本标准规定了食品微生物学检验用培养基和试剂的质量要求。 本标准适用于食品微生物学检验用培养基和试剂的质量控制。
本标准代替 GB4789.28—2013《食品安全国家标准 食品微生物学检验 培养基和试剂的质量要求》。
本标准与 GB4789.28—2013相比,主要变化如下:
———增加了附录 E参比培养基的质控标准及质控菌株一览表;
———增加了培养基性能测试方法流程图;
———增加了附录 G 测试菌株中文名、拉丁名及编号一览表;
———删除了纯化学培养基、未定义和部分定义的化学培养基、确证培养基;
———修改了部分测试菌株;
———修改了生产商和实验室使用商品化培养基和试剂的质量控制标准方法;
———修改了附录 F的菌株编号和名称。

前言 Ⅲ
1 范围 1
2 术语和定义 1
2.1 质量控制 1
2.2 培养基和试剂的批次 1
2.3 培养基和试剂的性能 1
2.4 培养基 1
2.5 液体培养基 1
2.6 固体培养基 1
2.7 半固体培养基 1
2.8 运输培养基 1
2.9 保藏培养基 2
2.10 悬浮培养基 2
2.11 复苏培养基 2
2.12 增菌培养基 2
2.13 选择性增菌培养基 2
2.14 非选择性增菌培养基 2
2.15 分离培养基 2
2.16 选择性分离培养基 2
2.17 非选择性分离培养基 2
2.18 鉴别培养基(特异性培养基) 2
2.19 鉴定培养基 2
2.20 计数培养基 2
2.21 参比培养基 3
2.22 商品化即用型培养基 3
2.23 商品化脱水合成培养基 3
2.24 自制培养基 3
2.25 试剂 3
2.26 测试菌株 3
2.27 标准菌株 3
2.28 标准储备菌株 3
2.29 储备菌株 3
2.30 工作菌株 3
3 培养基及试剂质量保证 4
3.1 证明文件 4
3.2 贮存 4
3.3 培养基的实验室制备 5
3.4 培养基的使用 6
3.5 培养基的弃置 6
4 测试菌株的保藏及使用 6
4.1 一般要求 6
4.2 商业来源的测试菌株 6
4.3 实验室制备的标准储备菌株 7
4.4 储备菌株 7
4.5 工作菌株 7
5 培养基和试剂的质量要求 7
5.1 基本要求 7
5.2 微生物学要求 8
6 培养基和试剂性能测试方法 8
6.1 非选择性分离和计数固体培养基目标菌生长率定量测试方法 8
6.2 选择性分离和计数固体培养基测试方法 9
6.3 非选择性增菌培养基半定量测试方法 10
6.4 选择性增菌培养基半定量测试方法 11
6.5 选择性液体计数培养基半定量测试方法 12
6.6 悬浮培养基和运输培养基定量测试方法 12
6.7 鉴定培养基测试方法 13
6.8 实验试剂测试方法 14
附录 A 培养基性能测试方法流程图 15
附录 B 培养基不正确配制出现的质量问题及原因分析 19
附录 C 标准储备菌株和工作菌株制备 20
附录 D 食品安全微生物检验标准中指定的培养基成分 22
附录 E 食品安全微生物检验标准中参比培养基的质控标准 23
附录 F 食品微生物实验室使用培养基和试剂的质量控制标准 28
附录 G 测试菌株 56
附录 H 螺旋平板法 59

中华人民共和国国家标准
GB4789.28—2024
食品安全国家标准
食品微生物学检验
培养基和试剂的质量要求
2024-02-08发布
中华人民共和国国家卫生健康委员会国家市场监督管理总局
2024-08-08实施
术语和定义
质量控制
培养基和试剂的批次
培养基和试剂的性能
培养基
液体培养基
固体培养基
半固体培养基
运输培养基
保藏培养基
悬浮培养基
复苏培养基
增菌培养基
选择性增菌培养基
非选择性增菌培养基
分离培养基
选择性分离培养基
非选择性分离培养基
鉴别培养基（特异性培养基
鉴定培养基
计数培养基
参比培养基
商品化即用型培养基
商品化脱水合成培养基
自制培养基
测试菌株
标准菌株
标准储备菌株
储备菌株
工作菌株
GB4789.28—2024
GB4789.28—2024
培养基及试剂质量保证
3.1证明文件
培养基的实验室制备
3.4培养基的使用
培养基的弃置
4测试菌株的保藏及使用
般要求
商业来源的测试菌株
