ICS 11.220 CCS B41 DB45 DB45/T 2353—2021 广西壮族自治区地方标准 猪主要病毒性腹泻病毒鉴别检测转录聚合酶链反应法（多重RT-PCR） Differential detection of major porcine viral diarrhea viruses A multiplex RT-PCR 2021-07-27发布 广西壮族自治区市场监督管理局 发布 2021-08-31实施 前言 本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本文件由广西壮族自治区农业农村厅提出并归口。 本文件由广西畜牧业标准化技术委员会归口。 本文件起草单位：广西壮族自治区动物疫病预防控制中心。 本文件主要起草人：施开创、冯淑萍、刀彦文、陆芳芳、覃艳琼、加素洁、陆文俊、莫胜、李车。 1 范围 2 规范性引用文件 3 术语和定义 4 缩略语 5 材料准备 6 操作方法 6.1 操作环境 6.2 待检样品处理 6.3 待检样品总RNA提取 6.4 RT反应 6.5 PCR扩增 6.6 阴性及阳性对照 6.7 扩增产物凝胶电泳检测 7 结果判定 附录A（规范性）引物序列、扩增片段及结果判定 附录B（规范性）重组质粒标准品制备 前言补充说明 本文件适用于猪主要病毒性腹泻病毒的多重RT-PCR鉴别检测方法的建立与应用，包括样品处理、RNA提取、反转录、PCR扩增及结果判定等步骤。