ICS 65.020.01
B 05
河北省地方标准
DB13
DB13/T 1471—2011
黄瓜耐盐性鉴定技术规程
Rules for identifying salt tolerance of cucumber lines
2011-11-15发布
河北省质量技术监督局
2011-11-30实施
前言
本标准依据GB/T 1.1—2009的规定编写。
本标准由沧州市质量技术监督局提出。
本标准起草单位：天津市农业生物技术研究中心、沧州市农林科学院。
本标准主要起草人：张越、刘仲齐、阎旭东。
1 范围
本标准规定了利用叶表皮细胞进行黄瓜耐盐性鉴定的方法及评价指标。
本标准适用于黄瓜品种资源和育种材料的耐盐性鉴定及评价。
2 规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB 4404.1 粮食作物种子 第1部分：禾谷类 术语和定义
3 术语和定义
下列术语和定义适用于本标准。
3.1
叶片表皮细胞死亡率
指从黄瓜叶片上剥离下来的表皮细胞，浸泡在一定浓度的NaCl溶液中胁迫一段时间后，表皮细胞死亡的数量占观察细胞总数的比率。
4 耐盐性鉴定原理
用叶表皮细胞的死亡率能快速鉴定黄瓜耐盐潜力。黄瓜的叶表皮细胞在高盐环境中，发生质壁分离，最后导致细胞质膜的破裂。耐盐能力不同的细胞，在盐胁迫环境中发生质膜破裂的程度不同。以染料中性红为指示剂，对黄瓜的叶表皮细胞进行染色，质膜没有破裂的活细胞，其液泡内的微酸性环境使中性红变成樱桃红色。质膜破裂的死细胞不着色。根据着色细胞的多少可以区分耐盐能力不同的黄瓜品种。
5 耐盐性鉴定方法
5.1 鉴定准备
5.1.1 培养器皿的选择
选择72孔的育苗盘进行育苗，穴孔直径2.5cm、深度3cm。
5.1.2 种子选择
选取籽粒饱满、整齐一致的种子，种子的品质应符合GB 4404.1标准要求。
5.1.3 培养基质的准备
选择粒径为1mm的蛭石和优质草炭作为培养基质，蛭石和草炭在试验前100℃高温灭菌2h。
5.1.4 盐溶液的配置
将175.5g分析纯NaCl溶解在1000ml去离子水中，配制成3.0mol·L⁻¹ NaCl溶液。
5.1.5 染色剂的配置
将0.3g中性红溶解在1000ml去离子水中，配制成0.03%的中性红（3-氨基-6甲氨基-2-甲基吩嗪盐酸盐，分子式C₁₅H₁₇N₂O·HCl）溶液。
5.2 鉴定步骤
5.2.1 种子的催芽
将准备好的种子置于培养箱内催芽，温度25℃±1℃，催芽时间16h～24h。
5.2.2 播种
待种子发芽后播于装有蛭石：草炭（1：1）的育苗盘中育苗。
5.2.3 培养
培养温度为昼温25℃±1℃、夜温18℃±1℃，培养湿度为60%。
5.2.4 盐胁迫及染色处理
当黄瓜幼苗长出2片真叶时，选取黄瓜幼苗的第一片真叶，剥离叶片下表皮，放在0.03%中性红溶液中染色10min，置于浓度为3.0mol·L⁻¹的NaCl溶液中处理10min。
6 耐盐性评价
6.1 叶片表皮细胞死亡率的计算
把染色后的叶表皮放在10×10倍的光学显微镜下观察，用C5型0.5网形目镜尺在（5×5）mm范围内统计活细胞数量和细胞总数。叶片表皮细胞死亡率的计算公式如下：
细胞死亡率（%）=（单位面积细胞总数 - 单位面积活细胞数）/ 单位面积细胞总数 × 100
6.2 耐盐性评价
根据单位面积叶片表皮细胞的死亡率，把黄瓜的耐盐性分成强、中、弱三个等级。
表1 黄瓜耐盐性分级标准
级别：2
叶片表皮细胞死亡率（A）：A≤20%
耐盐性：强
级别：3
叶片表皮细胞死亡率（A）：20%
耐盐性：中等
级别：4
叶片表皮细胞死亡率（A）：A≥60%
耐盐性：弱