实验室制备的标准储备菌株
储备菌株
工作菌株
5培养基和试剂的质量要求
基本要求免费标准bzxz.net
微生物学要求
6培养基和试剂性能测试方法
非选择性分离和计数固体培养基目标菌生长率定量测试方法选择性分离和计数固体培养基测试方法非选择性增菌培养基半定量测试方法：选择性增菌培养基半定量测试方法·选择性液体计数培养基半定量测试方法·悬浮培养基和运输培养基定量测试方法鉴定培养基测试方法
实验试剂测试方法
附录A
附录B
附录C
附录D
附录E
附录F
附录G
附录H
培养基性能测试方法流程图
培养基不正确配制出现的质量问题及原因分析标准储备菌株和工作菌株制备
食品安全微生物检验标准中指定的培养基成分食品安全微生物检验标准中参比培养基的质控标准食品微生物实验室使用培养基和试剂的质量控制标准测试菌株
螺旋平板法
本标准代替GB4789.282013《食品安全国家标准要求》。
本标准与GB4789.28—2013相比，主要变化如下GB4789.28—2024
食品微生物学检验培养基和试剂的质量—增加了附录E参比培养基的质控标准及质控菌株一览表；一增加了培养基性能测试方法流程图；一增加了附录G测试菌株中文名、拉丁名及编号一览表；删除了纯化学培养基、未定义和部分定义的化学培养基、确证培养基；修改了部分测试菌株；
一修改了生产商和实验室使用商品化培养基和试剂的质量控制标准方法；一修改了附录F的菌株编号和名称。1范围
食品安全国家标准
食品微生物学检验
培养基和试剂的质量要求
本标准规定了食品微生物学检验用培养基和试剂的质量要求本标准适用于食品微生物学检验用培养基和试剂的质量控制。2术语和定义
2.1质量控制
为满足质量要求所采取的技术操作和活动。2.2培养基和试剂的批次
GB4789.28—2024
培养基和试剂完整的可追溯单位，是指在特定的生产周期生产，符合生产质量要求的一定数量的产品，这些产品批号相局
2.3培养基和试剂的性能
在一定条件下培养基和试剂对测试菌株的反应。2.4培养基
液体、半固体或固体形式的，含天然或合成成分，用于保证微生物繁殖、鉴定或保持其活力的物质。2.5液体培养基
由含有一种或多种成分的水溶液组成的培养基（如：缓冲蛋白陈水）。2.6固体培养基
在液体培养基中加人一定量固化物（如：琼脂），经煮沸或湿热灭菌处理，冷却至室温后凝固成固体状态的培养基。
倾注到平血内的固体培养基一般称作“平板”，倒人试管并倾斜摆放的固体培养基，当培养基凝固后通常称作“斜面”。
2.7半固体培养基
在液体培养基中加人少量固化物（如：琼脂），经煮沸或湿热灭菌处理，冷却后成半固体状态的培养基。
2.8运输培养基
在取样后至实验室处理前，保护和维持微生物活性，且不允许微生物明显增殖或减少的培养基。运输培养基中通常不含使微生物增殖的物质，但是培养基应能保护菌株（如：缓冲甘油-氯化钠溶液1
GB4789.28—2024
运输培养基)。
2.9保藏培养基
用于在一定期限内保护和维持微生物活力，防止长期保存对其不利的影响，或使其在长期保存后容易复苏的培养基（如：营养琼脂斜面）。2.10
悬浮培养基
将测试样品的微生物分散到液相中，在整个接触过程中不产生增殖或抑制作用的培养基（如：磷酸盐缓冲液）。
2.11复苏培养基
能够使受损或应激的微生物修复，使微生物恢复正常生长能力，但不一定促进微生物繁殖的培养基（如：胰蛋白陈大豆肉汤）。
增菌培养基
通常为液体培养基，能够给微生物紧殖提供特定的生长环境2.13选择性增菌培养基
能够允许特定的微生物在其中繁殖，而部分或全部抑制其他微生物生长的培养基（如：TTB培养基)。
2.14非选择性增菌培养基
能够保证多种微生物生长的培养基（如：营养肉汤）。2.15
分离培养基
支持微生物生长的固体或半固体培养基2.16选择性分离培养基
支持特定微生物生长而抑制其他微生物生长的固体培养基（如：XLD琼脂）。2.17非选择性分离培养基
对微生物没有选择性抑制的固体培养基（如：营养琼脂）。2.18鉴别培养基（特异性培养基）能够进行一项或多项微生物生理和（或)生化特性鉴定的培养基（如：伊红美蓝琼脂）。注：能够用于分离培养的鉴别培养基被称作分离（鉴别）培养基（如：XLD琼脂）。2.19鉴定培养基
