GB/T 39649-2020
基本信息
标准号： GB/T 39649-2020
中文名称：实验动物 实验鱼质量控制
标准类别：国家标准(GB)
标准状态：现行
出版语种：简体中文
下载格式：.zip .pdf
下载大小：3145756
标准分类号
关联标准
出版信息
相关单位信息
标准简介
GB/T 39649-2020.Laboratory animal-Quality control of laboratory fish.
1范围
GB/T 39649规定了实验鱼的种质、遗传、微生物和寄生虫、饲料、环境设施的质量控制及其监测方法。
GB/T 39649适用于斑马鱼(Danio rerio)、剑尾鱼(Xiphophorus helleri)和诸氏鲻虾虎鱼(Mugilogobius chulae)的种质、遗传、微生物和寄生虫、饲料、环境设施的质量控制。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB 5749生活饮用水卫生标准
GB/T 5750(所有部分)生活饮用水标准检验方法
GB 8978污水综合排放标准
GB 14925实验动物环境及设施
GB/T 18652致病性嗜水气单胞菌检验方法
GB/T 18654.3养殖 鱼类种质检验第 3部分:性状测定
GB/T 19495.3转基因产 品检测核 酸提取纯化方法
NY 5052无公害食品海水养殖用水水质
SC/T 6040 水产品工厂化养殖装备安全卫生要求
SC/T 7214.1鱼类爱 德华氏菌检测方法第1部分:迟缓爱德华氏菌
3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
3.1
实验鱼 laboratory fish
经人工繁育,对其遗传、微生物、寄生虫、饲料和环境设施进行控制,用于科学研究、教学、生产、检测、鉴定及其他科学实验的鱼类。
3.2
鳍式 fin formula
表示鱼鳍的组成、结构和鳍条的类别、数目的公式。
注:一般以“D."代表背鳍，“A.”代表臀鳍,“P."代表胸鳍,“V."代表腹鳍,“C."代表尾鳍;鳍棘数目用大写罗马字母表示,不分枝鳍条数目用小写罗马数字表示,分枝鳍条数目用阿拉伯数字表示;棘或鳍条的数目范围以“~”表示,棘与鳍条相连时用“一”表示，分离时用“,”隔开。
3.3
生物饵料 living feeds
经过人工筛选的、可进行人工培养且适合养殖对象采食的生物。
1范围
GB/T 39649规定了实验鱼的种质、遗传、微生物和寄生虫、饲料、环境设施的质量控制及其监测方法。
GB/T 39649适用于斑马鱼(Danio rerio)、剑尾鱼(Xiphophorus helleri)和诸氏鲻虾虎鱼(Mugilogobius chulae)的种质、遗传、微生物和寄生虫、饲料、环境设施的质量控制。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB 5749生活饮用水卫生标准
GB/T 5750(所有部分)生活饮用水标准检验方法
GB 8978污水综合排放标准
GB 14925实验动物环境及设施
GB/T 18652致病性嗜水气单胞菌检验方法
GB/T 18654.3养殖 鱼类种质检验第 3部分:性状测定
GB/T 19495.3转基因产 品检测核 酸提取纯化方法
NY 5052无公害食品海水养殖用水水质
SC/T 6040 水产品工厂化养殖装备安全卫生要求
SC/T 7214.1鱼类爱 德华氏菌检测方法第1部分:迟缓爱德华氏菌
3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
3.1
实验鱼 laboratory fish
经人工繁育,对其遗传、微生物、寄生虫、饲料和环境设施进行控制,用于科学研究、教学、生产、检测、鉴定及其他科学实验的鱼类。
3.2
鳍式 fin formula
表示鱼鳍的组成、结构和鳍条的类别、数目的公式。
注:一般以“D."代表背鳍，“A.”代表臀鳍,“P."代表胸鳍,“V."代表腹鳍,“C."代表尾鳍;鳍棘数目用大写罗马字母表示,不分枝鳍条数目用小写罗马数字表示,分枝鳍条数目用阿拉伯数字表示;棘或鳍条的数目范围以“~”表示,棘与鳍条相连时用“一”表示，分离时用“,”隔开。
3.3
生物饵料 living feeds
经过人工筛选的、可进行人工培养且适合养殖对象采食的生物。
标准图片预览
标准内容
ICS65.020.30
中华人民共和国国家标准
GB/T39649—2020
实验动物
实验鱼质量控制
Laboratory animalQuality control of laboratory fish2020-12-14发布
