本标准规定了食品中氯酸盐和高氯酸盐的液相色谱-串联质谱测定方法。 本标准适用于蔬菜及其制品、水果及其制品、谷物及其制品、肉及肉制品、水产品、蛋及蛋制品、乳及乳制品、调味品、饮料类、婴幼儿配方食品和婴幼儿辅助食品、茶叶中氯酸盐和高氯酸盐的测定。

中华人民共和国国家标准
GB5009.291—2023
食品安全国家标准
食品中氯酸盐和高氯酸盐的测定2023-09-06发布
中华人民共和国国家卫生健康委员会国家市场监督管理总局
2024-03-06实施
1范围
食品安全国家标准
食品中氯酸盐和高氯酸盐的测定本标准规定了食品中氯酸盐和高氯酸盐的液相色谱-串联质谱测定方法GB5009.291—2023免费标准下载网bzxz
本标准适用于蔬菜及其制品、水果及其制品、谷物及其制品、肉及肉制品、水产品、蛋及蛋制品、乳及乳制品、调味品、饮料类、婴幼儿配方食品和婴幼儿辅助食品、茶叶中氯酸盐和高氯酸盐的测定2原理
试样中的氯酸盐和高氯酸盐用酸化的乙睛水混合溶液提取，固相萃取柱净化，采用高效液相色谱分离，串联质谱检测，同位素内标法定量。试剂和材料
除非另有说明，本方法所有试剂均为色谱级，水为GB/T6682规定的一级水。3.1
乙(CH,CN)。
甲醇（CH,OH)。
甲酸（HCOOH)。
试剂配制
0.1%甲酸水溶液：取1mL甲酸.用水稀释定容至1000mL.混匀。3.2.2
乙睛-甲酸水溶液：取60mL乙睛，用0.1%甲酸水溶液定容至100mL，混匀3.3
标准品
3.3.1氯酸钠（NaCIO3，CAS号：7775-09-9)：纯度>99%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准品。
3.3.2高氯酸钠（NaCIO，CAS号：7601-89-0）：纯度>99%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准品。
18O-氯酸盐（氯酸盐同位素内标）：100μg/mL（以O-氯酸根计）。18O,-高氯酸盐（高氯酸盐同位素内标）：100μg/mL（以O,-高氯酸根计）。3.3.4
标准溶液配制
3.4.1氯酸盐标准储备液（1.0mg/mL，以氯酸根计）：准确称取氯酸钠1.2801g用水溶解并定容至1000mL，混匀。2℃～8℃保存，有效期为1年。3.4.2高氯酸盐标准储备液（1.0mg/mL，以高氯酸根计）：准确称取高氯酸钠1.2300g，用水溶解并定1
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容至1000mL，混匀。2℃～8℃保存，有效期为1年。注：氯酸盐和高氯酸盐标准储备液可采用经国家认证并授予标准物质证书的标准品。3.4.3高氯酸盐标准储备中间液（100μg/mL）：准确吸取10.0ml高氯酸盐标准储备液，置于100mL容量瓶中，用水稀释定容至刻度，混匀将溶液转移至试剂瓶中。2℃～8℃保存，有效期为1年。3.4.4氯酸盐和高氯酸盐混合标准中间液：分别吸取1.00mL氯酸盐标准储备液和1.00mL高氯酸盐标准储备中间液，置于同一100mL容量瓶中，用水稀释并定容至刻度，摇匀，制成氯酸盐、高氯酸盐质量浓度分别为10μg/mL和1.0μg/mL的混合标准中间液，将溶液转移至试剂瓶中。2℃～8℃保存，有效期为3个月。
3.4.5氯酸盐和高氯酸盐混合标准使用液I：吸取1.00mL氯酸盐和高氯酸盐混合标准中间液，置于10mL容量瓶中，用水稀释并定容至刻度，摇匀，制成氯酸盐、高氯酸盐质量浓度分别为1000ng/mL和100ng/mL的混合标准使用液，将溶液转移至试剂瓶中。2℃～8℃保存，有效期为1个月。3.4.6氯酸盐和高氯酸盐混合标准使用液Ⅱ：吸取1.00mL氯酸盐和高氯酸盐混合标准使用液，置于10mL容量瓶中，用水稀释并定容至刻度，摇匀，制成氯酸盐、高氯酸质量盐浓度分别为100ng/mL和10ng/mL的混合标准使用液，将溶液转移至试剂瓶中。2℃～8℃保存，有效期为1个月。3.4.7氯酸盐和高氯酸盐同位素内标混合标准中间液：吸取0.50mL氯酸盐同位素内标和50L高氯酸盐同位素内标，置于同一10mL容量瓶中，用水稀释并定容至刻度，摇匀，制成氯酸盐内标、高氯酸盐内标质量浓度分别为5.0μg/mL和0.50μg/mL的混合标准中间液。2℃~8℃保存，有效期为3个月。