YY/T 0606.13-2008
基本信息
标准号： YY/T 0606.13-2008
中文名称：组织工程医疗产品 第13部分:细胞自动计数法
标准类别：医药行业标准(YY)
标准状态：现行
出版语种：简体中文
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标准分类号
关联标准
出版信息
相关单位信息
标准简介
YY/T 0606.13-2008.Tissue engineered medical product- Part 13:Standard test method for automated enumeration of cell suspensions.
1范围
YY/T0606的本部分所述的原理和方法适用于绝大部分类型细胞的自动计数,包括黏附生长细胞和悬浮生长细胞。
2术语和定义
下列术语和定义适用于YY/T 0606的本部分。
2.1电解液electrolyte用于悬浮细胞的具有轻微传导性的溶液。
2.2重合coincidence一个以上的细胞同时穿过小孔。
2.3原始计数raw count未对重合细胞进行校正的细胞计数。
2.4校正计数corrected count对重合细胞进行校正后的计数。
2.5阈值size thresholds在仪器上设定的特定细胞群体的大小临界值,是可调整的界值。在此界值之外的细胞或碎片将被排除在分析之外。
3原理
YY/T 0606.13中细胞自动计数的原理方法是电阻抗,即检测由悬浮在传导性溶液中的细胞通过小孔管上的小孔时产生的电阻抗变化来进行细胞计数(如图1所示)。当细胞悬浮在传导性溶液中时(例如磷酸盐缓冲液),它们是不连续的绝缘体。当细胞悬浮液通过圆柱形的小孔管时,每一次细胞的通过都将改变小孔两侧电极间的阻抗,由此产生的电脉冲可用于细胞计数。细胞在小孔间通过被检测到的区带称为“电感应区”。这种原理方法允许在非常窄的大小分布范围内通过对电脉冲的分析有选择性的计数细胞。脉冲的数目意味着细胞的数量,脉冲的幅度与细胞的体积相关。
1范围
YY/T0606的本部分所述的原理和方法适用于绝大部分类型细胞的自动计数,包括黏附生长细胞和悬浮生长细胞。
2术语和定义
下列术语和定义适用于YY/T 0606的本部分。
2.1电解液electrolyte用于悬浮细胞的具有轻微传导性的溶液。
2.2重合coincidence一个以上的细胞同时穿过小孔。
2.3原始计数raw count未对重合细胞进行校正的细胞计数。
2.4校正计数corrected count对重合细胞进行校正后的计数。
2.5阈值size thresholds在仪器上设定的特定细胞群体的大小临界值,是可调整的界值。在此界值之外的细胞或碎片将被排除在分析之外。
3原理
YY/T 0606.13中细胞自动计数的原理方法是电阻抗,即检测由悬浮在传导性溶液中的细胞通过小孔管上的小孔时产生的电阻抗变化来进行细胞计数(如图1所示)。当细胞悬浮在传导性溶液中时(例如磷酸盐缓冲液),它们是不连续的绝缘体。当细胞悬浮液通过圆柱形的小孔管时,每一次细胞的通过都将改变小孔两侧电极间的阻抗,由此产生的电脉冲可用于细胞计数。细胞在小孔间通过被检测到的区带称为“电感应区”。这种原理方法允许在非常窄的大小分布范围内通过对电脉冲的分析有选择性的计数细胞。脉冲的数目意味着细胞的数量,脉冲的幅度与细胞的体积相关。
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标准内容
ICS11.040.40
中华人民共和国医药行业标准
YY/T0606.13-—2008
组织工程医疗产品
第13部分：细胞自动计数法
Tissue engineered medical product-Part 13.Standard test method forautomatedenumerationof cell suspensions2008-04-25发布
数码防伤
国家食品药品监督管理局
2009-06-01实施
YY/T0606《组织工程医疗产品》分为：第1部分：通用要求；
第3部分：通用分类；
第4部分：皮肤替代品（物）的术语和分类：第5部分：基质及支架的性能和测试；第6部分：I型胶原蛋白：
