饲料中氟喹诺酮的测定 高效液相色谱法（DB43/T702—2012）发布于2012年7月24日，并于2012年12月10日实施，由湖南省质量技术监督局发布。本标准旨在规范饲料中氟喹诺酮类药物（如达氟沙星、恩诺沙星、环丙沙星、沙拉沙星）的测定方法，推动饲料产品的质量控制。本标准由湖南省畜牧水产局提出并归口，起草单位包括湖南省兽药饲料监察所和潮商省畜禽水产品质量检验检测中心，主要起草人有邓云波、隆雪明、谭美英、肖安东、胡保国、陈启友、陈福华、吴礼龙、匡光伟、李娜、魏群、蘑峰。 1. 范围 本标准规定了饲料中氟喹诺酮类药物达氟沙星、恩诺沙星、环丙沙星、沙拉沙星的高效液相色谱法测定方法，适用于配合饲料、浓缩饲料及添加剂预混合饲料中的药物测定。 2. 规范性引用文件 下列文件对于本标准的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本标准；凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本标准。包括但不限于：GB/T6682《分析实验室用水规格和试验方法》、GB/T14699.1—2005《饲料采样》。 3. 原理 采用2%氨水水溶液提取样品中的氟喹诺酮类药物，使用混合型阴离子交换柱进行净化，然后通过高效液相色谱法（荧光检测器）进行测定，外标法定量。 4. 试剂和材料 4.1 氨水：分析纯。 4.2 磷酸：分析纯。 4.3 三乙胺：分析纯。 4.4 氢氧化钠：分析纯。 4.5 乙晴：色谱纯。 4.6 甲醇：色谱纯。 4.7 2%氨水水溶液：取2mL氨水与98mL水混合均匀使用。 4.8 5.0mol/L氢氧化钠溶液：取氢氧化钠饱和溶液28mL，加水稀释至100mL。 4.9 0.03mol/L氢氧化钠溶液：取5mol/L氢氧化钠溶液0.6mL，加水稀释至100mL。 4.10 50%甲醇溶液：取50mL甲醇与50mL水混合均匀。 4.11 0.05mol/L磷酸/三乙胺溶液：取磷酸3.4mL，加入水稀释至1000mL，用三乙胺调pH至2.4。 4.12 流动相：0.05mol/L磷酸/三乙胺溶液与乙晴按比例配置。 4.13 微孔滤膜：0.22μm，有机膜。 4.14 SPE柱：100mg/3mL，混合型阴离子交换柱。 4.15 各种对照品：如达氟沙星、恩诺沙星、环丙沙星和沙拉沙星，含量应大于99.0%。 5. 仪器和设备 5.1 高效液相色谱仪：配有炭光检测器。 5.2 分析天平：感量为0.00001g和0.001g。 5.3 面相萃取装置。 5.4 离心机。 5.5 超声波清洗机。 5.6 pH计：精度为0.02。 5.7 旋涡混合器。 6. 采样 6.1 按GB/T14699.1—2005的规定执行。 6.2 试样的备样：将采集的饲料样品，用四分法缩减分取200g，粉碎过0.45mm孔径的筛，充分混匀，装入磨口瓶中备用。 7. 测定步骤 7.1 提取：称取饲料样品2g（精确到0.001g），置于50mL离心管中，加入25.0mL 2%氨水水溶液，涡旋混合，超声提取10min，5000r/min离心10min，取上清液。重复提取一次，合并上清液，混匀备用。 7.2 净化：通过SPE柱进行净化。 附录A（资料性附录） 氟喹诺酮高效液相色谱图