3.4.8氯酸盐和高氯酸盐同位素内标混合标准使用液：吸取2.00mL氯酸盐和高氯酸盐同位素内标混合标准中间液，置手10mL容量瓶中，用水稀释并定容至刻度·摇匀，制成氯酸盐内标和高氯酸盐内标质量浓度分别为1.0μg/mL和0.10μg/mL的混合标准使用液。2℃～8℃保存，有效期为3个月，3.4.9氯酸盐和高氯酸盐标准系列液：分别吸取0L、250μL、500μL氯酸盐和高氯酸盐混合标准使用液Ⅱ，100L、500L、1000、5000L氯酸盐和高氯酸盐混合标准使用液I及200L同位素内标混合标准使用液，用水稀释并定容至10mL。氯酸盐质量浓度依次为0ng/mL、2.5ng/mL5.0ng/mL、10ng/mL、50ng/mL、100ng/mL和500ng/mL，高氯酸盐质量浓度依次为0ng/mL0.25ng/mL、0.50ng/mL、1.0ng/ml、5.0ng/mL、10ng/mL和50ng/mL，标准工作液中氯酸盐同位素内标溶液质量浓度为20ng/mL，高氯酸盐同位素内标溶液浓度为2.0ng/mL。临用现配，3.5材料
3.5.1固相萃取柱：石墨化炭黑柱（500mg，6mL）或性能相当者，临用前依次用6mL甲醇活化，6mL乙-甲酸水溶液淋洗平衡，上样前排出柱体中残留的溶液。3.5.2Ag/H柱（1g，2.5mL）或性能相当者，临用前用10mL水淋洗，静置活化30min。3.5.3聚丙烯刻度离心管：50mL。3.5.4再生纤维素滤膜：0.22μm。4仪器和设备
液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源。4.2
电子天平：感量分别为0.01mg和1mg。涡旋混合器。
匀浆机。
粉碎机。
离心机：最高转速≥10000r/min。4.7
超声波提取仪。
4.8加液器。
分析步骤
试样制备
5.1.1固态样品
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5.1.1.1干样：谷物、茶叶、干制水果和蔬菜、焙烤食品等低含水量样品，取可食部分，必要时经高速粉碎机粉碎均匀；对于固体乳制品、面粉等呈均匀状的粉状样品，摇匀，5.1.1.2鲜样：蔬菜、水果、水产品等高含水量样品取可食部分，洗净，晾干表面水分，匀浆均匀；对于肉类、蛋类等样品取可食部分匀浆均勾5.1.2液态样品：饮料类、调味品等样品摇匀。5.1.3半固态样品：揽拌均匀。
试样提取
包装饮用水
称取1g试样（精确至0.01g），加人20.0μL氯酸盐和高氯酸盐同位素内标混合标准使用液，涡旋振荡10 s，液相色谱-串联质谱仪测定。5.2.2其他样品
固体样品或调味品称取1g（精确至0.01g），液体或半固体样品（调味品除外）称取2g（精确至0.01g），置于50mL离心管中，加人40.0L氯酸盐和高氯酸盐同位素内标混合标准中间液，振荡混合后静置30min。加人0.1%甲酸水溶液4.0mL，具塞后振摇混匀，涡旋混匀30s，超声提取15min，加入乙睛6.0mL，超声提取30min，10000r/min离心5min，取上清液待净化。5.3试样净化
5.3.1高盐样品（酱油、蚝油、椒盐等）吸取2.0mL上清液过石墨化炭黑固相萃取柱，弃去流出液，再吸取5.0mL上清液过石墨化炭黑固相萃取柱，用离心管收集流出液。再用Ag/H小柱净化，弃去前3mL，收集之后的流出液过再生纤维素滤膜，液相色谱-串联质谱仪测定。5.3.2其他样品
吸取2.0mL上清液过石墨化炭黑固相萃取柱，弃去流出液.随后再吸取2.0mL上清液过石墨化炭黑固相萃取柱，流出液过再生纤维素滤膜，液相色谱-串联质谱仪测定。5.4液相色谱串联质谱参考条件
5.4.1液相色谱条件如下：
色谱柱：填料表面带有正电荷的五氟苯基柱（柱长100mm，内径2.1mm，填料粒径a）
1.7μm),或性能相当者。
流动相：A相为乙，B相为0.1%甲酸水溶液。梯度洗脱程序见附录A中表A.1。流速：0.3mL/min。
柱温：35℃。
进样量：3uL
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质谱条件如下：
离子化模式：电喷雾电离负离子模式（ESI）。b)
扫描方式：多反应监测（MRM）扫描e）
质谱调谐参数和定性、定量离子见附录A中表A.2。d)
氯酸盐和高氯酸盐的多反应监测（MRM)离子通道图参见附录B中图B.1。5标准曲线的制作
将氯酸盐和高氯酸盐标准系列溶液经液相色谱-串联质谱仪测定，获得相应的峰面积，以标准系列工作溶液中氯酸盐和高氯酸盐的浓度为横坐标，峰面积比为纵坐标，绘制标准曲线。5.6定性测定