第7部分：壳桑糖；
第8部分：海藻酸钠；
第9部分：透明质酸钠；
第10部分：修复或再生关节软骨的植入物的体内评价；第11部分：脱钙骨异位骨诱导性组织学评价指南：第12部分：细胞、组织、器官的加工处理；第13部分：细胞自动计数法。
本部分为YY/T0606的第13部分。本部分由国家食品药品监督管理局提出。本部分由国家食品药品监督管理局中检所医疗器械质量监督检验中心归口。本部分国家食品药品监督管理局中检所医疗器械质量监督检验中心起草。本部分主要起草人：陈亮，奚廷斐、王春仁。YY/T0606.13-—2008
1范围
组织工程医疗产品
第13部分：细胞自动计数法
YY/T0606.13—2008
YY/T0606的本部分所述的原理和方法适用于绝大部分类型细胞的自动计数，包括黏附生长细胞和悬浮生长细胞。
2术语和定义
下列术语和定义适用于YY/T0606的本部分。2.1
电解液electrolyte
用于悬浮细胞的具有轻微传导性的溶液。2.2
重合coincidence
个以上的细胞同时穿过小孔。
原始计数rawcount
未对重合细胞进行校正的细胞计数。2.4
校正计数corrected count
对重合细胞进行校正后的计数。2.5
阅值sizethresholds
在仪器上设定的特定细胞群体的大小临界值，是可调整的界值。在此界值之外的细胞或碎片将被排除在分析之外。
3原理
本部分中细胞自动计数的原理方法是电阻抗，即检测由悬浮在传导性溶液中的细胞通过小孔管上的小孔时产生的电阻抗变化来进行细胞计数（如图1所示）。当细胞悬浮在传导性溶液中时（例如磷酸盐缓冲液），它们是不连续的绝缘体。当细胞悬浮液通过圆柱形的小孔管时，每一次细胞的通过都将改变小孔两侧电极间的阻抗，由此产生的电脉冲可用于细胞计数。细胞在小孔间通过被检测到的区带称为“电感应区”。这种原理方法允许在非常窄的大小分布范围内通过对电脉冲的分析有选择性的计数细胞。脉冲的数目意味着细胞的数量，脉冲的幅度与细胞的体积相关。1
YY/T0606.13-—2008
外部电极
小孔电流
4意义和用途
4.1组织工程医
品的细胞应选行常
血细胞计数器计数
已道会产生
具有更高的准确度
的细胞。
真空管
水循环
内部电报
小孔内部联图
理示意国
%的误差，并且费
性，更加快速，不只限
公50年代
4.2电阻抗原理在20
仪器。细胞自动计数仪器有
检测限的讨论
5.1重合
分析人体
传统的人工计缴方法，如显微镜下用时
于电阻抗原理上的细胞自动计数胞和血液细胞，几乎可用子所用种类和类型司都可以
一厚理的细胞自动计数
造基于这
于消除人工计数时不同操作者带来的摄差。S
当一个以上的细胞同时穿过小凡时，不是产生两个独立的脉冲，面是产生一个更大的脉冲。结果会发生细胞计数结果偏少，测量的细胞体积城大。重合发生的频率可看作是细胞浓度在统计学上可预测的函数，因此可通过仪器校正，这称为重合校正。通过降低细胞悬液浓度，可最大程度的降低重合的发生，确保结果的准确（误差不超过5%）。5.2细胞的尺寸变化
细胞直径变化可达30：1，体积变化可达27000：1，而这仅是反应了选择的小孔管的测量功能。应用这项技术，可以在大约0.6μm～1200um的范围内测量。低限以下会受到热和电噪声干扰。5.3小孔管的测量范围
小孔管的测量范围与其直径成比例。在0.02倍直径到0.8倍直径的范围内，小孔管的测量范围与直径成线性相关。但在细胞尺寸大于0.6倍小孔管直径时，小孔管容易堵塞。因此，在实际操作中，小孔管的测量范围被规定为其直径的2%～60%。2
5.4电解质溶液
YY/T0606.13-2008
细胞悬浮溶液应具有传导性，对细胞大小无影响。最常选择的电解质溶液是磷酸缓冲生理盐水。6干扰
6.1碎屑和细胞碎片
修正细胞大小阈值的设置有助于分析时校正计数的碎屑或细胞碎片。6.2细胞聚集体
细胞聚集体将被视作单一细胞计数，体和也将大干单个的细胞。市售的酶溶液有助于制备单细胞悬浮液。
6.3沉淀物
细胞样品可因放置出现充降导致计数减少，可在检测前多次翻转细胞样品容器，以获得更准确和精确的结果。
6.4黏附
细胞可能黏附到用品器壁上
透出影响计数的准确
6.5其他
穿过小孔的大电靠可能会
损害细胞膜。通仅器已经设置了最合适购电流7危害
