GB/T 5009.23-2003 食品中黄曲霉毒素Bl、B2、Gl、G2的测定 GB/T5009.23-2003 标准下载解压密码：www.bzxz.net

ICS67.040
中华人民共和国国家标准
GB/T 5009.23-—2003
代#GB/5909.231S96
食品中黄曲霉毒素B1B2、G1、G?的测定Detcrniination of aflatoxins B,.Bz,G,,G in foods2003-08-11发布
十华人民共和围卫生部
中国家标准化管理委员会
2004-01-01实施
GB/T 5009.23--2003
本标准代萃/T5C69.2一1996食品中英业强系5比：的测余克达3.本标涯与6/50,23—16护比主要修改如下一。储改了标准的中文名称，标准中文名练改为\危品中黄由基市案问的测定一按照GB/20001.4-2CD标准编写现则第1部分：化学分析方法对成标准的结构迹行了修改。
本标准中中华人民共和国卫生部裁出并归口。本标准第一法由中国预院医学科学院营苏与食品生研究所、中华人民共和国青岛进出口商品控验尚负卡起草。bzxz.net
本标准第二法出北京市防度站中国预防医学科学院省养与受品华研究所，卫作部食品卫少监督检验所须资起节。
本标准下1985与首次发，下199年第一次整订，本次为第政整订。19
1范罔
食品中芳曲鑫素BG的诚正
本标准规定了各种食品费制碳率索，3.心，G的测定方法本标准适用于务食品中蒙曲碳毒意、心.的副定，GB/T5009.23—2003
在层板上的量低格出峰，黄山带毒素B，G为.0.为0.0G2K8，本方法检用限：英李C为5Jx/.为2：/g。
2规范性引用安件
下义件中的条款适过本标准的引州而成为本标准的款，凡是注口期的号用文件·其随后所的修改单（不包括动误的内穿>成候订股均不适用于本标准，然市，苹励报据不标准达成协议的各方研究是否可使用这些文节的最新版今，凡是不注月期的引用文件，其量新级车适用于本标准。GB/T5003.222003食品中黄业荐惠B，的副定第一法薄医色谱法
3原理
试栏经提取，浓编、薄层分离后，在6Fnm崇外光下，黄毒毒京B，B：产尘蓝紫色关光，黄由候毒京心.G产生黄缺色荧光，根据其在爆层上显示的放光的战低检片盘来定量，4试剂
4,1同CBT5005.22—13中3.1-~3.13,4.2次氯整钠籍液（消市用）：配制办法见（B/T5303.222003中3.16.4.3来-乙醇-水（43+35+19)展并剂：收此比例的落减置于分浓滞斗中，振拆5mim，静骨过夜：将上下层落液分别置于具案瓶中保存，工下误交男的落链亦大不要。若群液山现混地·则在的它水裕工加势，待清晰后，寻停止加热，取上层溶筏作展开制用，另取一定盘的下层咨液胃小血中，再放于展开内，将薄层板放人受元蓓内，预先饱私二tin后展开4.4硫酸1.-3)
4,5黄山带每高 B.,B,,G1、G：标准溶滋如下：4.5.1单一标准馆液（10g/ml.)：证随称取黄曲要宽家B.G，标准品1mg~1.2mg：散曲率毒鸡B.、G标准品务0.5--0.6g·月萃乙瞻混合液作游剂。配制方法、度及度的测定录照1:15009.22233313.14
黄曲密毒素HR、G.、，的分了量及用著-乙情性降剂的最大吸收的滤长及率尔消准系数见表1表 1
战人极收峰波长/nm
迎尔消光系遗
12 BC9
20 963
4.5.2务标准使用商：以下各标准流因用来乙哨混合减配彻办「也
GH/T5039.29—2003
4.5.2.1黄标推用满11每相当0.2g黄GC.兼H，2作定快用。
4.5.2.2费助穿率宽限合标准决用激：每辛升拟当于.4费曲.毒来6，改002名黄典零存求Ts.作展低检出量用。
5仪器
GB/T 5u3.22—20s4.1~.4.U
6分析步要
6.1取样
同, (/ 503. 33—2(05中 5. 。6.2提取
GB/T5309.22
20035.2。
6.3测定
6.3.1单向展开法
6.3.1.1调温吸的制备
(B/15309.2220035.3.1.1。
6.3.1.2点样
同GE/T5:13.22--2003中5.3.1.2。滴加式样如下第--点：1Gα1.黄曲需两系泥含标准使用液Ⅱ.第二点：2CμL样，
第三点0.样进10效曲每率表混维使用谦第四点，2UL样饿十1UL黄曲避毒索泥合标准使用波1。G.3.1.3展开与观察
