ICS11.220 B41
安徽省地方标准
DB34/T1940-2013
鸡传染性喉气管炎PCR检测技术规程
Technical regulation for detection of Chicken Infectious Laryngotracheitis by PCR

前言
本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由安徽省农业委员会提出。本标准起草单位：安徽农业大学动物科技学院、安徽省动物疫病预防与控制中心。本标准主要起草人：王桂军、朱良强、耿照玉、占松鹤、汪彤、江定丰、魏建忠、潘玲、陈静、何长生、杨德康、栗新、吴保谊。

1 范围
本标准规定了应用聚合酶链反应（PCR）方法检测鸡传染性喉气管炎，包括样品的采集、样品处理、试验材料、操作程序和结果判定等。本标准适用于临床鸡传染性喉气管炎的检测和诊断。

2 试验材料

2.1 特异性引物
根据ILTV的TK基因序列设计一对引物，序列如下：
上游引物A1：5'-GGGAAACTTGAATGTCGGGAG-3'
下游引物A2：5'-TGGATTATACGCCGTGCCTGT-3'
扩增DNA片段大小为329 bp，引物使用浓度为50 mmol/L。

2.2 试剂

2.2.1 DNA提取试剂
消化缓冲液：10 mmol/L Tris-Cl（pH 8.0），0.1 mmol/L EDTA（pH 8.0）
10% SDS
蛋白酶K（20 mg/mL）
苯酚
氯仿
无水乙醇
75%乙醇

2.2.2 PCR试剂
2×Taq PCR Master Mix试剂
特异性引物
阳性对照：ILT活疫苗（含鸡传染性喉气管炎K317株病毒）

2.2.3 电泳试剂
溴化乙锭
琼脂糖（电泳级）