国家市场监督管理总局
国家标准化管理委员会
2020-12-14实施
规范性引用文件
术语和定义
种质鉴定
遗传管理
微生物和寄生虫监测
环境设施
附录A（规范性附录）
附录B（资料性附录）
附录C（规范性附录）
附录D（资料性附录）
附录E（资料性附录）
附录F（资料性附录）
附录G（资料性附录）
实验鱼DNA条形码引物及序列
实验鱼寄生虫的鉴定
实验鱼微生物分离、培养及鉴定草履虫培育与投喂
褶皱臂尾轮虫培育与投喂
卤虫孵化与投喂
实验鱼饲养密度
附录H（资料性附录）
实验鱼环境指标检测方法
参考文献
GB/T39649—2020
本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草GB/T39649—2020
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由全国实验动物标准化技术委员会（SAC/TC281)提出并归口。本标准起草单位：广东省实验动物监测所、中国科学院水生生物研究所、中国水产科学研究院珠江水产研究所、上海实验动物研究中心、中国医学科学院医学实验动物研究所。本标准主要起草人：黄韧、孙永华、李凯彬、胡建华、李建军、余露军、蔡磊、刘云波、林金杏、潘鲁泼、吴淑勤、陈梅丽。
1范围
实验动物
实验鱼质量控制
GB/T39649—2020
本标准规定了实验鱼的种质、遗传、微生物和寄生虫、饲料、环境设施的质量控制及其监测方法。本标准适用于斑马鱼（Daniorerio）、剑尾鱼（Xiphophorushelleri）和诸氏虾虎鱼（Mugilogobiuschulae）的种质、遗传、微生物和寄生虫、饲料、环境设施的质量控制规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB5749生活饮用水卫生标准
GB/T5750（所有部分）生活饮用水标准检验方法GB8978污水综合排放标准
GB14925实验动物环境及设施
GB/T18652致病性嗜水气单胞菌检验方法GB/T18654.3养殖鱼类种质检验第3部分：性状测定GB/T19495.3转基因产品检测核酸提取纯化方法NY5052无公害食品海水养殖用水水质SC/T6040水产品工厂化养殖装备安全卫生要求SC/T7214.1鱼类爱德华氏菌检测方法第1部分：迟缓爱德华氏菌术语和定义
下列术语和定义适用于本文件
laboratoryfish
实验鱼
经人工繁育，对其遗传、微生物、寄生虫、饲料和环境设施进行控制，用于科学研究、教学、生产、检测、鉴定及其他科学实验的鱼类。3.2
鳍式finformula
表示鱼鳍的组成、结构和鳍条的类别、数目的公式注：一般以\D.\代表背鳍，“A”代表臀鳍，“P.”代表胸鳍，“V.”代表腹鳍，“C.”代表尾鳍；鳍棘数目用大写罗马字母表示，不分枝鳍条数目用小写罗马数字表示，分枝鳍条数目用阿拉伯数字表示；棘或鳍条的数目范围以“～”表示，棘与鳍条相连时用“一”表示，分离时用“，”隔开3.3
生物饵料livingfeeds
经过人工筛选的、可进行人工培养且适合养殖对象采食的生物1
GB/T39649—2020
配合饲料
formulafeeds
根据实验鱼的营养需要，将多种饲料原料按饲料配方经工业化生产的均匀混合物。4种质鉴定
种质要求
4.1.1形态
实验鱼形态特征见表1。
表1实验鱼形态特征
实验鱼
斑马鱼
剑尾鱼
诸氏虾虎鱼
4.1.2DNA条形码
体呈纺锤形，尾鳍长且呈叉形：a)
形态特征
背部橄榄色：体侧鳃盖后缘至尾末位置，雄鱼有数条深蓝色和柠檬色相间纵纹，雌鱼则为蓝色和银灰色相间纵纹：
c）鳍式为D.ii-5~8：A.i~ii-10~14:P.i-9~13V.i-5~7头较尖，吻突出，口中等大，下颌微突出；背鳍起点在臀鳍基部上方，胸鳍末端可达腹鳍基a)
部，腹鳍末端超过臀鳍基部，尾鳍较大；雌鱼腹部圆大：雄鱼体型细长和侧扁，尾鳍下缘突出呈剑状；b）
鳍式为D.11~15：A.7~11；V.6～7c)
a）第一背鳍第二至第四鳍棘末端延长呈丝状，以第二和第三鳍棘最长；第一背鳍下的颈背部有斜行带状条纹，尾鳍基部有两个垂直排列的圆形或椭圆形斑点；b)
鳍式为D.V~VI,I-6~10;A.I-5~10;P.12~17:V.I-7~12DNA条形码序列歧异度应小于或等于1.0%4.2
2检验
4.2.1抽样
按抽样单元群体数量的5%抽样，每次抽样不少于5尾不超过30尾。标注样品名称、来源、数量，抽样人和抽样时间等信息。
4.2.2形态检验
按照GB/T18654.3的规定执行。
4.2.3DNA条形码检验
4.2.3.1基因组DNA提取
按照GB/T19495.3的方法或采用具有相同效果的动物基因组DNA提取试剂盒提取DNA。4.2.3.2