7.1普告（化学S
不能使用非
剂的电解质容液
些电解质浴滋时应小心，可能会发生剧烈反应。在酸性溶液中不能使氮化合物。
不能使用易燃的电解质溶液利有机溶剂。7.2警告（电学
一个稳定，于燥的实验台上
仪器内存在高压。仪器必须放置在必须正确接地。
7.3警告（生物学
应遵守相应的免费标准bzxz.net
8操作
微安全制度
8.1不论使用何种品仪器，谢式方法的操作序是相似的，不同制造商仪器可能在仪器大小、可选择的小孔管直径、数
集方式（针点式打印机或电脑）等方面不国。另维，某些型号的仪器只提供仪器可以分析细胞数量和细胞大少分布，道有某些型号的仪器在计数细胞计数功能，然而，某些型
的基础上，通过区别细胞碎胞核完整的细胞，可分析活细胞数。8.2按制造商的使用说明对器进行校正。仪器的校应每月或车每次的操作使用后进行。应使用标准粒子进行校正
8.3用电解质溶液（常用磷酸盐缓冲生理盐水）稀释细胞芯液，通过翻转七到八次使之轻轻混合。应在样品制备的20min内进行分析。
8.4在仪器上设定待分析的特定细胞的大小阅值。选择合适的小孔管。制造商的操作手册中可能会有合适的操作方案。
8.5设定每次分析时的溶液体积，通常是0.5mL。把细胞样品放在样品台上。8.6按启动键。为了监测小孔管是否堵塞，可以观察每份细胞样品的分析时间。而且，目前大部分的仪器都有小孔管观察窗，能方便的检查是否堵塞。另外，许多仪器也提供小孔管自动除障功能。8.7结果记录。许多仪器能自动记录和分析结果。8.8为了确保检测质量，应周期性的测定不同浓度的标准品或参考品。应由每一实验室自行制定质量控制方案。管理机构也可不定期的要求实验室进行标准品或参考品的比较测试。3
YY/T0606.13—2008
9精度和偏倚
国际血液学标准化委员会通过测定红细胞评估本计数方法得出的变异系数是0.24%~0.72%某些制造商的使用手册中会列出典型细胞类型的测量精度。随仪器一起提供有合格的仪器安装、使用、性能维护说明书，本计数方法的偏倚尚未有相关报道。国际血液学标准化委员会已将此计数方法作为红细胞和白细胞计数的参考方法。参考文献
YY/T0606.13—2008
[1]Picciolo,G.L.,Hellman,K.B.and Johnson,P.C,,\Meeting Report:Tissue EngineeredMedical Products Standards:The Time is Ripe,\TissueEngineering,Vol 4(1),1998,pp.5-7.[2]Lamo,S.,Ronot,X.,and Lechay,P.,“Effects of Sodium Butyrateon Growth and Cell-CycleKineticsof CulturedRabbitArticularChondrocytes\J.CellPhysiol.,Vol120,1984,pp.384-390.[3]Ryan,J.M,Sharf,B.R,and Cristofalo,V.J.,\TheInfluenceof CultureMediumVolumeonCellDensityand Lifespan ofHumanDiploidFibroblasts,\Erpt'L.Cell Res.Vol 91,1975,Pp.389-392.[4]Betz,N.A.,Fattaey,H.K.,andJohnson,T.C.,\GrowthInhibition of BALB/cMouseKeratinocytes by TGF-Bl and CeReS-18 Appears to Act through Distinct Mechanisms,\ Eapt'l.CellRes.,Vol 227,1996,pp47-54.
[5] Lehman, R.,Fernanandez, L.A.,Bottino,R.,Szabo, S.,et.Al.,\Evaluation of IsletIsolation by a New Automated Method (Coulter Multisizer lle) and Manual Counting,\ Transp.Proc,Vol30,1998,pp.373-374.
