DB15/T3037-2023 向日葵主要种传病原真菌室内检测技术规程 Technical code of practice for indoor detection of main species-borne pathogenic fungi in sunflower seeds 发布机构：内蒙古自治区市场监督管理局 发布日期：2023-05-11 实施日期：2023-06-11 前言 本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》起草。本文件由内蒙古自治区农牧厅提出，并由内蒙古自治区农业标准化技术委员会（SAM/TC20）归口。本文件起草单位包括内蒙古农业大学、内蒙古自治区农牧业技术推广中心。主要起草人包括张之为、萨其仍贵、张键、张文兵、韩升才、杨佳乐、张立华、乌恩、高红宇、仇凯、王颖、吕明举、赵素梅、张智芳、段钧雷、杜超、刘佳、阿乐达日喜、薛青青。 1 范围 本文件规定了向日葵种子携带真菌的室内检测和鉴定技术，适用于室内进行向日葵种子黄萎病、枯萎病和黑斑病病原菌的检测。 2 规范性引用文件 本文件没有规范性引用文件。 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 向日葵种子样本 用于检测的向日葵种子来自市场上销售的不同品种。每个品种随机取100粒种子。 5 向日葵种子带真菌率的检测与鉴定 5.1 种子真菌带菌率的检测 每个向日葵品种选择100粒饱满的种子。将种子外壳剥去，取出籽仁，放入蒸馏水中浸泡24小时，用镊子剥下皮。种皮用70%乙醇浸泡1分钟，再用无菌水漂洗两次，每次1分钟。将种皮置于灭菌滤纸上晾干后，放在新鲜制备的MNP-10选择性培养基上培养，培养条件为24±2℃，每皿放置10个种皮。菌落出现后计数，统计种子带菌率。计算公式如下： X = (A/B) × 100% 式中： X 种子带菌率； A 带菌的种子数； B 供试种子总数。 5.2 种皮携带真菌的形态学鉴定 将菌落转移到新的PDA培养基上，利用稀释梯度法进行单孢纯化。观察纯化菌株的菌落形态，并在显微镜下进行初步形态学鉴定。向日葵黄萎病、枯萎病及黑斑病病原菌特征见附录B、附录C、附录D。 5.3 种皮携带真菌的分子生物学鉴定 按照分子生物学方法对纯化菌株进行鉴定，具体实验步骤和方法可参考相关技术文献。