聚合酶链式反应（PCR）扩增
引物序列见附录A中表A.1。PCR总反应体积为50μL,其中含10×PCR缓冲液5μL,dNTP（含2
GB/T39649—2020
dCTPdATP，dGTP、dTTP各2.5mmol/L）4μL，上、下游引物各2uL（终浓度为O.2umol/L~1.0μmol/L),基因组DNA2μL（总量100ng1000ng）,Tag酶（5U/μL)0.5μL,双蒸水补齐至50μL。PCR反应程序如表2所示。
表2DNA条形码检验PCR反应程序
预变性
3序列测定
PCR产物经回收纯化后，双向测序，并进行人工核对、校正。4.2.3.4序列歧异度计算
实验鱼的DNA条形码序列见表A.2。序列歧异度D按照公式(1)计算。D=(V/T)X100%
式中：
V序列内变异碱基数；
序列碱基总数。
4.2.4检验时机
引进实验鱼时，应进行种质检验。4.3判定
判定方法如下：
a）形态符合要求，判定为合格；循环数
·（1）
b）形态不可检验时，进行DNA条形码检验，序列歧异度小于或等于1.0%，判定为合格。5遗传管理
5.1应由国家认可或质量评审合格的种源单位引种5.2引种数量和传代方式宜根据实验鱼应用方向确定，如需保持群体较高遗传杂合度，引种数量应不少于25对，采用非近亲交配方式繁殖后代。如需保持群体较高遗传纯合度，引种数量根据需要确定，采用全同胞兄妹、雌核发育等方式繁殖后代5.3实验鱼引种、传代过程应建立包括种名、来源、数量、雌雄比例、繁殖生产情况等信息的谱系档案。5.4传代亲本宜选择6月龄～15月龄健康成熟个体。3
GB/T39649—2020
微生物和寄生虫监测
微生物
寄生虫
检验指标
实验鱼应排除的微生物和寄生虫指标见表3。实验鱼应排除的微生物和寄生虫指标表3
检测指标
斑马鱼
致病性嗜水气单胞菌（PathogenicAeromonashydrophila）海分枝杆菌（Mycobacteriummarinum）迟缓爱德华菌（Edwardsiellatarda）创伤弧菌（Vibriovulnificus）多子小瓜虫（Ichthyophthiriusmultifilis）刺激隐核虫（Cryptocaryonirritans）微孢子虫（Pseudoloma neurophilia）眼点淀粉卵涡鞭虫（Amyloodiniumocellatum）·
注：●表示应检测指标：O表示体色、形态、行为异常时补充的检测指标。6.2
抽样。
宜抽取3月龄以上的活鱼
实验鱼
剑尾鱼
诸氏虾虎鱼
一个鱼缸内随机抽样。包含多个鱼缸的循环水养殖设备，由四角和中央位置的鱼缸内均衡抽样数量：按抽样单元群体数量的5%抽样，每次抽样不少于5尾，不超过30尾样品应按要求标识，标签包括样品名称、来源、数量、抽样人和抽样时间等信息。样品运输
样品应原水运输，温度宜为18℃～24℃，避免污染，宜24h内检测。6.2.3
寄生虫检验
多子小瓜虫、刺激隐核虫、眼点淀粉卵涡鞭虫取鳃、鳍和体表黏液，水浸片法镜检；微孢子虫取脑或脊髓，压片法镜检。各类寄生虫鉴别特征参见附录B。6.2.4
微生物检验
样品制备、分离培养和鉴定见附录C。6.2.5检验频率
每6个月至少检验1次。
6.3判定
GB/T39649—2020
如某项微生物或寄生虫指标不符合要求，则该抽样单元内的实验鱼群体不合格饲料
饲料分类与选择
实验鱼饲料分为配合饲料和生物饵料两类。不同日龄实验鱼适宜投喂的生物饵料见表4。实验鱼也可投喂其他生物饵料。表4不同日龄实验鱼适宜投喂的生物饵料实验鱼
斑马鱼
剑尾鱼
诸氏虾虎鱼
生物饵料的培育与投喂
5日龄～15日龄
≥16日龄
》1日龄
5日龄～30日龄
》31日龄
常用生物饵料的培育与投喂参见附录D、附录E和附录F。质量要求
配合饲料
不应添加抗生素、驱虫剂、防腐剂、色素、促生长剂以及激素等添加剂。7.3.2
生物饵料
不应携带实验鱼应排除的微生物和寄生虫（见表3）。生物饵料
草履虫
卤虫无节幼体
褶皱臂尾轮虫
卤虫无节幼体
培育用淡水应符合GB5749的规定，且游离氯质量浓度不超过0.2mg/L。培育用海水应符合NY5052的规定。5
GB/T39649—2020
生物饵料检验
抽样和检验
随机抽取30个～100个生物饵料，参照附录B鉴别各类寄生虫。随机抽取0.01g～0.10g鲜重的生物饵料，按照附录C的方法检验微生物7.4.2检验频率
每6个月至少检验1次。
如某项指标不符合要求，则该批饲料不合格。8环境设施
建筑设施
宜选址在远离有严重空气污染、振动或噪声干扰的区域8.1.1
8.1.2宜配备检疫间、隔离饲养间和洁净储物间。8.1.3饲养间顶部、内墙面、门窗和地面应采用不渗透、耐腐蚀、防潮防霉的无毒无味材料，表面应平滑，易于清洁、消毒
