜、葛根、黑青豆称取试样1.0g（精确至0.001g）于250mL圆底烧瓶中，加入70mL内标上作溶液（5.5）称重，充2
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GB/T39995—2021
分混勾后放入回流冷凝器中，加热并保持提取液微沸，30min后停正加热并冷却至温·用无水乙醇（5.2）补足火重，混匀.吸取5ml.提取液于8000r/min下离心5min.取2ml.清液过0.22μm尼龙滤膜，待测。
8.2测定
液相色谱参考条件
液相色谱参考条件如下所示：
色谱柱：C柱，1.8um，3.0mm×150mm，或同等性能的色谱杜；a
b）流动：流动朴A为水，流动相B为甲醇.梯度洗脱程序见表1；流迷：0.5ml/min；
柱温：30℃：
进样量：5
表1流动相梯度洗脱程序
时间/min
注：不同型号仪器可做迁当调整质谱参考条件
质谱参考条件如下所示：
流动相A休积分数/%
a）离子源：大气压化学离子源（APCI)：扫描方式：正离了模式；
检测方式：多反应监测（MRM)：c
流动相B积分数/%
下燥气、雾化气、碰撞气均为高纯氮气：使用前应调节各气体流量以使质谱灵度达到检测要求，参考条件参见附录B：
喷案电压、源内碎裂电压、碰撞气能量等参数应优化至最伟灵敏度，参考条件参见附录3注：不同型号仪器可做适准调整。8.2.3定性测定
在相同试验条件（见8.2.1、8.2.2)下进行样品测定时，如果样品中待测物质的保留时间与标准工作溶液中对应的保留时间一致（变化范国在二2.5%以内），H样品谱图中被测组分监测离了的相对丰度和标准品的相对丰度一致，允许偏差不超过2规定的范用，则可判断样品中存在对应的被测物，表2定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度/%
允许的相对偏差/%
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10--20
GB/T39995—2021
8.2.4定量测定
在相同试验条件(8.2.1、8.2.2),将留醇系列混合标准工作溶液由低到高浓度依次进样分析，以被测物和内标物的定量离子峰面积之比为纵坐标,以被测物浓度为横坐标，绘制内标标准工作曲线，用内标标准工作曲线对样品进行定量，应使样品溶液中各被测物的响应值在仪器测定的线性范围内如果含量超过标准工作曲线范用，应稀释到合适浓度后再进样分析。在上述条件下，各留醇类物质的参考保留时问参见附录中表1，多反应监测图参见附录（，8.3平行试验
按8.1和8.2的规定对同一试样迹行两次平行测定试验数据处理
样品中待测物含量的计算见式（1)：-0xV
式中：
X—试样中被测组分含量.单位为毫克每千克（mg/kg）；P——从内标标准工作曲线上得到的被测组分溶液质量浓度，单位为微克每毫升(g/ml.)；试样溶液定容体积，单位为毫升（mL）；V
m—试样的质量，单位为克（g）。计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均估表示，结果保留两位小数精密度
在重复性条件下然得的两次独立测定结果的绝刘差值不得超过算术平均值的15%11其他
本方法测定9种笛醇的定量限参见表A.1。rKaeerkAca-
附录A
（资料性）
留醇化合物信息及定量限
备醇化合物信息及定量限见表A.1表A.1
中文名称
麦角留醇
菜籽酱醇
岩藻鲨醇
羊毛密醇
肽留烷醇
导笛醇
菜汕南醇
子谷笛醇
豆嘴烷醇
6-酮胆葡烷醇
英文名称
Ergosterol
Brassicasicrol
Fucosteral
L.anoste:rol
3-Cholestanol
Stigmasterol
Carnpesterol
β-Sitosterol
Stigmastanol
6-Ketocholestanol
备醇化合物信息及定量限
相对分子
CAS号
474-67-9
17605-87-3
79-63-0
80-97-7
83-18-7
474-62-41
8:3-46-5
19166-47-8
1175-06-0
分子式
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猪油、