能够产生一个或多个特定的鉴定反应而通常不需要进一步确证试验的培养基（如：乳糖发酵管）。注：用于分离的鉴定培养基被称为分离（鉴定）培养基。2.20计数培养基
能够对微生物进行定量计数的选择性（如：MYP琼脂）或非选择性培养基（如：平板计数琼脂）。注：计数培养基可包含复苏和(或)增菌培养基的特性。2
2.21参比培养基
GB4789.28—2024
依据培养基配方特别制备，质量优良的培养基，用于培养基的质量控制，以保证食品微生物检验用培养基的质量。
参比培养基需由具备相应检验能力，并取得通过国家认证认可资质检验机构出具的检测报告。2商品化即用型培养基
以即用形式或熔化后即用形式置手容器（如：平皿、试管或其他容器）或载体内供应的液体、固体或半固体培养基：
完全可即用的培养基（如：测试片等）；需重新熔化的培养基（如：用于平板倾注技术）：一一使用前需重新熔化、分装（如：倾注到平Ⅲ）的培养基（如：制剂培养基）：使用前需重新熔化，添加物质并分装的培养基（如：TSC培养基和BairdParker琼脂）注：测试片的测试方法及评定标准参照附录F，无法参照附录F部分（如菌落形态）可参考生产企业提供的操作说明来执行。
3商品化脱水合成培养基
使用前需加水和进行处理的干燥培养基（如粉末、小颗粒、冻干等形式）：完全培养基，使用的时候无须加入其他成分；一不完全培养基，使用的时候需加入添加剂。2.24自制培养基
依据培养基完整配方的具体成分，实验室自行制备的培养基。2.25试剂
用手食品微生物检验的试剂和培养基配制的配套试剂。2.26测试菌株
通常用于培养基性能测试的微生物。注：测试菌株根据其来源不同（见2.27～2.30）可进一步定义。2.27标准菌株
直接从专业菌种保藏机构获得并至少定义到属或种水平的菌株。按菌株特性进行分类和描述·量好来源于食品、水或其生产环境中的菌株3标准储备菌株
将标准菌株在实验室转接一代后得到的一套完全相同的独立菌株储备菌株
从标准储备菌株转接一代获得的独立菌株。2.30工作菌株
由标准物质/标准样品或标准储备菌株、储备菌株转接一代获得的直接用于测试使用的菌株。注：标准物质/标准样品是指含有一定数量活菌，符合预期用途并足够均匀和稳定的材料3
GB4789.28—2024
3培养基及试剂质量保证
证明文件
生产企业提供的文件
生产企业应提供以下资料（可提供电子文本）：培养基或试剂的各种成分、添加成分名称及产品编号：一批号：
一pH(适用于培养基）；
一贮存信息和有效期；
—标准要求及质控报告；
一必要的安全和(或)危害数据。3.1.2
产品的交货验收
对每批产品，应记录接收日期，并检查：—产品合格证明材料：
包装的完整性；
产品的有效期；
——其他必要的文件材料。
3.2购存
3.2.1一般要求
应严格按照供应商提供的存条件、有效期和使用方法进行培养基和试剂的保存和使用3.2.2
商品化脱水合成培养基及其添加成分验收应包括以下内容：
容器密闭性检查；
内容物的感官检查
开封后的脱水合成培养基，其质量取决于贮存条件。通过观察粉末或颗粒的流动性、均匀性、结块情况和色泽变化等，判断脱水培养基的质量变化。若发现培养基受潮或物理性状发生明显改变，则不应再使用。
3商品化即用型培养基和试剂
应严格按照供应商提供的贮存条件、有效期和使用方法进行保存和使用实验室自制培养基
在保证其成分不会改变条件下保存，即避光、干燥保存，必要时在2℃8℃冰箱中保存，通常建议平板保存期不超过4周，瓶装及试管装培养基保存期不超过6个月。如需在培养基中添加不稳定的添加剂，应即配即用；含有活性化学物质或不稳定性成分的固体培养基也应即配即用，不可二次熔化。4
GB4789.28—2024
培养基的贮存应建立经验证的有效期。观察培养基是否有颜色变化、蒸发（脱水）或微生物生长的情况，当培养基发生这类变化时，应禁止使用培养基使用或再次加热前，应先取出平衡至室温。3.3培养基的实验室制备
3.3.1一般要求