8.1.4电力负荷应满足需要，宜配备备用电源。8.1.5实验鱼实验设施区域宜与生产设施区域分开。8.2
循环水养殖设备
8.2.1鱼缸
应符合实验鱼健康和福利要求，无毒、无害、无放射性。耐腐蚀，易清洗消毒，内表面应圆滑。应配备缸盖，鱼缸侧壁或顶部应至少局部透明，便于观察8.2.2水处理设备
水处理设备宜包括：
筛网过滤设备：由尼龙、锦纶、不锈钢等材质制成，筛网孔径以0.1mm为宜；蛋白分离和微滤设备：蛋白质分离器、砂滤缸、微滤机等；b）
生物处理设备：由珊瑚石、细砂、生化球、陶瓷环或活性炭等滤料构成；c）
消毒杀菌设备：紫外或臭氧等杀菌装置8.2.3配套设备
配套设备宜包括：
供排水设备：包括水泵、供排水管道、水箱和阀门等：温控设备：空调或其他调温设备；b）
增氧设备：充气泵等；
水质检测设备：包括温度计、pH仪、电导率仪和溶解氧仪等；d)
供电设备：市政电网、发电机等8.3
实验鱼养殖
8.3.1养殖方式
30日龄以上的实验鱼宜饲养在循环水养殖设备中（临时配对亲鱼除外）。8.3.2养殖密度
参见附录G。
安全及防疫要求
循环水养殖设备安全要求和措施应符合SC/T6040的规定。8.4.1
进人饲养间物品应严格消毒，实验鱼隔离净化合格后才能进人饲养间。8.4.2
废弃物应及时移出饲养间。
实验室废液应经过处理并达到GB8978要求后排放。环境要求
饲养间环境指标
GB/T39649—2020
实验鱼饲养间应避免烟、录氯、香水等有毒、有刺激性物质进人，其环境指标应符合表5的要求表5
室温/℃
日室温差/℃
噪声/dB(A)
最低T作照度/1x
昼夜明暗交替时间/h
水源水质
实验鱼饲养间环境指标
斑马鱼
剑尾鱼
≥200
诸氏虾虎鱼
淡水可采用市政自来水或其他水源，水质应符合GB5749的规定，且游离氯的质量浓度不超过0.2mg/L；海水可采用天然海水或优质海盐配制，水质应符合NY5052的规定8.5.3养殖水环境指标
30日龄前的实验鱼水环境溶解氧不低于3.0mg/L，实验鱼其他养殖水环境指标应符合表6的要求，并应避免急剧变化。
水温/℃
日水温差/℃
电导率/（μS/cm）
实验鱼养殖水环境指标
斑马鱼
300~1500
剑尾鱼
300~1500
诸氏虾虎鱼
GB/T39649—2020
溶解氧/（mg/L）
盐度/%
非离子氨/（mg/L）
亚硝酸盐（NO2)/(mg/L）
水面照度/1x
昼夜明暗交替时间/h
注：“一\表示不作要求。
饲养间环境指标检验
按照GB14925的规定执行。
水源水质检验
表6（续）
斑马鱼
54~324
剑尾鱼
54~324
诸氏虾虎鱼
54~324
淡水按照GB/T5750的规定执行（城市集中式供水仅检测游离氯）。海水按照NY5052的规定执行。
养殖水环境指标检验
参见附录H。
检验频率
饲养间环境指标、养殖水环境指标、淡水和天然海水水质每6个月至少检验1次。海盐配制的海水每批次检验1次（同一批次海盐配制的海水为一个批次）。8免费标准bzxz.net
附录A
（规范性附录）
实验鱼DNA条形码引物及序列
实验鱼DNA条形码检测引物及序列分别见表A.1、表A.2。表A.1
实验鱼
斑马鱼
剑尾鱼
诸氏虾虎鱼
实验鱼DNA条形码检测引物
序列（5-3°）
GB/T39649—2020
TCAACTAATCATAAAGACATTGGCAC
TAGACTTCTGGGTGGCCAAAGAATCA
TCAACTAACCATAAAGACATCGGCAC
TAGACTTCTGGGTGGCCAAAGAATCA
TCAACTAACCATAAAGACATTGGCAC
TAGACTTCTGGGTGCCCAAAGAATCA
表A.2实验鱼DNA条形码序列
实验鱼
斑马鱼
剑尾鱼
序列（5-3'）
CCTGTATCTAGTATTTGGTGCTTGAGCCGGAATAGTAGGGACCGCATTAAGCCTCTTAATCCGAGCTGAACTTAGCCAACCAGGAGCACTTCTTGGTGATGATCAAATCTATAATGTTATTGTTACTGCCCATGCTTTTGTAATAATTTTCTTTATAGTAATACCCATTCTTATTGGGGGATTTGGAAACTGACTTGTGCCACTAATGATTGGGGCCCCCGATATGGCATTTCCCCGAATAAATAATATAAGCTTCTGACTTCTTCCACCCTCATTTCTTCTTCTATTAGCTTCTTCTGGAGTTGAAGCAGGAGCTGGAACAGGATGAACAGTTTATCCACCTCTTGCAGGCAACCTTGCCCATGCAGGAGCATCTGTTGATCTAACAATTTTTTCACTACACTTAGCAGGTGTTTCATCTATTCTTGGAGCAATTAATTTTATTACTACTACAATTAACATGAAGCCACCAACTATCTCTCAGTATCAAACTCCATTATTTGTATGAGCTGTCTTAGTTACAGCTGTACTACTTCTTTTATCTTTACCAGTGTTAGCTGCCGGAATTACAATACTTCTTACAGACCGAAATCTTAACACAACGTTCTTTGACCCGGCAGGAGGGGGAGATCCAATTCTTTATCAACACTTATTTCCTTTATCTAGTATTTGGCGCTTGGGCCGGTATGGTGGGAACAGCCTTAAGCGTCTTAATTCGAGCCGAACTAAGTCAACCTGGCACCCTCCTGGGTGACGACCAAATCTACAATGTGATCGTCACAGCTCATGCCTTTGTAATAATTTTTTTTATAGTCATACCAATCATAATTGGCGGCTTTGGTAACTGATTGATCCCACTAATAATCGGCGCTCCCGACATAGCCTTCCCCCGAATAAATAACATAAGCTTTTGACTCCTTCCCCCCTCATTTCTTCTTCTTCTAGCATCCTCCGGGGTTGAAGCAGGAGCTGGAACTGGGTGAACTGTTTATCCCCCTCTTGCAGGTAATTTGGCACATGCTGGGCCCTCCGTGGACTTGACTATTTTTTCACTCCACTTGGCTGGTATTTCCTCCATTTTAGGGGCAATCAACTTTATCACCACAATAATTAACATAAAACCCCCCGCAGCATCTCAATACCAGACACCCCTGTTTGTCTGAGCCGTTCTAATTACAGCCGTACTCCTACTTCTTTCCCTCCCCGTCCTTGCCGCAGGTATTACCATGCTTCTAACAGATCGAAATCTTAACACCACCTTCTTTGACCCCGCAGGTGGGGGAGACCCAATCCTCTACCAACACCTATTCmtDNA位置
1489-2143
5510-6164
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中华人民共和国国家标准
GB/T39649—2020
实验动物
实验鱼质量控制
Laboratory animalQuality control of laboratory fish2020-12-14发布
国家市场监督管理总局
国家标准化管理委员会
2020-12-14实施
规范性引用文件
术语和定义
种质鉴定
遗传管理
微生物和寄生虫监测
环境设施
附录A（规范性附录）
附录B（资料性附录）
附录C（规范性附录）
附录D（资料性附录）
附录E（资料性附录）
附录F（资料性附录）
附录G（资料性附录）
实验鱼DNA条形码引物及序列
实验鱼寄生虫的鉴定
实验鱼微生物分离、培养及鉴定草履虫培育与投喂
褶皱臂尾轮虫培育与投喂
卤虫孵化与投喂
实验鱼饲养密度
附录H（资料性附录）
实验鱼环境指标检测方法
参考文献
GB/T39649—2020
本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草GB/T39649—2020
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由全国实验动物标准化技术委员会（SAC/TC281)提出并归口。本标准起草单位：广东省实验动物监测所、中国科学院水生生物研究所、中国水产科学研究院珠江水产研究所、上海实验动物研究中心、中国医学科学院医学实验动物研究所。本标准主要起草人：黄韧、孙永华、李凯彬、胡建华、李建军、余露军、蔡磊、刘云波、林金杏、潘鲁泼、吴淑勤、陈梅丽。
1范围
实验动物
实验鱼质量控制
GB/T39649—2020
本标准规定了实验鱼的种质、遗传、微生物和寄生虫、饲料、环境设施的质量控制及其监测方法。本标准适用于斑马鱼（Daniorerio）、剑尾鱼（Xiphophorushelleri）和诸氏虾虎鱼（Mugilogobiuschulae）的种质、遗传、微生物和寄生虫、饲料、环境设施的质量控制规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB5749生活饮用水卫生标准
GB/T5750（所有部分）生活饮用水标准检验方法GB8978污水综合排放标准
GB14925实验动物环境及设施
GB/T18652致病性嗜水气单胞菌检验方法GB/T18654.3养殖鱼类种质检验第3部分：性状测定GB/T19495.3转基因产品检测核酸提取纯化方法NY5052无公害食品海水养殖用水水质SC/T6040水产品工厂化养殖装备安全卫生要求SC/T7214.1鱼类爱德华氏菌检测方法第1部分：迟缓爱德华氏菌术语和定义
