DB34/T 2515-2015
猪流行性腹泻病毒RT-PCR检测方法
RT-PCR assay for porcine epidemic diarrhea virus

发布日期：2015-11-10
实施日期：2015-12-10
发布单位：安徽省质量技术监督局

前言
本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则编写。本标准由安徽省农业标准化委员会归口。本标准由安徽省农业科学院畜牧兽医研究所提出。本标准起草单位：安徽省农业科学院畜牧兽医研究所。
本标准起草人：潘孝成、张丹俊、赵瑞宏、沈学怀、周学利、胡晓苗、戴银、侯宏艳、李贺侠、张宁、何国荣、周德权、王庆。

1 范围
本标准规定了猪流行性腹泻病毒（porcine epidemic diarrheavirus, PEDV）RT-PCR检测方法及其技术要求。
本标准适用于猪肠内容物、粪便以及细胞培养物中PEDV核酸的检测。

2 缩略语
下列缩略语适用于本文件。
PEDV：猪流行性腹泻病毒（porcine epidemic diarrheavirus）
PCR：聚合酶链式反应（polymerase chain reaction）
RT-PCR：反转录聚合酶链式反应（reverse transcription-polymerase chain reaction）
RNA：核糖核酸（ribonucleic acid）
DEPC：焦炭酸二乙酯（diethyl pyrocarbonate）
Taq酶：Taq DNA聚合酶（Taq DNA polymerase）
dNTP：脱氧核糖核苷三磷酸（deoxyribonucleoside triphosphate）
M-MLV：莫洛尼氏鼠白血病病毒（moloney murine leukemia virus）
PBS：磷酸缓冲液（phosphate buffer solution）
TAE：Tris-乙酸电泳缓冲液（Tris-Acetate-EDTA buffer）
EB：溴化乙锭（ethidium bromide）

3 原理
PEDV是一种RNA病毒。
根据PEDV保守基因序列设计特异性引物，通过反转录反应产生cDNA，cDNA作为PCR模板，在DNA聚合酶的作用下，通过变性、退火、延伸等循环过程实现目标片段的扩增。

4 仪器
4.1 PCR仪（扩增仪）
4.2 台式低温高速离心机
4.3 电泳仪
4.4 凝胶成像系统
4.5 冰箱
4.6 微波炉
4.7 分析天平