荣籽油
GB/T39995—2021
定量限/（mg/kg）
核桃、山楂、葛根、油友荣
人米、小麦、黑青豆
GB/T 39995—2021
参考质谱条件如下：
附录B
（资料性）
液相色谱-质谱/质谱参数参考条件离子源：大气压化学离子源（APCI)：扫描方式：正离了模式：
检测方式：多反应监测（MRM)；1燥气、雾化气、碰撞气均为高纯氮气：雾化气压力：0.14MPa(20psi)；离子喷雾电压：3000V：
电举针电流：4μA：
1燥气温度：350℃；
雾化器温度：350℃；
+燥气流速：5.0L/min；
定量离了对、定性离了对、碰撞气能量和源内碎裂电压见表13.1，10种备醇的保留时间、监测离子对、碰撞气能量和源内碎裂电压表B.1
中文名称
麦角笛醇
菜籽笛醇
岩藻笛醇
羊毛留醇
肝笛烷醇
豆笛醇
菜油笛醇
3-谷甾醇
豆笛烷醇
多酮胆甾烷醇
保留时间/min
定量离了对m/t
379.4/69.0
381.4/69.0
395.5/81.0
109.4/109.0
371.4/81.1
411.3/109.0
383.4/161.1
397.5/161.0
399.5/81.1
385.3/367.4
定性离广对/
379.4/69.0.379.4/125.0
381.4/147.0;381.4/69.0
395.5/81.0:395.5/147.0
409.4/109.6:409.4/119.0
371.4/81.1:371.4/109.0
411.3/109.0:111.3/139.0
383.1/161.1;383.4/05.1
397.5/161.0;397.5/135.1
389.5/81.1399.5/149.0
385.3/367.4;385.3/159.2
碰撞气能量/V
源内碎裂电压/V
注：所列参数是在Agilr:nt6460质讲仪1完成的，列出试验用仪器型号仅供参考，标准使用者可采用不同厂家或型号的仪器。
-rrKaeerKAca-
附录C
（资料性）
10种留醇的LC-MS/MS多反应监测图10种备醇的LCMS/MS多反成监测图见图C.1~图C.10+MRM(385.3->367.4)std6.d
13.13muin
6-酮胆留烷醇的MRM图
+MRM(395. 5 -> 81. 0) STD-fux103
17.87 min
岩藻甾醇的MRM图
+MRM(411.3 > 109. 0) STD-s
图 C.7豆醇的MRM图
+ MRM(379. 4 -> 69. 0) STD-cr x10 5
16.64 min
麦角甾醇的MRM图
+MRM(409. 4 -> 109. 0) STD-1xio 4
图C.5羊毛留醇的MRM图
+MRM(383. 4 > 161. 1) STD-c
图C.8菜油笛醇的MRM图
-rrKaeerkca-
GB/T 39995-2021
+MRM(381.4 -> 69. 0) brassicx1o 4
菜籽醇的MRM图
+MRM(371.4 -> 81. 1) STD-ch
胆留烷醇的 MRM 图
+MRM(397. 5 -> 161. 0) STD-bx104-
图C.9β-谷笛醇的MRM图
GB/T 39995—2021
GB/T39995-2021
+MRM(399. 5 -> 81. 1) STD 8ti3
豆笛烷醇的MRM图
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书号：135066·1-67034
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CCS A 40
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2021年4月第一版
书号: 155066 -1-67034
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本文件按照GB/T1.12020%标准化工作导则」第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任本文件由全国生化检测标准化技术委员会（SAC/TC387)提出并归口本文件起草单位：中国测诚技术研究院生物研究所、中国计量人学、四川人学、惠州市食品药品检验所、北京工商人学、浙江省检验检疫科学技术研究院、河北省食品检验研究院、北京萨姆博科技有限公司，