下列术语和定义适用于本文件
laboratoryfish
实验鱼
经人工繁育，对其遗传、微生物、寄生虫、饲料和环境设施进行控制，用于科学研究、教学、生产、检测、鉴定及其他科学实验的鱼类。3.2
鳍式finformula
表示鱼鳍的组成、结构和鳍条的类别、数目的公式注：一般以\D.\代表背鳍，“A”代表臀鳍，“P.”代表胸鳍，“V.”代表腹鳍，“C.”代表尾鳍；鳍棘数目用大写罗马字母表示，不分枝鳍条数目用小写罗马数字表示，分枝鳍条数目用阿拉伯数字表示；棘或鳍条的数目范围以“～”表示，棘与鳍条相连时用“一”表示，分离时用“，”隔开3.3
生物饵料livingfeeds
经过人工筛选的、可进行人工培养且适合养殖对象采食的生物1
GB/T39649—2020
配合饲料
formulafeeds
根据实验鱼的营养需要，将多种饲料原料按饲料配方经工业化生产的均匀混合物。4种质鉴定
种质要求
4.1.1形态
实验鱼形态特征见表1。
表1实验鱼形态特征
实验鱼
斑马鱼
剑尾鱼
诸氏虾虎鱼
4.1.2DNA条形码
体呈纺锤形，尾鳍长且呈叉形：a)
形态特征
背部橄榄色：体侧鳃盖后缘至尾末位置，雄鱼有数条深蓝色和柠檬色相间纵纹，雌鱼则为蓝色和银灰色相间纵纹：
c）鳍式为D.ii-5~8：A.i~ii-10~14:P.i-9~13V.i-5~7头较尖，吻突出，口中等大，下颌微突出；背鳍起点在臀鳍基部上方，胸鳍末端可达腹鳍基a)
部，腹鳍末端超过臀鳍基部，尾鳍较大；雌鱼腹部圆大：雄鱼体型细长和侧扁，尾鳍下缘突出呈剑状；b）
鳍式为D.11~15：A.7~11；V.6～7c)
a）第一背鳍第二至第四鳍棘末端延长呈丝状，以第二和第三鳍棘最长；第一背鳍下的颈背部有斜行带状条纹，尾鳍基部有两个垂直排列的圆形或椭圆形斑点；b)
鳍式为D.V~VI,I-6~10;A.I-5~10;P.12~17:V.I-7~12DNA条形码序列歧异度应小于或等于1.0%4.2
2检验
4.2.1抽样
按抽样单元群体数量的5%抽样，每次抽样不少于5尾不超过30尾。标注样品名称、来源、数量，抽样人和抽样时间等信息。
4.2.2形态检验
按照GB/T18654.3的规定执行。
4.2.3DNA条形码检验
4.2.3.1基因组DNA提取
按照GB/T19495.3的方法或采用具有相同效果的动物基因组DNA提取试剂盒提取DNA。4.2.3.2
聚合酶链式反应（PCR）扩增
引物序列见附录A中表A.1。PCR总反应体积为50μL,其中含10×PCR缓冲液5μL,dNTP（含2
GB/T39649—2020
dCTPdATP，dGTP、dTTP各2.5mmol/L）4μL，上、下游引物各2uL（终浓度为O.2umol/L~1.0μmol/L),基因组DNA2μL（总量100ng1000ng）,Tag酶（5U/μL)0.5μL,双蒸水补齐至50μL。PCR反应程序如表2所示。
表2DNA条形码检验PCR反应程序
预变性
3序列测定
PCR产物经回收纯化后，双向测序，并进行人工核对、校正。4.2.3.4序列歧异度计算
实验鱼的DNA条形码序列见表A.2。序列歧异度D按照公式(1)计算。D=(V/T)X100%
式中：
V序列内变异碱基数；
序列碱基总数。
4.2.4检验时机
引进实验鱼时，应进行种质检验。4.3判定
判定方法如下：
a）形态符合要求，判定为合格；循环数
·（1）
b）形态不可检验时，进行DNA条形码检验，序列歧异度小于或等于1.0%，判定为合格。5遗传管理
5.1应由国家认可或质量评审合格的种源单位引种5.2引种数量和传代方式宜根据实验鱼应用方向确定，如需保持群体较高遗传杂合度，引种数量应不少于25对，采用非近亲交配方式繁殖后代。如需保持群体较高遗传纯合度，引种数量根据需要确定，采用全同胞兄妹、雌核发育等方式繁殖后代5.3实验鱼引种、传代过程应建立包括种名、来源、数量、雌雄比例、繁殖生产情况等信息的谱系档案。5.4传代亲本宜选择6月龄～15月龄健康成熟个体。3
GB/T39649—2020
微生物和寄生虫监测
微生物
寄生虫
检验指标
实验鱼应排除的微生物和寄生虫指标见表3。实验鱼应排除的微生物和寄生虫指标表3
检测指标
斑马鱼
致病性嗜水气单胞菌（PathogenicAeromonashydrophila）海分枝杆菌（Mycobacteriummarinum）迟缓爱德华菌（Edwardsiellatarda）创伤弧菌（Vibriovulnificus）多子小瓜虫（Ichthyophthiriusmultifilis）刺激隐核虫（Cryptocaryonirritans）微孢子虫（Pseudoloma neurophilia）眼点淀粉卵涡鞭虫（Amyloodiniumocellatum）·
