ICS65.020.99 CCS B16 DB46 海南省地方标准 DB46/T644—2024 咖啡果小分子鉴定技术规程 Technical code for molecular identification of coffee berry borer 2024-09-23发布 海南省市场监督管理局发布 2024-11-01实施 前言 引言 1 范围 2 规范性引用文件 3 术语与定义 4 缩略语 5 咖啡果小蠹基本信息 6 原理 7 主要仪器设备和主要试剂 7.1 主要仪器设备 7.2 试剂 8 分子鉴定操作步骤 8.1 样品处理 8.2 DNA提取 8.3 DNA纯度和浓度测定 8.4 特异性引物使用 8.5 PCR扩增反应 8.6 电泳及测序 9 结果判定 10 样品保存、复核与记录 10.1 样品保存 10.2 复核 10.3 记录 附录A（资料性） A.1 生物学特性 A.2 传播途径 A.3 地理分布 A.4 寄主 附录B（规范性）DNA提取方法及PCR检测方法 B.1 DNA提取方法 B.2 引物序列 B.3 扩增反应体系 B.4 扩增反应条件 B.5 PCR扩增片段电泳结果 B.6 PCR扩增片段测序结果 B.7 结果判定 前言 本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由海南省农业农村厅提出并归口。本文件起草单位：中国热带农业科学院香料饮料研究所。本文件主要起草人：孟倩倩、王政、孙世伟、高圣风、苟亚峰、刘世超、田甜、温思为、薛超。 引言 2019年5月，首次在海南省万宁市兴隆地区咖啡种植园中发现咖啡果小蠹入侵，标本经鉴定确定为咖啡果小蠹，并于2019年6月上报农业农村部。海南地区作为罗布斯塔咖啡主要产区，目前在海南万宁、琼中、琼海等地均发现咖啡果小蠹为害。 依据外部形态学特征对咖啡果小蠹的鉴定，需要昆虫分类专业人员和显微设备才能鉴别，特别是对于卵、幼虫、蛹及特征脱落的残体等样本，存在鉴别难度大、耗时长等问题。鉴于以上原因，特制定本文件，可显著提高咖啡果小蠹检测效率，为咖啡果小蠹的口岸检疫、监测防控提供必要的技术支撑。