木文件主要起草人：冯德建、张雅芬、夺延芳、吴微、叶子弘、黄秀丽、王晓琴、马爱逊、李怀平、俞晓平、黄超群、叶善蓉、周李华、崔海峰、许益鹏、中居加萍、李翼、陈丽、关娟、贾英民、张岩、郝帅-riKaeerKAca-
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留醇类物质的测定
本文件规定了留醇类物质的液相色谱-质谱/质谱测定方法。GB/T 39995—2021
木文件适用丁猪油、菜籽油、核桃、山楂、油麦菜、葛根、大米、小麦、黑青立中游离态的胆烷醇、菜籽酱醇、荣油笛醇、豆笛醇、3-谷备醇、岩藻鱼醇、羊毛笛醇、豆笛烷醇、麦角留醇含量的测定。2规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款，其中，注Ⅱ期的引用义件，仅该日期刘应的版本适用丁本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修收单)适用丁本文件。
：分析实验室用水规格和试验方法GB/T 6682
GB/T15687动植物油脂试样的制备3术语和定义
下列术语和定义适用丁本文件。3.1
甾醇类物质sterols
类含环戊烷多氢非碳架结构的化合物，4原理
样品经无水乙醇回流提取，提取液过0.22um尼龙滤膜后供液相色谱-质谱/质谱仪测定，标准曲线内标法定量
5试剂或材料
除非另有说明本方法使用的试剂均为分析纯。水为（13/T6682规定的-级水，5.1甲醇：色谱纯。
5.2无水乙醇：色谱纯
5.3笛醇标准品：胆笛烷醇、菜籽笛醇、菜油留醇、豆笛醇、3-谷留醇、岩藻笛醇、羊毛留醇、豆笛烷醇、友角陷醇、6-酮胆件烷醇，化合物信息参见附录A中表A.1，纯度均丝93%。5.4内标储备液：准确称取适量6酮胆留烷醇标准品（精确至0.01m），用无水乙醇溶解并配制成质量浓度为500mg/1.的内标储备溶液，于0~4下避光保存备用，有效期为1个月。5.5内标工作溶液：准确移内标储备液2.0ImL丁1000nL容量瓶中，加水乙醇稀释并定容至刻度，混勺.配制成质量浓度为1.0pg/mL内标工作落液.现配现用5.6备婷单一标准储备液：分别准确称取适量的备醇标准品（精确至0.01mg），用无水乙醇溶解升配制1
rKaeerkAca-
GB/T39995—2021
成质量浓度均为500mg/L的醇单：标准储备溶液，于0℃~4℃下避光保存备用，有效期为1个片5.7留醇混合标准溶液：分别准确移取各备醇单一标准储备液2.0ml.于50ml.具塞离心管中，于10下氮气吹干，准确加人10ml.内标工作溶液复溶，混匀.配制成质量浓度均为100mg/1.的备醇混合标准溶液，现配现用。
5.8陷醇混合标准工作溶液：准确移取适量饰醇混合标准溶液.用内标工作溶液稀释配制成质量浓度分别为20mg/L、10mg/L、5mg/L、2.5mg/L、1.0mg/L、0.5mg/L、0.25mg/L的系列笛醇混合标准上作溶液，现配现用。
5.90.22um尼龙滤膜。
6仪器设备
液相色谱-质谱/质谱仪（IC-MS/MS）：配人气压化学离了源（APCI）6.2
分析天平感量为0.0001g.0.01g和0.01mg6.3涡旋混勺器。
回流冷凝装置。
氮吹仪。
粉碎机。
勾浆机。
6.8离心机。
7样品
7.1猪油、菜籽油
按（G13/T15687的规定进行制备，7.2核桃、山楂、大米、小麦、油麦菜、葛根、黑青豆取核桃、山楂、人米、小麦、黑青豆等有代表性干制样品约【kg·用粉碎机粉碎，混勾，制备好的试样均分成两份，装人洁净的盛样容器内·密封并标识.于0℃4℃下避光保存，尽快测定，取油友菜，葛根等有代表性新鲜样品约！k，用匀浆机制成匀浆，制备好的试样均分成两份，装人洁净的盛样容器内，密封并标识,现制现用。8试验步骤
8.1试样处理
8.1.1猪油、菜籽油