黄曲每南素BBG的比移值依次排列为B>B>G>G在展开模内加1cml.无水乙能，预展12cm，取出机下.再」展开种内加10mL丙南-二氧牛烷(8十93)，展开1Vem~12cm,裘出。在外光灯下娩案结果：方法如下。E.3.1.3.1由】样箍点上加满黄曲再书呢合标准使用1改[，可使度曲尊赤素B，、3、GG：分别与样商中的英曲球每素B，、比、G心，荧光点重叠。如样液为阴性，博层故上的第三点牛也每毒素B.B.,.G.依次为,0心4.0.0心2.心.0010.0心3Jrg：可用作检查士岸内黄曲零毒素B,.民存，守。的展低检出点录存正常击税。划为比，则感定位作用。遵居极上的第匹点中黄曲等来表、i、G:、G，依欧为0.002、3.01、(.002、0.Co:E.±要起定位作用6.3.1.3.2若第二点在与黄曲每每*B：B的相应位益上无蓝紫色荧光点：或在与总曲每求率：的相应位冒上黄绿色求光点，表示试样黄曲年声B，含鼠在5g/kg以下；BG在2.5/k以下划在柜成位受上有以上荧光点，则需进行确证试验。6. 3. 1. 4确证试险
6. 3. 1. 4. 1黄典要获与第乙酸反应产生衍生物.儿限于B.和心:;.和(与兰或乙酸不起反应B和G.的将生物比我值为BG1。于薄层板本边根次滴加两个点第一点：101.黄曲本标使用液
第二点：20pL扫液：
十以上均点各切三制之1小滴盖其上.友应5min后，用吹风机吹热风2n.使热文吹到薄层板工的温度不高于：再于薄层板工流切以下两个点。第三点：10叫.首曲再市求祝合标准使用液红。192
第四点：2拌液.
GB/T5009.23-~2003
再减开（同&.3.1.31：车常外光灯下观案样获是否产生与黄出毒牵素B：或G，杯准点相同的桥生物，术划三点乙酸的三、四两点，可侬次作为样施与标痛的衍生物空白对照，6.3.1.4.2黄曲毒意B：剂G：的证试验，叮历来乙置-水（46十35十19)展开，若标准点与样液点H现重登，即可确定..
6.3.1.4.3在展开的薄尺板上质以硫酸（1一3）黄出零乘素B3、B、G、G：都变为黄色荧光。6.3.1.5稀释定量
轮中黄由零毒来B，：G蒙光点的火温地各与黄举毒素B，G、标准点的尼假检白量（H：为o.Ouu4BG，为.U1的费光强度一致则试林4觉山禁市素BG：含量为5/g：，量为R/kg，郊样滤生何一种黄需毒京的荧光蝇度比其量低检出量强，则需逐·进行定量，点至样散点的荧光强度与量低检出量点的费光盈度·致为止，定与计算方法参照G13/1 0C9.222003中5. 3. 1.5与3, 3,1, 66.3.2双向晨开法
6.3.2.1滴加两点法
6.3.2.1.1点详，取满层板三以，在距下端3m基裁上滴加黄曲举标准使用与择获.即在二起我的距边缘.8cm--1cm处各滴如10此黄曲来末混合标准使用减I：在距左边缘2.811~3.0c灿各商20叫样液，然后士第二板的样滤点上加满10产]：黄曲毒毒求混合标准快用液山！在第二板上的样液点工们滴1].黄曲每毒素氓合标雅便月液！。6. 3.2. 1.2愿开:同 GR/T 5009. 222303中 5. 3. 2. 1. 2。6.3.2.1.3观察评定结具划下：
6.3.2.1.3.1在紫外光灯下规察第-、二板，若筹二板的第二点在黄曲每本系.、、G、G标准点的！相应处出现最低检出量，而篇一板在与第二板的相同位胃上末山既荧光点、则试样中英曲每毒素B、芯含以下G的含量在2下
6.3.2.1.3.2作第一报东与募二板的相同位性上膏白规炎光点，则物第一板与筹二板比较，看第三板上第二点与第械上第二点的柜司位胃的火光点量否各与其费画需每素T，：G标雅点重叠，如采审督：再按5.3.2.1.3.5进行所靠的确证试龄。6.3.2.1.3.3黄出市系：、G的证试验：收薄尺版网扶于第四，第两板距达傲0.2m~1cm处各滴加10黄曲每李家混合标准性月谦Ⅱ及1满二乙酸，距左边缘2.8em～同T/T500S.22一2001中5.3.2.2。所不的地方是在游层上滴加标准链时以责幕年袁据合雅使用液代荐黄曲滋每来B.标雅快用（0，U4/L）。我释定与结果算多照K/ CC0, 22—204 5, 3. 2. 2 与 5. 3. 1. 6:第二法微柱筛选法
试样提取嵌通逆山有化铝上延镁吸附剂组成的微社层析营，杂质被氧化舒股医。英曲每毒案被群联吸彩剂吸叫，在35.nm紫外载下呈蓝禁色荧光：其荧光蝇惠在-定荐回内与黄由震毒索的含量求正la3
GB/T5009.23—2003
5，出干微并不能分离B、B、GI、结果为黄曲而索的总量。日试护
8.1石油醛：沸程60℃~92℃或31℃--60t:日.2中性氧化势，层折用130月~200尺，83化：用250--200月
日.4无水酸的过40口~80日筛或80日--100日筛，8.5硅镁型吸附剂：层析用100±200日。B.6甲醇水择液:(55-45)。
白展开剂,酮三氧氢甲烷(113)。3.8脱脂棉：用索民橙取器以一氯甲烷为带满摄取2h后，择十后忙十施中保存：8.9黄出零垂素H，标准滤用率-乙随（98+2）配成U.4/mL的忙液及0.1PR/mL的停用液，避光冷葱：
注：尽新用求化铝续以磁时剂、大水历映钠应在20心盾化21.密需，贮干燃器内可但存一用，9收器
9.1紫外光灯：8-1u，带有波长265rm滤光片9.2微在管：内径n.1m，长12rml前我聘管，为加根支便上加一段租音：9.3微#督架。
9.4微量让射器，5a..
