ICS 65.150 B50 DB13 河北省地方标准 DB13/T 1358—2011 养殖用水中孔雀石绿快速测定方法 激光拉曼光谱法 The qualitative determination of malachite green in aquiculture water by surface-enhanced laser Raman spectrometry 2011-01-28发布 河北省质量技术监督局 2011-02-28实施 前言 本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。 本标准由河北省质量技术监督局提出并归口。 本标准起草单位：河北省食品质量监督检验研究院、欧普图斯光学纳米科技有限公司、国家果类及农副加工产品质量监督检验中心。 本标准主要起草人：李挥、张敬轩、张会军、张岩、刘春伟、贾茜、范斌、李强、庞坤。 1 范围 本标准规定了利用激光拉曼光谱法快速检测水产品养殖、销售用水或其他水体中微痕量孔雀石绿的定性与定量检测方法。 本标准适用于水产品养殖、销售用水或其他水体中孔雀石绿的激光拉曼光谱法现场快速筛查检测。 本方法对水中孔雀石绿的定量限为5.0 μg/L。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡注日期的引用文件，仅所注日期版本适用本文件。凡不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有修改单）适用本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法（GB/T 6682—2008，ISO 3696:1987，MOD）。 3 原理 试样经高速离心后直接测定。样品中的孔雀石绿分子与表面增强试剂混合后吸附在纳米颗粒表面，其拉曼散射信号可增强10⁶倍以上。使用便携式激光拉曼检测仪通过特征峰自动判别实现定性检测，并通过基线调整和归一化处理结合外标法进行定量分析。 4 试剂与材料 除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水应符合GB/T 6682规定的三级水。 4.1 孔雀石绿标准品：CAS 2437-29-8，纯度大于99%。 4.2 表面增强试剂：OTR201银纳米溶胶或同等产品。 4.3 无机盐凝聚剂：1%氯化钠水溶液。 4.4 无机盐离子促进剂：2%溴化钾水溶液。 4.5 孔雀石绿标准溶液（1000 μg/mL）：准确称取0.1000 g孔雀石绿标准品，用乙腈溶解后定容至100 mL，于4℃避光保存。 5 仪器与设备 5.1 激光拉曼光谱仪。 5.2 高速离心机：转速不低于14000 r/min。 6 分析步骤 6.1 样品采集与保存 取具有代表性的样品，置于棕色瓶中，于2℃～5℃冷藏保存，并在24小时内完成检测。 6.2 样品制备 取1.0 mL待测水样，以14000 r/min离心5 min，取上清液作为待测液。 6.3 仪器参考条件 a）激光功率：200 mW b）积分时间：10 s c）平均次数：2 d）平滑参数：3 6.3.1 定性测定 依次加入0.25 mL表面增强试剂、0.10 mL无机盐凝聚剂、0.25 mL待测液和0.10 mL无机盐离子促进剂，混匀后检测。 根据谱图在435 cm⁻¹（±3 cm⁻¹）、1171 cm⁻¹（±3 cm⁻¹）和1615 cm⁻¹（±3 cm⁻¹）处特征峰进行判断：若同时存在上述特征峰，则判定样品中含孔雀石绿；否则需进一步验证。 6.4 定量测定 对拉曼谱图进行基线调整和归一化处理： （1）进行基线校正； （2）以1171 cm⁻¹（±3 cm⁻¹）特征峰为基准进行归一化； （3）根据标准曲线进行定量分析。 6.5 结果计算 按公式计算样品中孔雀石绿含量： X = (c × V) / m 式中： X——样品中孔雀石绿含量（mg/L）； c——由标准曲线得到的浓度（mg/L）； V——样品定容体积（mL）； m——样品取样体积（mL）。 6.6 允许差 在重复性条件下，两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。 6.7 验证试验 阳性样品需采用相关国家标准方法进行确证。