DB13/T5189.1-2020 天然植物提取物中危害成分检测 第1部分：亚硝酸盐的测定 前言 本标准按照 GB/T 1.1-2009 的规则起草。DB13/T5189《天然植物提取物中危害成分的测定》共分12个部分，本部分为第1部分：亚硝酸盐的测定。本标准由河北省市场监督管理局提出，由河北省食品检验研究院、晨光生物科技集团股份有限公司、石家庄海关技术中心、清河县食品药品检验检测中心起草。主要起草人：史国华、郭美娟、杨清山、张兰天、田丽娜、艾连峰、马新颜。 1 范围 本部分规定了天然植物提取物中亚硝酸盐的测定方法，适用于各类天然植物提取物。 2 规范性引用文件 下列文件对于本标准的应用必不可少。注日期的引用文件仅适用注日期版本；未注日期的引用文件适用其最新版本。GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法。 3 原理 亚硝酸盐采用盐酸萘乙二胺法测定。试样经沉淀蛋白质、除去脂肪后，在弱酸条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化后，再与盐酸萘乙二胺偶合形成紫红色染料，通过紫外分光光度法在538nm处测吸光度，采用外标法测定亚硝酸盐含量。 4 试剂和材料 除非另有说明，所用试剂均为分析纯，水为 GB/T 6682 规定的三级水。 4.1 试剂 - 亚铁氰化钾 [K4Fe(CN)6·3H2O] - 乙酸锌 [Zn(CH3COO)2·2H2O] - 硼酸钠 (NaB4O7·10H2O) - 盐酸 (HCl, 密度 1.19 g/mL) - 对氨基苯磺酸 (C6H7NO3S) - 盐酸乙二胺 (C2H8N2·2HCl) 4.2 试剂配制 - 亚铁氰化钾溶液 (106 g/L)：称取106.0 g亚铁氰化钾，用水溶解至1000 mL。 - 乙酸锌溶液 (220 g/L)：称取220.0 g乙酸锌，用30 mL冰乙酸溶解后加水稀释至1000 mL。 - 饱和硼砂溶液 (50 g/L)：称取5.0 g硼酸钠，溶于100 mL热水中，冷却备用。 - 盐酸 (20%)：量取20 mL盐酸，用水稀释至100 mL。 - 对氨基苯磺酸溶液 (4 g/L)：称取0.4 g，对氨基苯磺酸溶于100 mL 20%盐酸中，混匀，避光保存。 - 盐酸萘乙二胺溶液 (2 g/L)：称取0.2 g，溶于100 mL水中，混匀，避光保存。 4.3 标准品 亚硝酸钠 (NaNO2, CAS 7632-00-0)，基准试剂或具有标准物质证书的亚硝酸盐标准溶液。 4.4 标准溶液配制 - 亚硝酸钠标准溶液 (200 μg/mL)：称取0.1 g亚硝酸钠于干燥恒重下，加水溶解并稀释至500 mL。 - 亚硝酸钠标准使用液 (5.0 μg/mL)：临用前吸取5.50 mL标准溶液，加水稀释至100 mL。 5 仪器和设备 - 天平：感量为1 mg和0.1 mg。 - 恒温干燥箱。 - 分光光度计。 6 试验步骤 6.1 试样提取 称取均匀样品约5 g (精确至0.001 g)，置于250 mL具塞锥形瓶中，加15.5 mL 50 g/L饱和硼砂溶液，再加入约15 mL 70℃水，混匀后在沸水浴中加热15 min，取出置于冷水浴中冷却至室温。将提取液转入200 mL容量瓶，加入5 mL 106 g/L亚铁氰化钾溶液摇匀，再加入5 mL 220 g/L乙酸锌溶液沉淀蛋白质，加水至刻度，混匀并静置30 min，去除上层脂肪，上清液用滤纸过滤，弃去初滤液。