10分析步累
10.1握取
10.1.1粮食花及其制品：吸款碎过确（20日）试样29.00于其塞形瓶中，归100mI甲醇水减3rml.凸油避，密密振措2r:m:，静重片划对述于Wm且率量简中收集50ml.中醇水虑商（注意切刻每石洲醛层带人滤减中），转人分液漏中.加G0mL统酸钠落浓（20g/）稀蜂，加三氧甲烷10，轻捕2min--3min，静置分层，一氯甲烷层通过氛有5K无.水蔬酸钠的小需斗脱水（以少原脱脂棉求让诺颈厂以少量三院润限并撼入1色管中，再向分端中阳3uL三卖甲烷重提一次，脱水后滤人原比色管巾，以少犀三干烧洗谢斗并定穿至！,心ml..游寒，混句，特断，此样渡：mI扫当1.0g试格，
10.1.2枯物油：称施均泄群10.00g于20ml.的烧怀小，月50m.石油醛分数次洗人分中，加ml醛水轻据2min*-\ir，静置分层，将F层甲师水转人另一分液满+，加50mL统酸.水游浓2ug/L）稀整，加三氯甲烷m.L..以下族10.1.1白\转挣in--3mir....\起操作沈样被1mL相当 1, 试样。
和、1.3双静游、油，醋等水搭生试杆，酒等含乳化接的试样，需在烧杯于水浴上加热，搅拌除去气汽，否易乳化：你湿勾试样20.0C多士小烧环中以80mL硫酸谢帮液(2V号/E>流人分液漏斗币，血=额甲烧1UmL此样溅1mL相当2.0R试样.10.1.4离乳，黄类：取源句减样21，多于与座谁形瓶中，加用醇水100L，石汕酰20m1.派荡30in，净置片，以折整快速定性滤纸过浮丁5nIv.I.具查量简中，收集甲醇水滤液FL（相当于1C试样，四为12g试择中约含有5L水），置分依端斗中，加人一氯中流1Cml以下接1.1.1\轻漫2mit-mia\起没作，此样满！TcJ相当.0R式样，10.2测定
10.2.1说柱管的制备：以少量脱脂相做底用粗铁丝确实，受于做挂管架上.依次加人高为J.5cm后求114
GB/T 5009.232003
硫酸(0日~.1）0cm群镁率吸剂,心.cm无米情钠（80日-00日）,1.5ctr中性年化铝1.r1酸性氧化铅：3m水破晚钠（4)甘-80日）预部以少罩脱脂棉堵案，装试测时要占每装一种试剂要适当龄烯，两种试剂之间异面要平齐.柱世要随装随用，以免在空气中吸水活性下降。10.2.2微并房折：在装好的微住中、加人一氧申烧光收晚1.0m上，同时做标推管，另三支微杜售，加人二想烷1m再分加人黄出要带家T3:标推液（0,1以/ml.>0.50,100L.相当干黄曲每毒京B，标准0、5、1g待加波滤至项层时.即人1mL因期-三氯甲始（-十9>展开剂，在如样或展开呢，社告均要保持垂直，持展开剂流究后，即可观察结乐，10.2.3结果赛与详定：于技长565nm紫外光灯下现赛寄景析后的样品管做次与U、5、J5放出索标准较，若试样管内诺吸附剂层与致购为刃件（在/以下试样中硅镁吸附剂层呈益带色荧光坏，购为羽此，井需进一步按薄层退析法进行确证测定，但不需再新提激试件、其操作妇下：准确吸取源三氯甲烷提取液1,mI.相当1R或8P试样)丁小蒸发血内挥下,以少量苯7.响沿合衰（S812)分数次转人刻度小管中，足容至1.0mL，密密：满句，使薄层层析达确证，升测亲黄曲爵特系：5的含量
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