ICS65.020.01 CCSB16 内蒙古自治 区 DB15 地方标准 DB15/T2958—2023 马铃薯黑痣病菌PCR检测方法 Detection ofpathogenic fungus for potato black scurf by PcR method地方标准信息服务平台 2023-04-26发布 内蒙古自治区市场监督管理局 发布 2023-05-26实施 地方标准信息服务平台 前言 范围 2 3 4 5 规范性引用文件 术语和定义 原理 试剂与仪器 5.1试剂， 5.2 溶液配制 5.3 仪器 6操作步骤 6.1对照的设立 6.2样品制备 6.3马铃薯组织样品DNA提取 6.4PCR扩增 琼脂糖凝胶电泳 8 结果 8.1试验成立的条件 目 次 DB15/T2958—2023 II 结果判定 8.2 地方标准信息服务平台 DB15/T2958—2023 前言 本文件按照GB/T1.1一2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。 本文件由内蒙古自治区农牧厅提出。本文件由内蒙古自治区马铃薯标准化技术委员会（SAM/TC40）归口。本文件起草单位：内蒙古自治区产品质量检验研究院、内蒙古中加农业生物科技有限公司、乌兰察布市检验检测中心、内蒙古朱日和镇综合保障和技术推广中心。本文件主要起草人：刘广晶、刘晓权、张之为、高晓娟、包美丽、赵莉、高俊、吕文霞、孙翠翠、王斌、齐桂敏、任玮、孙辉远、侯晓云、赵欣、姜涛、常青、李建青、王勐、徐晓、张利萍、李艺凡、姚婷、梁敏。 地方标准信息服务平台 1范围 马铃薯黑痣病菌PCR检测方法 本文件规定了马铃薯黑患病菌PCR检测方法本文件适用于马铃薯植株茎杆、块茎等组织中黑痣病菌的检测。2规范性引用文件 DB15/T2958—2023 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注口期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件：不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。3.1 马铃薯黑痣病potato black scurf disease由丝核菌属立枯丝核菌（RhizoctoniasolaniKuhn）引起，可通过病薯上或留在土壤中的菌核越冬，带病种薯是远距离传播的主要载体。马铃薯生长期间病菌从土中根系或茎基部伤口侵入，引起发病。主要危害马铃薯芽、茎基部及块茎，会造成马铃薯缺苗断垄，发病严重时将导致植株死亡。该病菌既可侵染马铃薯植杆也上草基部又可侵染地下块茎。在地上茎基部可形成白色霉层，而在地下块茎上则可形成大小数量不等的黑色菌核严重影响马铃薯块茎品质和商品价值。标准信 4原理 本文件采用聚合酶链式反应（PolymeraseChanReon，PCR）方法检测马铃薯黑痣病菌。其原理是：以马铃薯黑痣病菌ITS序列区设计特异性引物，以基因组为模板，在TaqDNA聚合酶的作用下进行PCR扩增，根据PCR扩增结果判断该样品中是否含有目的，从而达到鉴定马铃薯黑痣病菌的目的。 5试剂与仪器 5.1试剂 5.1.1以下所有试剂，除另有规定外，均使用分析纯试剂；水为符合GB/T6682中规定的一级水。5.1.2植物基因组提取试剂盒、50XTAE电泳缓冲液、2XTagPCRMasterMix、无水乙醇、溴化乙锭、DNAMarker、6xDNALoadingBuffer等均从试剂公司购买。1