本标准规定了牛乳及其制品、黄油及新鲜猪组织(肝、肾、血及瘦肉)等食品中黄曲霉毒素M1与B1的测定方法。本 标 准 适用于牛乳及其制品、黄油及新鲜猪组织(肝、肾、血及瘦肉)等食品中黄曲霉毒素M1与B1的测定。 GB/T 5009.24-2003 食品中黄曲霉毒素M1与Bl的测定 GB/T5009.24-2003 标准下载解压密码：www.bzxz.net

ICS67.040
中华人民共和国国家标准
GB/T5009.24—2003
代替GB/T5009.24—1996
食品中黄曲霉毒素M1与B的测定
Determination of aflatoxins M, and B, in foods2003-08-11发布
中华人民共和国卫生部
中国国家标准化管理委员会
2004-01-01实施
GB/T5009.24-2003
本标准代替GB/T5009.24—1996《食品中黄曲篝毒素M,与B,的测定方法》。本标准与GB/T5009.24—1996相比主要修改如下：修改了标准的中文名称，标准中文名称改为《食品中黄曲舞毒素M，与B的测定》；按照GB/T20001.4—2001《标准编写规则第4部分：化学分析方法》对原标准的结构进行了修改。
本标准由中华人民共和国卫生部提出并归口。本标准由中国预防医学科学院营养与食品卫生研究所负责起草。本标准于1985年首次发布，于1996年第一次修订，本次为第二次修订。198
1范围
食品中黄曲霉毒素M,与B,的测定GB/T5009.24—2003
本标准规定了牛乳及其制品、黄油及新鲜猪组织（肝、肾、血及瘦肉）等食品中黄曲篝毒素M，与B的测定方法。
本标准适用于牛乳及其制品、黄油及新鲜猪组织（肝、肾、血及瘦肉）等食品中黄曲舞毒素M，与B的测定。免费标准bzxz.net
2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T5009.22—2003食品中黄曲露毒素B，的测定3原理
试样经提取、浓缩、薄层分离后，黄曲筹毒素M，与B在紫外光（波长365nm）下产生蓝紫色荧光，根据其在薄层上显示荧光的最低检出量来测定含量。4试剂
4.1同GB/T5009.22~2003中第3章。4.2异丙醇。
4.3硅胶G：层析用。
4.4氯化钠及氯化钠溶液（40g/L)。4.5硫酸（1+3）。
4.6玻璃砂：用酸处理后洗净、干燥，约相当于20目。4.7黄曲霉毒素M，标准溶液：用三氯甲烷配制成每毫升相当于10μg的黄曲猫毒素M，标准溶液。以三氯甲烷作空白试剂，黄曲毒素M.的紫外大吸收峰的波长应接近357nm，摩尔消光系数为19950。避光，置于4℃冰箱中保存。4.8黄曲毒素M,与B混合标准使用液：用三氯甲烷配制成每毫升相当于各含0.04的黄曲霉毒素M,与B。避光，置于4℃冰箱中保存。5仪器
同GB/T5009.22—2003中第4章。6分析步骤
整个操作需在暗室条件下进行。6.1试样提取
6.1.1试样提取制备表，见表1。199
GB/T5009.24—2003
称样量/
试样名称
牛乳粉
猪瘦肉
加水量/
加甲醇量/
提取液量按式(1)进行计算。
表1试样制备
提取液量/
式中：
X-提取液量，单位为毫升（mL），加40g/L氯化
钠溶液量/
X(90+A+B)
浓缩体积/
滴加体积/
方法灵敏度/
pμg/kg
（1）
A—-试样中的水分量，单位为毫升（mL)（牛乳、炼乳及猪组织的取样量为30g，牛乳粉、乳酪的取样量为15g），
加水量，单位为毫升（mL）。
注：试样中的水分量参照中国预防医学科学院营养与食品卫生研究所编著的《食物成分表》。因各提取液中含48mL甲醇，需39mL水才能调到甲醇与水之体积比为（55+45），因此加人氯化钠溶液（40g/L）量等于（87mL）减去提取液量（mL）。6.1.3牛乳与炼乳：称取30.00g混匀的试样，置于小烧杯中，再分别用90mL甲醇移于300mL具塞锥形瓶中，盖严防漏。振荡30min，用折登式快速滤纸滤于100mL具塞量筒中。按表1收集62mL牛乳与52mL炼乳（各相当于16g试样）提取液。6.1.4牛乳粉：取15.00g试样，置于具塞锥形瓶中，加人20mL水，使试样湿润后再加入90mL甲醇，以下按6.1.3自振荡30min....”起依法操作，按表1收集59mL提取液（相当于8g试样）。6.1.5乳酪：称取15.00g切细、过10目圆孔筛的混匀试样，置于具塞锥形瓶中，加5mL水和90mL甲醇，以下按6.1.3自\振荡30min....”起依法操作，按表1收集56mL提取液（相当于8g试样）。6.1.6黄油：称取10.00g试样，置于小烧杯中，用40mL石油醚将黄油溶解并移于具塞锥形瓶中。加45mL水和55mL甲醇，振荡30min后，将全部液体移于分液漏斗中。再加人1.5g氮化钠摇动溶解，待分层后，按表1收集80mL提取液（相当于8g试样）于具塞量筒中。6.1.7新鲜猪组织：取新鲜或冷冻保存的猪组织试样（包括肝、肾、血、瘦肉），先切细，混勾后称取30.00g，置于小乳钵中，加玻璃砂少许磨细，新鲜全血用打碎机打匀，或用玻璃珠振摇抗凝。混匀后称取30.00g，将各试样置于300mL具塞锥形瓶中，加人90mL甲醇，以下按6.1.3自“振荡30min\起依法操作。按表1收集59mL猪肝，61mL猪肾，58mL猪瘦肉及61mL猪血等提取液（各相当于16g试样）。