正确制备培养基是微生物检验的最基础步骤之一，使用脱水培养基和其他成分，尤其是含有有毒有害物质（如胆盐或其他选择剂）的成分时，应遵守良好实验室规范和生产厂商提供的使用说明。培养基的不正确制备会导致培养基出现质量问题（见附录B）。使用商品化脱水合成培养基制备培养基时，应严格按照厂商提供的使用说明配制，如质量（体积）、pH、制备日期、灭菌条件和操作步骤等。实验室使用各种基础成分制备培养基时，应按照配方准确配制，并记录相关信息，如培养基名称和类型及试剂级别、每个成分物质含量、制造商、批号、PH、培养基体积（分装体积）、无菌措施（包括实施的方式、温度及时间）、配制日期、人员等，以便溯源。3.3.2水
试验用水的电导率在25℃时不应超过25uS/cm（相当于电阻率≥0.04MQ/cm），除非另有规定要求。
试验用水的微生物污染不应超过10°CFU/mL。应按GB4789.2定期检验微生物污染水平。3.3.3称重和溶解
准确称量所需量的脱水合成培养基（必要时佩戴口罩或在通风柜或抽气罩下操作，以防吸人培养基粉末等有害物质），先加入适量的水，充分混合（注意避免培养基结块），然后加水至所需的量后适当加热，并重复或连续搅拌使其快速分散，含琼脂的培养基在加热溶解前应浸泡3min~5min。3.3.4pH的测定和调节
除特殊说明外，灭菌后pH应在标准pH士0.2范围内。一般使用浓度约为1mol/L的氢氧化钠溶液或盐酸溶液调节培养基的pH。3.3.5分装
将配好的培养基分装至适当容器中，培养基体积不应超过容器容积的2/3。3.3.6
灭菌/除菌
3.3.6.1一般要求
培养基应采用湿热灭菌法（见3.3.6.2）或过滤除菌法（见3.3.6.3）。某些培养基如不适用湿热灭菌或过滤除菌的方式，则可使用煮沸杀菌方式处理。3.3.6.2湿热灭菌
具体培养基应按食品微生物学检验标准中的规定或者商品使用说明进行灭菌。如培养基体积超过1000mL，应使用生物指示剂或相应设备进行灭菌效果验证。所有的操作应接照标准或使用说明的规定进行
GB4789.28—2024
加热后采用适当的方式冷却，以防加热过度。这对于天容量和敏感培养基十分重要，例如含有煌绿的培养基。
3.3.6.3过滤除菌
过滤除菌可使用孔径为0.22um的无菌设备和滤膜过滤去除微生物。3.4培养基的使用
3.4.1琼脂培养基的熔化
将培养基放人沸水浴中或采用有相同效果的方法（如高压锅中的层流蒸汽）使之熔化。经过高压的培养基应尽量减少重新加热时间。熔化后的培养基放人47℃～50℃的恒温装置中冷却保温（可根据实际培养基凝固温度适当提高恒温装置温度），直至使用，培养基达到47℃～50℃的时间与培养基的品种、体积和数量有关。熔化后的培养基应尽快使用，放置时间不应超过4h。未用完的培养基不能重新凝固留待下次使用。
3.4.2培养基的脱氧
将培养基在使用前放到沸水浴或蒸汽浴中加热15min：加热时松开容器的盖子，加热后盖紧，并迅速冷却至使用温度（如液体硫乙醇酸盐培养基）。3.4.3添加成分的加入
待培养基冷却至47℃50℃时加入平衡至室温的热不稳定添加成分，避免造成琼脂凝结或形成片状物。将加入添加成分的培养基缓慢充分混勾，尽快分装至待用的容器中。3.4.4平板的制备和贮存
倾注熔化的培养基至平皿中（直径90mm的平皿，通常要加入15mL～20mL琼脂培养基），使之在平皿中的厚度至少为3mm。将平皿盖好皿盖后放在水平平面，使琼脂冷却凝固。如果平板需贮存，或者培养时间超过48h或培养温度高于40℃，则需要倾注更多的培养基。凝固后的培养基应立即使用或存放于暗处和（或）2℃～8℃冰箱的密封袋中，以防止培养基成分的改变。在平板底部或侧边做好标记，标记的内容包括名称、制备日期和（或）有效期。也可使用适宜的培养基编码系统进行标记，对手采用表面接种形式培养的固体培养基，应在生物安全柜或洁净工作台先对琼脂表面进行干燥注意不要过度干燥。商品化的平板琼脂培养基应按照厂商提供的说明使用、3.5培养基的弃置
所有污染和未使用的培养基弃置应采用安全的方式，并且要符合相关法律法规的规定4测试菌株的保藏及使用
4.1一般要求
为成功保藏及使用菌株，不同菌株应采用不同的保藏方法，可选择使用冻干保藏、超低温（不高于一70℃)冷冻保藏、液氮保藏或其他有效的保藏方法。4.2商业来源的测试菌株
对于从标准菌种保藏中心或其他有效认证的商业机构获得的原包装测试菌株，复苏和使用应接照6
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