饲料中呋喃唑酮、喃它酮、呋喃西林、呋喃妥因的测定——高效液相色谱法 DB31/T497—2010 本标准规定了饲料中呋喃唑酮、喃它酮、呋喃西林、呋喃妥因等四种硝基呋喃类药物的高效液相色谱检测方法。适用于配合饲料、浓缩饲料、顶混合饲料中这些药物的测定。方法定量限为0.5μg/g。 1 范围 本标准规定了饲料中呋喃唑酮、喃它酮、呋喃西林、呋喃妥因四种硝基呋喃类药物的高效液相色谱法测定方法。适用于配合饲料、浓缩饲料、顶混合饲料中的检测。 2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其最新版本（包括所有修改单）适用于本标准；凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T14699.1 饲料采样方法 3 原理 饲料样品以少量水湿润，经甲醇和丙酮混合液提取，提取液浓缩后，经混合型阳离子固相萃取柱净化后，供液相色谱检测。 4 试剂和材料 除非方法另有规定，试剂均为分析纯，实验室用水符合GB/T6682中二级水的规定。 4.1 乙腈：色谱纯 4.2 甲醇：色谱纯 4.3 甲酸：色谱纯 4.4 盐酸：分析纯 4.5 酯酸铵：分析纯 4.6 提取液：甲醇和水按1:1体积配比 4.7 对照品：呋喃唑酮、呋喃它酮、呋喃西林、呋喃妥因，纯度≥94% 5 仪器和设备 5.1 高效液相色谱仪：配有紫外检测器或二极管阵列检测器 5.2 分析天平：感量0.1mg和0.01g各一台 5.3 离心机：最大离心力不低于5850g 5.4 超声波发生器：功率不低于250W 5.5 粉碎机 5.6 旋转蒸发仪 6 样品制备 以下操作过程应避免光线直射。 6.1 试样的制备 按GB/T14699.1要求选取有代表性的饲料样品，经粉碎机粉碎后，过孔径为0.2mm的标准筛，混匀后，装入清洁容器内保存。 6.2 提取 称取粉末状样品2.0g（精确到0.01g），加入5mL水润湿，再加入提取液20.0mL，超声提取10min，离心5min（离心力为5850g），倒出上清液。再加入提取液20.0mL重复提取一次，合并上清液，量取20.0mL于50℃旋转蒸发浓缩至近于干，加入2.0mL 0.2%甲酸溶液混匀后备用。 6.3 净化 取混合型阳离子交换小柱，用3mL甲醇和3mL水淋洗后加入用液，再依次用3mL 0.1 mol/L的盐酸溶液和3mL 20%甲醇水溶液洗柱，最后用3mL 5%氨水甲醇溶液洗脱，洗脱液蒸干（50℃）后用1.0mL流动相溶解，经0.22μm滤膜过滤后供液相色谱仪分析。 7 液相色谱法测定 7.1 液相色谱条件 a) 色谱柱：C18，150mm×2.1mm，粒径3.5μm或相当者 b) 柱温：30℃ c) 流速：0.2mL/min