注：●表示应检测指标：O表示体色、形态、行为异常时补充的检测指标。6.2
抽样。
宜抽取3月龄以上的活鱼
实验鱼
剑尾鱼
诸氏虾虎鱼
一个鱼缸内随机抽样。包含多个鱼缸的循环水养殖设备，由四角和中央位置的鱼缸内均衡抽样数量：按抽样单元群体数量的5%抽样，每次抽样不少于5尾，不超过30尾样品应按要求标识，标签包括样品名称、来源、数量、抽样人和抽样时间等信息。样品运输
样品应原水运输，温度宜为18℃～24℃，避免污染，宜24h内检测。6.2.3
寄生虫检验
多子小瓜虫、刺激隐核虫、眼点淀粉卵涡鞭虫取鳃、鳍和体表黏液，水浸片法镜检；微孢子虫取脑或脊髓，压片法镜检。各类寄生虫鉴别特征参见附录B。6.2.4
微生物检验
样品制备、分离培养和鉴定见附录C。6.2.5检验频率
每6个月至少检验1次。
6.3判定
GB/T39649—2020
如某项微生物或寄生虫指标不符合要求，则该抽样单元内的实验鱼群体不合格饲料
饲料分类与选择
实验鱼饲料分为配合饲料和生物饵料两类。不同日龄实验鱼适宜投喂的生物饵料见表4。实验鱼也可投喂其他生物饵料。表4不同日龄实验鱼适宜投喂的生物饵料实验鱼
斑马鱼
剑尾鱼
诸氏虾虎鱼
生物饵料的培育与投喂
5日龄～15日龄
≥16日龄
》1日龄
5日龄～30日龄
》31日龄
常用生物饵料的培育与投喂参见附录D、附录E和附录F。质量要求
配合饲料
不应添加抗生素、驱虫剂、防腐剂、色素、促生长剂以及激素等添加剂。7.3.2
生物饵料
不应携带实验鱼应排除的微生物和寄生虫（见表3）。生物饵料
草履虫
卤虫无节幼体
褶皱臂尾轮虫
卤虫无节幼体
培育用淡水应符合GB5749的规定，且游离氯质量浓度不超过0.2mg/L。培育用海水应符合NY5052的规定。5
GB/T39649—2020
生物饵料检验
抽样和检验
随机抽取30个～100个生物饵料，参照附录B鉴别各类寄生虫。随机抽取0.01g～0.10g鲜重的生物饵料，按照附录C的方法检验微生物7.4.2检验频率
每6个月至少检验1次。
如某项指标不符合要求，则该批饲料不合格。8环境设施
建筑设施
宜选址在远离有严重空气污染、振动或噪声干扰的区域8.1.1
8.1.2宜配备检疫间、隔离饲养间和洁净储物间。8.1.3饲养间顶部、内墙面、门窗和地面应采用不渗透、耐腐蚀、防潮防霉的无毒无味材料，表面应平滑，易于清洁、消毒
8.1.4电力负荷应满足需要，宜配备备用电源。8.1.5实验鱼实验设施区域宜与生产设施区域分开。8.2
循环水养殖设备
8.2.1鱼缸
应符合实验鱼健康和福利要求，无毒、无害、无放射性。耐腐蚀，易清洗消毒，内表面应圆滑。应配备缸盖，鱼缸侧壁或顶部应至少局部透明，便于观察8.2.2水处理设备
水处理设备宜包括：
筛网过滤设备：由尼龙、锦纶、不锈钢等材质制成，筛网孔径以0.1mm为宜；蛋白分离和微滤设备：蛋白质分离器、砂滤缸、微滤机等；b）
生物处理设备：由珊瑚石、细砂、生化球、陶瓷环或活性炭等滤料构成；c）
消毒杀菌设备：紫外或臭氧等杀菌装置8.2.3配套设备
配套设备宜包括：
供排水设备：包括水泵、供排水管道、水箱和阀门等：温控设备：空调或其他调温设备；b）
增氧设备：充气泵等；
水质检测设备：包括温度计、pH仪、电导率仪和溶解氧仪等；d)
供电设备：市政电网、发电机等8.3
实验鱼养殖
8.3.1养殖方式
30日龄以上的实验鱼宜饲养在循环水养殖设备中（临时配对亲鱼除外）。8.3.2养殖密度
参见附录G。
安全及防疫要求
循环水养殖设备安全要求和措施应符合SC/T6040的规定。8.4.1
进人饲养间物品应严格消毒，实验鱼隔离净化合格后才能进人饲养间。8.4.2
废弃物应及时移出饲养间。
实验室废液应经过处理并达到GB8978要求后排放。环境要求
饲养间环境指标
GB/T39649—2020
实验鱼饲养间应避免烟、录氯、香水等有毒、有刺激性物质进人，其环境指标应符合表5的要求表5
室温/℃
日室温差/℃
噪声/dB(A)
最低T作照度/1x
昼夜明暗交替时间/h
水源水质
实验鱼饲养间环境指标
斑马鱼
剑尾鱼
≥200
诸氏虾虎鱼
淡水可采用市政自来水或其他水源，水质应符合GB5749的规定，且游离氯的质量浓度不超过0.2mg/L；海水可采用天然海水或优质海盐配制，水质应符合NY5052的规定8.5.3养殖水环境指标
30日龄前的实验鱼水环境溶解氧不低于3.0mg/L，实验鱼其他养殖水环境指标应符合表6的要求，并应避免急剧变化。
水温/℃
日水温差/℃
电导率/（μS/cm）
实验鱼养殖水环境指标
斑马鱼
300~1500
剑尾鱼
300~1500
诸氏虾虎鱼
GB/T39649—2020