被测组分选择两组离子，每组离子含一个母离子和一个子离子，在相同试验条件下，样品中待测物质的保留时间与标准溶液中对应的保留时间偏差在2.5%之内：所监测的离子对的信噪比均需大于或等于3（S/N≥3）。且样品中被测组分定性离子的相对丰度与浓度接近的标准溶液中对应的定性离子的相对丰度进行比较，偏差不超过表1规定的范围，则可判定为样品中存在对应的待测物表1定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度（K）/%
允许的最大偏差/%
5.7定量测定
2010K≤10
将处理得到的试样溶液经液相色谱-串联质谱仪分析，得到氯酸盐和高氯酸盐峰面积与对应的同位素内标物峰面积比值，根据标准曲线得到待测液中氯酸盐和高氯酸盐的含量。标准工作溶液和样液中待测物的响应值均应在标准曲线的线性响应范围内，如果含量超过范围，则重新取样分析，增加内标添加量进行处理，并用水稀释到内标浓度和待测液浓度相匹配后分析。5.8
空白试验
除不称取试样外，均按照上述测定步骤进行。如本底值高于0.5倍定量限，应对有机溶剂进行重蒸，或更换试剂和试验器Ⅲ，直至本底值低于0.5倍定量限。
6分析结果的表述
试样中氯酸盐或高氯酸盐的含量按式(1)计算X=(cc)×V×1000
mx1000
式中：
试样中待测组分的含量，以氯酸根或高氯酸根计，单位为微克每千克（μg/kg）；（1)
由标准曲线计算得到的试样溶液中待测组分的质量浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）；由标准曲线计算得到的空白试样落液中待测组分的质量浓度，单位为纳克每毫升(ng/mL)；
试样提取中加入提取液的体积，单位为毫升（mL）：7
单位换算系数；
试样的质量，单位为克（g）。
计算结果保留3位有效数字。
精密度
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在重复条件下获得的2次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的15%。其他
包装饮用水中氯酸盐的检出限为2.00pg/kg，定量限为5.00ug/kg：高氯酸盐的检出限为0.200μg/kg，定量限为0.500μg/kg。其他样品称样量为1g时，试样中氯酸盐的检出限为20.0μg/kg，定量限为50.0μg/kg；高氯酸盐的检出限为2.00μg/kg，定量限为5.00μg/kg。其他样品称样量为2g时，试样中氯酸盐的检出限为10.0μg/kg，定量限为25.0μg/kg；高氯酸盐的检出限为1.00pg/kg·定量限为2.50ug/kg。5
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液相色谱串联质谱参考条件
液相色谱梯度洗脱条件见表A.1。表A.1
质谱参考条件如下：
mL/min
毛细管电压：2.0kV；
离子源温度：150℃；
脱溶剂气温度：400℃；
脱溶剂气（N，）流量：900L/h；锥孔气（N，）流量：150L/h；
分辨率：单位质量分辨；
液相色谱洗脱条件
A（乙睛）
碰撞气及碰撞室压力：氩气，3.6X10-\MPa；扫描方式：多反应监测（MRM）；B(0.1%甲酸水溶液）
氯酸盐和高氯酸盐参考保留时间、定性定量离子对及锥孔电压、撞能量见表A.2。表A.2
化合物
氯酸盐
高氧酸盐
氯酸盐内标
高氯酸盐内标
定量离子。
参考保留时间
氯酸盐、高氯酸盐的主要质谱参数母离子
子离子
锥孔电压
当采用不同质谱仪器时，仪器参数可能存在差异，测定前应将质谱参数优化到最佳。碰撞能量
氯酸盐和高氢酸盐标准品的多反应监测（MRM）图氯酸盐和高氯酸盐标准品的多反应监测（MRM)图见图B.1。100-
高氯酸盐（m/：99>83）
高氯酸盐（m/：101>85）
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高氧酸盐内标（m/=107>89）
氯酸盐（m/=83>67）
氯酸盐（m/=85>69）
氰酸盐内标（m/=89>71）
氯酸盐（50ng/mL）和高氯酸盐标准品（5ng/mL）及同位素内标的多反应监测（MRM）图7
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