上海市地方标准 DB31/T1512-2024 猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒和猪德尔塔冠状病毒鉴别技术要求 Authentication requirements for porcine epidemic diarrhea virus, porcine transmissible gastroenteritis virus and porcine Deltacoronavirus 2024-10-11发布 上海市市场监督管理局发布 2025-02-01实施 前言 本文件按照GB/T 1.1-2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。 本文件部分内容可能涉及专利，发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由上海市农业农村委员会提出并组织实施。 本文件由上海市畜牧业标准化技术委员会归口。 本文件起草单位：上海市农业科学院、上海市动物疫病预防控制中心。 本文件主要起草人：刘惠莉、陶洁、李本强、程靖华、刘佩红、石迎、林鹭、周锦萍。 1 范围 本文件规定了猪流行性腹泻病毒（PEDV）、猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）和猪德尔塔冠状病毒（PDCoV）鉴别的试剂和仪器设备、样品采集与处置、操作方法、结果判定等技术要求。 本文件适用于猪粪便、肛门拭子和肠组织样品中PEDV、TGEV和PDCoV的核酸检测。 2 规范性引用文件 GB 19489 实验室生物安全通用要求 GB/T 36871 猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒和猪轮状病毒多重RT-PCR检测方法 NY/T 541 兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 缩略语 DEPC：焦碳酸二乙酯（Diethyl Pyrocarbonate） mRT-PCR：多重逆转录聚合酶链式反应（Multiplex Reverse Transcription PCR） PDCoV：猪德尔塔冠状病毒（Porcine Deltacoronavirus） PEDV：猪流行性腹泻病毒（Porcine Epidemic Diarrhea Virus） TGEV：猪传染性胃肠炎病毒（Porcine Transmissible Gastroenteritis Virus） PBS：磷酸盐缓冲液（Phosphate Buffered Saline） TAE：三羟甲基氨基甲烷-乙酸-乙二胺四乙酸缓冲液（Tris-Acetate-EDTA） 5 试剂和仪器设备 5.1 仪器设备 （略） 5.2 试剂 （略） 5.3 材料 （略） 5.4 实验室分区 （略） 6 样品采集与处置 6.1 生物安全 6.2 样品采集和预处理 6.3 样品存放与运输 7 操作方法 7.1 样品RNA的制备 7.2 反转录（cDNA合成） 7.3 RT-PCR检测 7.4 电泳检测 8 结果判定 8.1 试验成立条件 8.2 检测结果判定 附录A（规范性）试验试剂和溶液的配制 包括0.01 mol/L（pH 7.2）PBS、1×TAE、DEPC处理水、1.5%琼脂糖凝胶等配制方法。 附录B（规范性） 附录C（规范性）电泳图及引物扩增结果 附录D（资料性）引物序列及扩增基因序列说明