6.2净化
6.2.1用石油醚分配净化：将以上收集的提取液移人250mL分液漏斗中，再按各种食品加入一定体积的氯化钠溶液（40g/L）（见表1）。再加人40mL石油醚，振摇2min，待分层后，将下层甲醇-氮化钠200
GB/T5009.24—2003
水层移于原量筒中，将上层石油醚溶液从分液漏斗上口倒出，弃去。再将量筒中溶液转移于原分液漏斗中。再重复用石油醚提取两次，每次30mL，最后将量简中溶液仍移于分液漏斗中。黄油样液总共用石油醚提取两次，每次40mL。
6.2.2用三氯甲烷分配提取：于原量简中加人20mL三氯甲烷，摇勾后，再倒人原分液漏斗中，振摇2min。待分层后，将下层三氯甲烷移于原量简中，再重复用三氯甲烷提取两次，每次10mL合并于原量筒中。弃去上层甲醇水溶液。6.2.3用水洗三氯甲烷层与浓缩制备：将合并后的三氯甲烷层倒回原分液漏斗中，加入30mL氯化钠溶液（40g/L），振摇30s，静置。待上层混浊液有部分澄清时，即可将下层三氯甲烷层收集于原量筒中。加人10g无水硫酸钠，振摇放置澄清后，将此液经装有少许无水硫酸钠的定量慢速滤纸过滤于100mL蒸发Ⅲ中。氮化钠水层用10mL三氯甲烷提取一次，并经过滤器一并滤于蒸发Ⅲ中。最后将无水硫酸钠也一起倒于滤纸上，用少量三氮甲烷洗量筒与无水硫酸钠，也一并滤于蒸发血中，于65℃水浴上通风挥干，用三氟甲烷将蒸发中残留物转移于浓缩管中，蒸发血中残渣太多，则经滤纸滤人浓缩管中。于65℃用减压吹气法将此液浓缩至0.4mL以下，再用少量三氯甲烷洗管壁后，浓缩定量至0.4mL备用。
6.3测定
6.3.1硅胶G薄层板的制备
薄层板厚度为0.3mm，105℃活化2h，在干燥器内可保存1d~2d。6.3.2点板
取5cm×20cm的薄层板两块，距板下端3cm的基线上各滴加两点，在距第一与第二板的左边缘0.8cm~1cm处各滴加10μL黄曲霉毒素M，与B混合标准使用液，在距各板左边缘2.8cm~3cm处各滴加同~样液点（各种食品的滴加体积见表1），在第二板的第二点上再滴加10μL黄曲毒素M与B混合标准使用液。般可将薄层板放在盛有干燥硅胶的层析槽内进行滴加，边加边用冷风机冷风吹干。
6.3.3展开
6.3.3.1横展：在槽内加人15mL事先用无水硫酸钠脱水的无水乙醛（500mL无水乙醚中加20g无水硫酸钠）。将薄层板靠近标准点的长边置于槽内，展至板端后，取出挥干，再同上继续展开一次。6.3.3.2纵展：将横展两次挥干后的薄层板再用异丙醇-丙酮-苯-正已烷-石油醚（沸程60℃～90℃）-三氯甲烷（5+10+10+10+10+55）混合展开剂纵展至前沿距原点距离为10cm~12cm取出挥干。6.3.3.3横展：将纵展挥干后的板再用乙醚横展1次～2次，展开方法同6.3.3.1。6.3.4观察与评定结果
6.3.4.1在紫外光灯下将第一、二板相互比较观察，若第二板的第二点在黄曲霉毒素M，与B标准点的相应处出现最低检出量（M，与B，的比移值依次为0.25和0.43），而在第一板相同位置上未出现荧光点，则试样中黄曲霉毒素M，与B，含量在其所定的方法灵敏度以下（见表1)。6.3.4.2如果第一板的相同位置上出现黄曲舞毒素M与BI的荧光点，则第二板第二点的样液点是否各与滴加的标准点重叠，如果重叠，再进行以下的定量与确证试验。6.3.5稀释定量
样液中的黄曲霉毒素M.与B荧光点的荧光强度与黄曲霉素M,与B的最低检出量(0.0004μg)的荧光强度一致，则牛乳、炼乳、牛乳粉、乳酪与黄油试样中黄曲毒素M，与B，的含量依次为0.1、0.2、0.5、0.5及0.5μg/kg；新鲜猪组织（肝、肾、血、瘦肉）试样均为0.2μg/kg（见表1)。如样液中黄曲霉毒素M与BI的荧光强度比最低检出量强，则根据其强度逐一进行测定，估计减少滴加微升数或经稀释后再滴加不同微升数，直至样液点的荧光强度与最低检出量点的荧光强度一致为止。6.3.6确证试验
在做完定性或定量的薄层板上，将要确证的黄曲霉毒素M，与B的点用大头针圈出。喷以硫酸溶201
GB/T5009.24—2003
液（1十3)，放置5min后，在紫外光灯下观察，若样液中黄曲霉毒素M与B点同标准点一样均变为黄色荧光，则进一步确证检出的荧光点是黄曲毒素M，与BI6.3.7结果计算
黄曲舞毒素M,或B,的含量按式(2)进行计算。xDx1000
式中：
X-黄曲毒素M,或B含量，单位为微克每千克(μg/kg)；V,--样液浓缩后体积，单位为毫升(mL);V，—出现最低荧光样液的滴加体积，单位为毫升（mL）：D—浓缩样液的总稀释倍数；
一浓缩样液中所相当的试样质量，单位为克（g）；0.0004-—黄曲霉毒素M,或B,的最低检出量，单位为微克（μg)。结果表示到测定值的整数位。
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