ICS 67.060 X 04 备案号：54197-2017 DB22 吉林省地方标准 DB22/T 2520—2016 养殖鱼中喹诺酮类药物残留量的测定 高效液相色谱-串联质谱法 Determination of quinolones residues in cultured fish HPLC-MS/MS method 2016-12-09 发布 吉林省质量技术监督局 发布 2017-03-01 实施 前言 本标准按照 GB/T 1.1-2009 和 GB/T 20001.4-2015 给出的规则起草。本标准由珲春出入境检验检疫局提出，由吉林省水利厅归口。 本标准起草单位：珲春出入境检验检疫局。 本标准主要起草人：牛悦齐、张琦、翟亚楠、姜佳颖、李品、贾佳、张盼盼、王雪、董晓宁。 1 范围 本标准规定了草鱼、鲢鱼、鳙鱼、鲶鱼中吡哌酸、依诺沙星、诺氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星、沙拉沙星、西诺沙星7种喹诺酮类药物残留量的高效液相色谱-串联质谱测定方法。 本标准适用于草鱼、鲢鱼、鳙鱼、鲶鱼中上述7种喹诺酮类药物残留量的定量和确证。 2 原理 用0.1%冰乙酸-乙腈提取样品中的喹诺酮类药物残留，将离心后的提取液加入PSA、C18吸附剂粉末进行净化，过0.22 μm有机滤膜后，采用高效液相色谱-串联质谱法测定，外标法定量。 3 试剂或材料 除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为 GB/T 6682 规定的二级水。 3.1 无水硫酸镁。 3.2 乙腈（CH₃CN）：色谱纯。 3.3 正己烷（C₆H₁₄）：色谱纯。 3.4 甲酸（HCOOH）。 3.5 冰乙酸（CH₃COOH）。 3.6 0.1%冰乙酸-乙腈溶液：取1.0 mL冰乙酸（3.5）于1000 mL乙腈（3.2）中，混匀。 3.7 1%甲酸溶液：取1.0 mL甲酸（3.4）定容至100 mL容量瓶中。 3.8 样品定容液（V/V，87/13）：1%甲酸溶液（3.7）+乙腈（3.2）。 3.9 吡哌酸（分子式：C11H12N2O3，CAS号：51940-44-4）、依诺沙星（分子式：C15H17FN4O3，CAS号：74011-58-8）、诺氟沙星（分子式：C16H18FN3O3，CAS号：70458-96-7）、环丙沙星（分子式：C17H18FN3O3，CAS号：85721-33-1）、恩诺沙星（分子式：C19H22FN3O3，CAS号：93106-60-6）、沙拉沙星（分子式：C20H22N2O4，CAS号：98105-99-8）、西诺沙星（分子式：C13H10N4O3，CAS号：28657-80-9）标准品，含量≥98.0%。 3.10 标准储备溶液（100.0 μg/mL）：分别准确称取7种喹诺酮类标准品10 mg（精确到0.01 mg），用甲醇溶解并定容于100 mL棕色容量瓶中，配制成浓度为100 μg/mL的标准储备液。0～4 ℃冷藏避光保存，使用前恢复至室温。 3.11 中间混合标准储备液（1.0 μg/mL）：准确移取1.0 mL标准储备溶液（3.10），用基质液定容于100 mL棕色容量瓶中，现用现配。 3.12 基质混合标准工作液（100.0 ng/mL）：准确移取1.0 mL中间混合标准储备液（3.11），用基质液定容于10 mL棕色容量瓶中，现用现配。 3.13 有机相微孔滤膜：0.22 μm。 4 仪器设备 4.1 液相色谱-质谱/质谱仪，配备电喷雾离子源（ESI）。 4.2 均质器：转速不低于8000 r/min。 4.3 组织捣碎机。 4.4 氮吹仪。 4.5 分析天平：感量±0.1 mg。 4.6 超声波清洗机。 4.7 涡旋混合器。 4.8 旋转蒸发仪。 5 样品 5.1 制备 至少取3尾鱼，清洗后去头、骨、内脏，取肌肉等可食部分，样品量约400 g，分为两份，其中一份用于检验，另一份作为留样。将试样用组织捣碎机粉碎并混匀。 5.2 样品的保存 在-18 ℃以下保存，测定时取出混匀后使用。 6 试验步骤 6.1 提取 称取5.0 g试样（精确至0.01 g）于150 mL具塞锥形瓶中，加入50 mL含0.1%冰乙酸的乙腈溶液，分别加入1.0 g无水乙酸钠和2.0 g无水硫酸镁，涡旋振荡1 min，以8000 r/min均质2 min。提取液过滤至250 mL浓缩瓶中，残渣分别用2×10 mL乙腈洗涤2次，合并提取液，在40 ℃以下浓缩至近干。 6.2 净化 在上述浓缩瓶中加入1.0 mL样品定容液，以及100 mg以上的PSA吸附剂和100 mg以上的C18吸附剂，涡旋振荡（后续内容缺失）。