DB37/T4044—2020
禽腺病毒4型荧光定量PCR检测方法
Real-time PCR assay for the detection of fowl adenovirus serotype 4

发布日期：2020-07-09
实施日期：2020-08-09
发布单位：山东省市场监督管理局

【前言】
本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。本标准由山东省畜牧兽医局提出并组织实施。本标准由山东省畜牧业标准化技术委员会归口。本标准起草单位：山东省农业科学家禽研究所。
本标准主要起草人：孟凯、吴家强、袁小远、宋敏训、张玉霞、杨金兴、艾武、元丽红。

1 范围
本标准规定了禽腺病毒4型（FAdV-4）荧光定量PCR检测方法。本标准适用于鸡咽喉和泄殖腔拭子及肝脏组织中FAdV-4的检测。

2 规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法

3 试验原理
实时荧光定量PCR检测是在PCR反应体系中，除采用特异的引物外，还加入了与DNA双链非特异性结合的SYBR Green I荧光染料。当它与DNA双链结合时，发出荧光；从DNA双链上释放出来时，荧光信号急剧减弱。随着PCR反应的进行，每经过一个循环，收集一次荧光强度信号，这样就可以通过荧光强度变化监测产物量的变化，从而得到一条荧光扩增曲线。

4 试剂或材料
除非另有说明，在分析中仅使用分析纯的试剂，水为GB/T 6682规定的一级水。
4.1 10×磷酸盐缓冲液：pH值7.2。
4.2 研钵。
4.3 病毒DNA提取试剂盒。
4.4 SYBR Green I qPCR混合物。
4.5 阳性对照：浓度为1.0×10^6 拷贝/μl的阳性质粒；阴性对照：水。
4.6 DEPC水。

5 仪器设备
5.1 微量可调移液器：最大量程为10μL、20μL、100μL、1000μL。
5.2 台式低温高速离心机：最高转速16000r/min。
5.3 分析天平：精度为0.01g。
5.4 荧光定量PCR仪：温度范围4.0℃～99.9℃。
5.5 冰箱：规格为4℃和-20℃。
5.6 二级生物安全柜。