称取试样0.4g（精确至0.001g）于250mL圆底烧瓶中，加人70mL内标T作溶液（5.5）.称重.充分混句后放人向流冷凝器巾，加热并保持提取液微沸，30mim后停正加热并冷划至案温，用无水乙醇（5.2）补足失重，混匀.吸取5ml.提取液于8000r/min下离心5min.取2ml上清液过0.22pm尼龙滤膜.待测。
8.1.2核桃、山楂、大米、小麦、油麦菜、葛根、黑青豆称取试样1.0g（精确至0.001g）于250mL圆底烧瓶中，加入70mL内标上作溶液（5.5）称重，充2
-riKacerKAca-
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分混勾后放入回流冷凝器中，加热并保持提取液微沸，30min后停正加热并冷却至温·用无水乙醇（5.2）补足火重，混匀.吸取5ml.提取液于8000r/min下离心5min.取2ml.清液过0.22μm尼龙滤膜，待测。
8.2测定
液相色谱参考条件
液相色谱参考条件如下所示：
色谱柱：C柱，1.8um，3.0mm×150mm，或同等性能的色谱杜；a
b）流动：流动朴A为水，流动相B为甲醇.梯度洗脱程序见表1；流迷：0.5ml/min；
柱温：30℃：
进样量：5
表1流动相梯度洗脱程序
时间/min
注：不同型号仪器可做迁当调整质谱参考条件
质谱参考条件如下所示：
流动相A休积分数/%
a）离子源：大气压化学离子源（APCI)：扫描方式：正离了模式；
检测方式：多反应监测（MRM)：c
流动相B积分数/%
下燥气、雾化气、碰撞气均为高纯氮气：使用前应调节各气体流量以使质谱灵度达到检测要求，参考条件参见附录B：
喷案电压、源内碎裂电压、碰撞气能量等参数应优化至最伟灵敏度，参考条件参见附录3注：不同型号仪器可做适准调整。8.2.3定性测定
在相同试验条件（见8.2.1、8.2.2)下进行样品测定时，如果样品中待测物质的保留时间与标准工作溶液中对应的保留时间一致（变化范国在二2.5%以内），H样品谱图中被测组分监测离了的相对丰度和标准品的相对丰度一致，允许偏差不超过2规定的范用，则可判断样品中存在对应的被测物，表2定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度/%
允许的相对偏差/%
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10--20
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8.2.4定量测定
在相同试验条件(8.2.1、8.2.2),将留醇系列混合标准工作溶液由低到高浓度依次进样分析，以被测物和内标物的定量离子峰面积之比为纵坐标,以被测物浓度为横坐标，绘制内标标准工作曲线，用内标标准工作曲线对样品进行定量，应使样品溶液中各被测物的响应值在仪器测定的线性范围内如果含量超过标准工作曲线范用，应稀释到合适浓度后再进样分析。在上述条件下，各留醇类物质的参考保留时问参见附录中表1，多反应监测图参见附录（，8.3平行试验
按8.1和8.2的规定对同一试样迹行两次平行测定试验数据处理
样品中待测物含量的计算见式（1)：-0xV
式中：
X—试样中被测组分含量.单位为毫克每千克（mg/kg）；P——从内标标准工作曲线上得到的被测组分溶液质量浓度，单位为微克每毫升(g/ml.)；试样溶液定容体积，单位为毫升（mL）；V
m—试样的质量，单位为克（g）。计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均估表示，结果保留两位小数精密度
在重复性条件下然得的两次独立测定结果的绝刘差值不得超过算术平均值的15%11其他
本方法测定9种笛醇的定量限参见表A.1。rKaeerkAca-
附录A
（资料性）
留醇化合物信息及定量限
备醇化合物信息及定量限见表A.1表A.1
中文名称
麦角留醇
菜籽酱醇
岩藻鲨醇
羊毛密醇
肽留烷醇
导笛醇
菜汕南醇
子谷笛醇
豆嘴烷醇
6-酮胆葡烷醇
英文名称
Ergosterol
Brassicasicrol
Fucosteral
L.anoste:rol
3-Cholestanol
Stigmasterol
Carnpesterol
β-Sitosterol
Stigmastanol
6-Ketocholestanol
备醇化合物信息及定量限