[6]Stegemann,JanP.,MS.,Santosh,Raine,MS.,Nicholson,D.T.,MS.,et.al.,\Comparison of Analytical Methods for Quantitation of Isolated Porcine Hepatocyte Yields,\ Tissue Engi-neering,Vol 6(3),2000,pp.253-264.[7] Li, Rong-hao,Chen,Jian,Hammonds,Glenn, et,al.,\Identification of Gas6 as a GrowthFactor for Human Schwann Cells,\The Journal of Neuroscience,Vol 16(6),1996,pp.2012-2019.[8J Coulter,W.H.,\High Speed Automatic Blood Cell Counter and Cell Size Analyses,\ Pro.Natl.Electr.Conf.，Vol12,1956，pp.1034-1040.[9] Lewis, S.M.,England, J.M.,and Kubota,F.\Coincidence correction in red blood cellcounting,\Phys.Med.Biol.Vol 34(9),1989,pp.1239-1246.[lo] Raphael,Stanley,S.Lynch'sMedical Laboratory Technology.Saunders Co.,Philadel-phia.，1983.
[ii]England,J.M.,Rowan,RM.,Bins,M.et,al.,\Theassignment of values to freshbloodusedforcalibrating automatedblood cellcounters,\Clin.Lab.Haemat.,Vol10,1988,pp.203-212YY/T 0606.13-2008
中华人民共和国医药
行业标准
组织工程医疗产品
第13部分：细胞自动计数法
YY/T0606.13—2008
中国标准出版社出版发行
北京复兴门外三里河北街16号
邮政编码：100045
网址spc.net.cn
电话：6852394668517548
中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷各地新华书店经销
5印张0.75字数11千字
开本880×12301/16
2008年9月第一次印刷
2008年9月第一版
书号：155066·2-19004定价14.00元如有印装差错由本社发行中心调换版权专有侵权必究
举报电话：（010)68533533
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中华人民共和国医药行业标准
YY/T0606.13-—2008
组织工程医疗产品
第13部分：细胞自动计数法
Tissue engineered medical product-Part 13.Standard test method forautomatedenumerationof cell suspensions2008-04-25发布
数码防伤
国家食品药品监督管理局
2009-06-01实施
YY/T0606《组织工程医疗产品》分为：第1部分：通用要求；
第3部分：通用分类；
第4部分：皮肤替代品（物）的术语和分类：第5部分：基质及支架的性能和测试；第6部分：I型胶原蛋白：
第7部分：壳桑糖；
第8部分：海藻酸钠；
第9部分：透明质酸钠；
第10部分：修复或再生关节软骨的植入物的体内评价；第11部分：脱钙骨异位骨诱导性组织学评价指南：第12部分：细胞、组织、器官的加工处理；第13部分：细胞自动计数法。
本部分为YY/T0606的第13部分。本部分由国家食品药品监督管理局提出。本部分由国家食品药品监督管理局中检所医疗器械质量监督检验中心归口。本部分国家食品药品监督管理局中检所医疗器械质量监督检验中心起草。本部分主要起草人：陈亮，奚廷斐、王春仁。YY/T0606.13-—2008
1范围
组织工程医疗产品
第13部分：细胞自动计数法
YY/T0606.13—2008
YY/T0606的本部分所述的原理和方法适用于绝大部分类型细胞的自动计数，包括黏附生长细胞和悬浮生长细胞。
2术语和定义
下列术语和定义适用于YY/T0606的本部分。2.1
电解液electrolyte
用于悬浮细胞的具有轻微传导性的溶液。2.2
重合coincidence
个以上的细胞同时穿过小孔。
原始计数rawcount
未对重合细胞进行校正的细胞计数。2.4
校正计数corrected count
对重合细胞进行校正后的计数。2.5
阅值sizethresholds
在仪器上设定的特定细胞群体的大小临界值，是可调整的界值。在此界值之外的细胞或碎片将被排除在分析之外。