溶解氧/（mg/L）
盐度/%
非离子氨/（mg/L）
亚硝酸盐（NO2)/(mg/L）
水面照度/1x
昼夜明暗交替时间/h
注：“一\表示不作要求。
饲养间环境指标检验
按照GB14925的规定执行。
水源水质检验
表6（续）
斑马鱼
54~324
剑尾鱼
54~324
诸氏虾虎鱼
54~324
淡水按照GB/T5750的规定执行（城市集中式供水仅检测游离氯）。海水按照NY5052的规定执行。
养殖水环境指标检验
参见附录H。
检验频率
饲养间环境指标、养殖水环境指标、淡水和天然海水水质每6个月至少检验1次。海盐配制的海水每批次检验1次（同一批次海盐配制的海水为一个批次）。8免费标准bzxz.net
附录A
（规范性附录）
实验鱼DNA条形码引物及序列
实验鱼DNA条形码检测引物及序列分别见表A.1、表A.2。表A.1
实验鱼
斑马鱼
剑尾鱼
诸氏虾虎鱼
实验鱼DNA条形码检测引物
序列（5-3°）
GB/T39649—2020
TCAACTAATCATAAAGACATTGGCAC
TAGACTTCTGGGTGGCCAAAGAATCA
TCAACTAACCATAAAGACATCGGCAC
TAGACTTCTGGGTGGCCAAAGAATCA
TCAACTAACCATAAAGACATTGGCAC
TAGACTTCTGGGTGCCCAAAGAATCA
表A.2实验鱼DNA条形码序列
实验鱼
斑马鱼
剑尾鱼
序列（5-3'）
CCTGTATCTAGTATTTGGTGCTTGAGCCGGAATAGTAGGGACCGCATTAAGCCTCTTAATCCGAGCTGAACTTAGCCAACCAGGAGCACTTCTTGGTGATGATCAAATCTATAATGTTATTGTTACTGCCCATGCTTTTGTAATAATTTTCTTTATAGTAATACCCATTCTTATTGGGGGATTTGGAAACTGACTTGTGCCACTAATGATTGGGGCCCCCGATATGGCATTTCCCCGAATAAATAATATAAGCTTCTGACTTCTTCCACCCTCATTTCTTCTTCTATTAGCTTCTTCTGGAGTTGAAGCAGGAGCTGGAACAGGATGAACAGTTTATCCACCTCTTGCAGGCAACCTTGCCCATGCAGGAGCATCTGTTGATCTAACAATTTTTTCACTACACTTAGCAGGTGTTTCATCTATTCTTGGAGCAATTAATTTTATTACTACTACAATTAACATGAAGCCACCAACTATCTCTCAGTATCAAACTCCATTATTTGTATGAGCTGTCTTAGTTACAGCTGTACTACTTCTTTTATCTTTACCAGTGTTAGCTGCCGGAATTACAATACTTCTTACAGACCGAAATCTTAACACAACGTTCTTTGACCCGGCAGGAGGGGGAGATCCAATTCTTTATCAACACTTATTTCCTTTATCTAGTATTTGGCGCTTGGGCCGGTATGGTGGGAACAGCCTTAAGCGTCTTAATTCGAGCCGAACTAAGTCAACCTGGCACCCTCCTGGGTGACGACCAAATCTACAATGTGATCGTCACAGCTCATGCCTTTGTAATAATTTTTTTTATAGTCATACCAATCATAATTGGCGGCTTTGGTAACTGATTGATCCCACTAATAATCGGCGCTCCCGACATAGCCTTCCCCCGAATAAATAACATAAGCTTTTGACTCCTTCCCCCCTCATTTCTTCTTCTTCTAGCATCCTCCGGGGTTGAAGCAGGAGCTGGAACTGGGTGAACTGTTTATCCCCCTCTTGCAGGTAATTTGGCACATGCTGGGCCCTCCGTGGACTTGACTATTTTTTCACTCCACTTGGCTGGTATTTCCTCCATTTTAGGGGCAATCAACTTTATCACCACAATAATTAACATAAAACCCCCCGCAGCATCTCAATACCAGACACCCCTGTTTGTCTGAGCCGTTCTAATTACAGCCGTACTCCTACTTCTTTCCCTCCCCGTCCTTGCCGCAGGTATTACCATGCTTCTAACAGATCGAAATCTTAACACCACCTTCTTTGACCCCGCAGGTGGGGGAGACCCAATCCTCTACCAACACCTATTCmtDNA位置
1489-2143
5510-6164
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