相对分子
CAS号
474-67-9
17605-87-3
79-63-0
80-97-7
83-18-7
474-62-41
8:3-46-5
19166-47-8
1175-06-0
分子式
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猪油、
荣籽油
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定量限/（mg/kg）
核桃、山楂、葛根、油友荣
人米、小麦、黑青豆
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参考质谱条件如下：
附录B
（资料性）
液相色谱-质谱/质谱参数参考条件离子源：大气压化学离子源（APCI)：扫描方式：正离了模式：
检测方式：多反应监测（MRM)；1燥气、雾化气、碰撞气均为高纯氮气：雾化气压力：0.14MPa(20psi)；离子喷雾电压：3000V：
电举针电流：4μA：
1燥气温度：350℃；
雾化器温度：350℃；
+燥气流速：5.0L/min；
定量离了对、定性离了对、碰撞气能量和源内碎裂电压见表13.1，10种备醇的保留时间、监测离子对、碰撞气能量和源内碎裂电压表B.1
中文名称
麦角笛醇
菜籽笛醇
岩藻笛醇
羊毛留醇
肝笛烷醇
豆笛醇
菜油笛醇
3-谷甾醇
豆笛烷醇
多酮胆甾烷醇
保留时间/min
定量离了对m/t
379.4/69.0
381.4/69.0
395.5/81.0
109.4/109.0
371.4/81.1
411.3/109.0
383.4/161.1
397.5/161.0
399.5/81.1
385.3/367.4
定性离广对/
379.4/69.0.379.4/125.0
381.4/147.0;381.4/69.0
395.5/81.0:395.5/147.0
409.4/109.6:409.4/119.0
371.4/81.1:371.4/109.0
411.3/109.0:111.3/139.0
383.1/161.1;383.4/05.1
397.5/161.0;397.5/135.1
389.5/81.1399.5/149.0
385.3/367.4;385.3/159.2
碰撞气能量/V
源内碎裂电压/V
注：所列参数是在Agilr:nt6460质讲仪1完成的，列出试验用仪器型号仅供参考，标准使用者可采用不同厂家或型号的仪器。
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附录C
（资料性）
10种留醇的LC-MS/MS多反应监测图10种备醇的LCMS/MS多反成监测图见图C.1~图C.10+MRM(385.3->367.4)std6.d
13.13muin
6-酮胆留烷醇的MRM图
+MRM(395. 5 -> 81. 0) STD-fux103
17.87 min
岩藻甾醇的MRM图
+MRM(411.3 > 109. 0) STD-s
图 C.7豆醇的MRM图
+ MRM(379. 4 -> 69. 0) STD-cr x10 5
16.64 min
麦角甾醇的MRM图
+MRM(409. 4 -> 109. 0) STD-1xio 4
图C.5羊毛留醇的MRM图
+MRM(383. 4 > 161. 1) STD-c
图C.8菜油笛醇的MRM图
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+MRM(381.4 -> 69. 0) brassicx1o 4
菜籽醇的MRM图
+MRM(371.4 -> 81. 1) STD-ch
胆留烷醇的 MRM 图
+MRM(397. 5 -> 161. 0) STD-bx104-
图C.9β-谷笛醇的MRM图
GB/T 39995—2021
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+MRM(399. 5 -> 81. 1) STD 8ti3
豆笛烷醇的MRM图
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