3原理
本部分中细胞自动计数的原理方法是电阻抗，即检测由悬浮在传导性溶液中的细胞通过小孔管上的小孔时产生的电阻抗变化来进行细胞计数（如图1所示）。当细胞悬浮在传导性溶液中时（例如磷酸盐缓冲液），它们是不连续的绝缘体。当细胞悬浮液通过圆柱形的小孔管时，每一次细胞的通过都将改变小孔两侧电极间的阻抗，由此产生的电脉冲可用于细胞计数。细胞在小孔间通过被检测到的区带称为“电感应区”。这种原理方法允许在非常窄的大小分布范围内通过对电脉冲的分析有选择性的计数细胞。脉冲的数目意味着细胞的数量，脉冲的幅度与细胞的体积相关。1
YY/T0606.13-—2008
外部电极
小孔电流
4意义和用途
4.1组织工程医
品的细胞应选行常
血细胞计数器计数
已道会产生
具有更高的准确度
的细胞。
真空管
水循环
内部电报
小孔内部联图
理示意国
%的误差，并且费
性，更加快速，不只限
公50年代
4.2电阻抗原理在20
仪器。细胞自动计数仪器有
检测限的讨论
5.1重合
分析人体
传统的人工计缴方法，如显微镜下用时
于电阻抗原理上的细胞自动计数胞和血液细胞，几乎可用子所用种类和类型司都可以
一厚理的细胞自动计数
造基于这
于消除人工计数时不同操作者带来的摄差。S
当一个以上的细胞同时穿过小凡时，不是产生两个独立的脉冲，面是产生一个更大的脉冲。结果会发生细胞计数结果偏少，测量的细胞体积城大。重合发生的频率可看作是细胞浓度在统计学上可预测的函数，因此可通过仪器校正，这称为重合校正。通过降低细胞悬液浓度，可最大程度的降低重合的发生，确保结果的准确（误差不超过5%）。5.2细胞的尺寸变化
细胞直径变化可达30：1，体积变化可达27000：1，而这仅是反应了选择的小孔管的测量功能。应用这项技术，可以在大约0.6μm～1200um的范围内测量。低限以下会受到热和电噪声干扰。5.3小孔管的测量范围
小孔管的测量范围与其直径成比例。在0.02倍直径到0.8倍直径的范围内，小孔管的测量范围与直径成线性相关。但在细胞尺寸大于0.6倍小孔管直径时，小孔管容易堵塞。因此，在实际操作中，小孔管的测量范围被规定为其直径的2%～60%。2
5.4电解质溶液
YY/T0606.13-2008
细胞悬浮溶液应具有传导性，对细胞大小无影响。最常选择的电解质溶液是磷酸缓冲生理盐水。6干扰
6.1碎屑和细胞碎片
修正细胞大小阈值的设置有助于分析时校正计数的碎屑或细胞碎片。6.2细胞聚集体
细胞聚集体将被视作单一细胞计数，体和也将大干单个的细胞。市售的酶溶液有助于制备单细胞悬浮液。
6.3沉淀物
细胞样品可因放置出现充降导致计数减少，可在检测前多次翻转细胞样品容器，以获得更准确和精确的结果。
6.4黏附
细胞可能黏附到用品器壁上
透出影响计数的准确
6.5其他
穿过小孔的大电靠可能会
损害细胞膜。通仅器已经设置了最合适购电流7危害
7.1普告（化学S
不能使用非
剂的电解质容液
些电解质浴滋时应小心，可能会发生剧烈反应。在酸性溶液中不能使氮化合物。
不能使用易燃的电解质溶液利有机溶剂。7.2警告（电学
一个稳定，于燥的实验台上
仪器内存在高压。仪器必须放置在必须正确接地。
7.3警告（生物学
应遵守相应的免费标准bzxz.net
8操作
微安全制度
8.1不论使用何种品仪器，谢式方法的操作序是相似的，不同制造商仪器可能在仪器大小、可选择的小孔管直径、数
集方式（针点式打印机或电脑）等方面不国。另维，某些型号的仪器只提供仪器可以分析细胞数量和细胞大少分布，道有某些型号的仪器在计数细胞计数功能，然而，某些型
的基础上，通过区别细胞碎胞核完整的细胞，可分析活细胞数。8.2按制造商的使用说明对器进行校正。仪器的校应每月或车每次的操作使用后进行。应使用标准粒子进行校正
8.3用电解质溶液（常用磷酸盐缓冲生理盐水）稀释细胞芯液，通过翻转七到八次使之轻轻混合。应在样品制备的20min内进行分析。
8.4在仪器上设定待分析的特定细胞的大小阅值。选择合适的小孔管。制造商的操作手册中可能会有合适的操作方案。
8.5设定每次分析时的溶液体积，通常是0.5mL。把细胞样品放在样品台上。8.6按启动键。为了监测小孔管是否堵塞，可以观察每份细胞样品的分析时间。而且，目前大部分的仪器都有小孔管观察窗，能方便的检查是否堵塞。另外，许多仪器也提供小孔管自动除障功能。8.7结果记录。许多仪器能自动记录和分析结果。8.8为了确保检测质量，应周期性的测定不同浓度的标准品或参考品。应由每一实验室自行制定质量控制方案。管理机构也可不定期的要求实验室进行标准品或参考品的比较测试。3
YY/T0606.13—2008
9精度和偏倚
国际血液学标准化委员会通过测定红细胞评估本计数方法得出的变异系数是0.24%~0.72%某些制造商的使用手册中会列出典型细胞类型的测量精度。随仪器一起提供有合格的仪器安装、使用、性能维护说明书，本计数方法的偏倚尚未有相关报道。国际血液学标准化委员会已将此计数方法作为红细胞和白细胞计数的参考方法。参考文献
YY/T0606.13—2008
