ICS 备案号：16719-2005 DB 四川省地方标准 DB51/T468—2005 猪肝中维吉尼亚霉素残留检测方法 高效液相色谱（HPLC）法 Determination of Virginimycin Residues in Pig Liver by High Performance Liquid Chromatography 2005-03-03发布 四川省质量技术监督局 2005-06-01实施 发布 DB51/T468—2005 前言 维吉尼亚霉素是一种广谱型抗生素药物。为了规范我省无公害畜产品猪肉的生产和销售过程，保障人民的身体健康，维护生产者、经营者和消费者的合法权益，在总结国内外相关标准的基础上，制定了用高效液相色谱法测定动物可食性组织中维吉尼亚霉素残留量的标准。本标准按GB/T1.1—2000《标准的结构和编写规则》和GB/T1.2—2002《标准中规范性技术要求内容的确定方法》进行编制。 本标准附录A为资料性附录。本标准由四川省畜牧食品局提出并归口，由四川省质量技术监督局批准。本标准由四川省兽药残留监控中心负责起草。本标准起草人：杨松沛、彭莉、岳秀英、高岚、熊浩山。 猪肝中维吉尼亚霉素残留检测方法—高效液相色谱（HPLC）法 1 范围 本标准规定了猪肝中维吉尼亚霉素残留量检测的制样和高效液相色谱（HPLC）测定方法。本标准适用于鲜（冻）猪肝中维吉尼亚霉素的残留量检测，检出限为50 μg/kg。 2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T6682—1992 分析实验室用水规则和试验方法 3 制样 3.1 试样的制备 取适量新鲜或冷冻的供试猪肝组织，绞碎并均浆。 3.2 试样的保存 将试样置于-20℃冰箱中贮存备用。 4 测定方法 4.1 方法提要或原理 动物肝组织样品中维吉尼亚霉素的提取采用基质固相扩散技术（MSPD）。即通过样品与填料的混合与研磨过程，使组织细胞破裂，细胞内部的维吉尼亚霉素等扩散进入固定相的键合相中，然后用有机溶剂将其洗脱下来，供高效液相色谱（紫外检测器）测定。 4.2 试剂和材料 以下所用试剂，除特别注明者外，均为分析纯试剂，水为符合GB/T6682规定的二级水。 维吉尼亚霉素对照品（含量不得少于99.0%） 甲醇（色谱纯） 乙腈（色谱纯） 正己烷 乙酸乙酯 磷酸 磷酸二氢钠 乙二醇 维吉尼亚霉素标准储备液：准确称取维吉尼亚霉素对照品100 mg，用甲醇溶解并稀释成浓度为1 mg/mL的储备液，置-20℃冰箱中保存，有效期3个月。临用前用甲醇稀释成适宜浓度的标准工作液。 磷酸盐缓冲液（0.01 mol/L）：称取磷酸二氢钠1.56 g，用水稀释至1000 mL，用磷酸调节至pH 4.0。 4.3 仪器和设备 高效液相色谱仪（配紫外检测器） 离心机 固相萃取装置（配考克阀） 分析天平（感量0.0001 g） 天平（感量0.01 g） 旋转蒸发器 振荡器 匀浆机 涡旋混合器 微孔滤膜（0.45 μm） 实验室常用仪器和设备 4.4 测定步骤 4.4.1 试样的制备 取绞碎或匀浆后的供试样品作为供试试样。 4.4.2 提取和净化 称取约2 g填料于玻璃研钵中，加入0.5 g匀浆后的肝脏试料，用研杆轻轻研磨30 s使其混合均匀，装入10 mL底端垫有一层滤纸的注射器中，用玻璃棒压至4 mL刻度处。用8 mL正己烷淋洗，抽干后弃去正己烷淋洗液，再用乙酸乙酯8 mL洗脱（淋洗、洗脱流速控制在5秒1滴）。乙酸乙酯洗脱液加入20 μL乙二醇，在40℃水浴上用氮气吹至近干，用180 μL流动相溶解残余物，经0.45 μm微孔滤膜过滤，供高效液相色谱测定。 4.4.3 标准曲线的制备 准确量取适量维吉尼亚霉素标准工作溶液，用流动相稀释成浓度为0.025、0.05、0.1、0.3、0.5、1.25、2.5 μg/mL的系列标准溶液，供高效液相色谱测定。 4.4.4 测定 4.4.4.1 色谱条件 色谱柱：Waters C18（5 μm，4.6 mm×25 cm），或相当者。流动相：磷酸盐缓冲液等。