ICS 65.120
B 46

山东省地方标准
DB37/T 3629—2019

饲料中氟虫晴的测定
液相色谱-串联质谱法

2019-07-23 发布
2019-08-23 实施
山东省市场监督管理局

前言

本标准按照 GB/T 1.1—2009 给出的规则起草。
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。
本标准由山东省畜牧兽医局提出并监督实施。
本标准由山东省畜牧业标准化技术委员会归口。
本标准负责起草单位：山东省饲料质量检验所，青岛市华测检测技术有限公司。
本标准主要起草人：张芸、刘涛、刘雪芹、孙延军、莫贞峰、李斌、李俊玲。

1 范围
本标准规定了饲料中氟虫晴的测定方法。
本标准适用于配合饲料、浓缩饲料、添加剂预混合饲料和植物源饲料原料中氟虫晴的测定。
本标准氟虫晴的检出限为 0.002 mg/kg，定量限为 0.005 mg/kg。

2 规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法
GB/T 20195 动物饲料：试样的制备

3 原理
样品用乙腈提取，经 C18 固相萃取柱、液液分配净化后，液相色谱-串联质谱仪测定，外标法定量。

4 试剂或材料
除非另有规定，仅使用分析纯试剂。
4.1 水：GB/T 6682，一级。
4.2 甲醇：色谱纯。
4.3 乙腈：色谱纯。
4.4 乙酸铵：色谱纯。
4.5 甲酸：色谱纯。
4.6 80% 乙腈水溶液：将 80 mL 乙腈与 20 mL 水混合均匀。
4.7 80% 甲醇水溶液：将 80 mL 甲醇与 20 mL 水混合均匀。
4.8 0.1% 甲酸水溶液（含 4 mmol/L 乙酸铵）：称取 0.308 g 乙酸铵于适量水中，准确加入甲酸 1 mL，用水定容至 1000 mL。
4.9 氟虫晴标准储备液（1 mg/mL）：称取氟虫晴对照品（CAS：120068-37-3，纯度不低于 98.7%）10 mg（准确至 0.01 mg）于 10 mL 棕色容量瓶中，用甲醇（4.2）溶解定容。-18℃ 避光保存，有效期为 1 年。
4.10 氟虫晴标准工作液 I（100 μg/mL）：准确移取氟虫晴标准储备液（4.9）1 mL 于 10 mL 棕色容量瓶中，用甲醇稀释定容。2～8℃ 保存，有效期为 1 个月。
4.11 氟虫晴标准工作液 II（1 μg/mL）：准确移取氟虫晴标准工作液 I（4.10）0.1 mL 于 10 mL 棕色容量瓶中，用甲醇稀释定容。2～8℃ 保存，有效期为 1 个月。
4.12 C18 固相萃取柱：1000 mg/6 mL，或性能相当者。
4.13 微孔滤膜：0.22 μm，有机系。

5 仪器设备
5.1 液相色谱-串联质谱仪：配电喷雾离子源（ESI）。
5.2 电子天平：感量 0.0001 g 和 0.01 mg。
5.3 旋涡混合器。
5.4 离心机：转速不低于 10000 r/min。
5.5 固相萃取装置。
5.6 超声波振荡器。
5.7 氮吹仪。

6 样品
按 GB/T 20195 制备样品，至少 200 g，粉碎过 0.42 mm 孔径的分析筛，充分混匀，装入磨口瓶中避光保存备用。

7 试验步骤

7.1 提取
平行做两份试验。称 2 g（准确至 0.01 g）样品于 50 mL 离心管，准确加入 25 mL 乙腈（4.3），振荡提取 20 min，4500 r/min 离心 5 min，取上层清液 2.5 mL 于 15 mL 的离心管，加入 0.5 mL 水，涡旋混匀待用。

7.2 净化
C18 固相萃取柱分别用 6 mL 乙腈和 6 mL 水活化。接收加载液于 50 mL 离心管中。待固相萃取柱内近自然滴干时，再加入 12 mL 80% 乙腈水（4.6），并同时接收于上述离心管中。加入约 1.5 g NaCl 使上述溶液饱和，振荡，4500 r/min 离心 5 min，取上层乙腈层，氮吹浓缩至近干。准确加入 4 mL 80% 甲醇水（4.7）溶液定容，过 0.22 μm 滤膜，待测。

7.3 标准工作曲线的制备
准确量取适量标准工作液，用 80% 甲醇水溶液（4.7）稀释成浓度分别为 0.1、0.2、0.5、1.0、5.0 μg/L 的标准溶液，现用现配，供液相色谱-串联质谱仪测定。对于基质效应较大的样品，采用基质空白溶液配制标准溶液进行定量。

7.4 仪器测定
7.4.1 液相色谱参考条件
色谱柱：BEH C18 柱，长 50 mm，内径 2.1 mm，粒径 1.7 μm，或性能相当者。
柱温：40℃。
流速：0.3 mL/min。
进样量：1 μL。
流动相：A 为甲醇（4.2）；B 为 0.1% 甲酸水溶液（4.8）。
梯度洗脱条件见表1。