[1]Picciolo,G.L.,Hellman,K.B.and Johnson,P.C,,\Meeting Report:Tissue EngineeredMedical Products Standards:The Time is Ripe,\TissueEngineering,Vol 4(1),1998,pp.5-7.[2]Lamo,S.,Ronot,X.,and Lechay,P.,“Effects of Sodium Butyrateon Growth and Cell-CycleKineticsof CulturedRabbitArticularChondrocytes\J.CellPhysiol.,Vol120,1984,pp.384-390.[3]Ryan,J.M,Sharf,B.R,and Cristofalo,V.J.,\TheInfluenceof CultureMediumVolumeonCellDensityand Lifespan ofHumanDiploidFibroblasts,\Erpt'L.Cell Res.Vol 91,1975,Pp.389-392.[4]Betz,N.A.,Fattaey,H.K.,andJohnson,T.C.,\GrowthInhibition of BALB/cMouseKeratinocytes by TGF-Bl and CeReS-18 Appears to Act through Distinct Mechanisms,\ Eapt'l.CellRes.,Vol 227,1996,pp47-54.
[5] Lehman, R.,Fernanandez, L.A.,Bottino,R.,Szabo, S.,et.Al.,\Evaluation of IsletIsolation by a New Automated Method (Coulter Multisizer lle) and Manual Counting,\ Transp.Proc,Vol30,1998,pp.373-374.
[6]Stegemann,JanP.,MS.,Santosh,Raine,MS.,Nicholson,D.T.,MS.,et.al.,\Comparison of Analytical Methods for Quantitation of Isolated Porcine Hepatocyte Yields,\ Tissue Engi-neering,Vol 6(3),2000,pp.253-264.[7] Li, Rong-hao,Chen,Jian,Hammonds,Glenn, et,al.,\Identification of Gas6 as a GrowthFactor for Human Schwann Cells,\The Journal of Neuroscience,Vol 16(6),1996,pp.2012-2019.[8J Coulter,W.H.,\High Speed Automatic Blood Cell Counter and Cell Size Analyses,\ Pro.Natl.Electr.Conf.，Vol12,1956，pp.1034-1040.[9] Lewis, S.M.,England, J.M.,and Kubota,F.\Coincidence correction in red blood cellcounting,\Phys.Med.Biol.Vol 34(9),1989,pp.1239-1246.[lo] Raphael,Stanley,S.Lynch'sMedical Laboratory Technology.Saunders Co.,Philadel-phia.，1983.
[ii]England,J.M.,Rowan,RM.,Bins,M.et,al.,\Theassignment of values to freshbloodusedforcalibrating automatedblood cellcounters,\Clin.Lab.Haemat.,Vol10,1988,pp.203-212YY/T 0606.13-2008
中华人民共和国医药
行业标准
组织工程医疗产品
第13部分：细胞自动计数法
YY/T0606.13—2008
中国标准出版社出版发行
北京复兴门外三里河北街16号
邮政编码：100045
网址spc.net.cn
电话：6852394668517548
中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷各地新华书店经销
5印张0.75字数11千字
开本880×12301/16
2008年9月第一次印刷
2008年9月第一版
书号：155066·2-19004定价14.00元如有印装差错由本社发行中心调换版权专有侵权必究
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