内蒙古自治区地方标准
DB15/T1921—2020
马铃薯黄萎病田间抗性鉴定技术规程 Technical Regulation for Resistant Identification to Potato Verticillium Wilt in Field
2020-06-28 发布
2020-07-28 实施
内蒙古自治区市场监督管理局

前言
本标准按照 GB/T 1.1-2009 给出的规则起草，由内蒙古农业大学提出。本标准由内蒙古自治区马铃薯生产与种植标准化技术委员会（SM/TC42）归口。本标准起草单位：内蒙古农业大学、内蒙古赤峰市喀喇沁旗农牧局植保植检站、内蒙古自治区农牧业科学院、河北省农林科学院植物保护研究所、中国农业大学。本标准主要起草人：周洪友、王东、邱廷艳、孟焕文、赵远征、马平、张力群、李社增。

1 范围
本标准规定了马铃薯黄萎病田间抗性鉴定的前期准备、鉴定程序及品种抗性水平划分等技术内容。本标准适用于马铃薯科研与生产中对马铃薯黄萎病的抗性鉴定和评价。

2 规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
NY/T 2952 棉花黄萎病抗性鉴定技术规程。

3 前期准备
3.1 培养基制备
PDA 培养基：马铃薯 200g、葡萄糖 20g、琼脂粉 18g，定容至 1000mL；121℃ 高压湿热灭菌 25min，冷却至室温备用。
麦麸培养基：将麦麸与水按质量比 1:1 搅拌均匀后，装入 1000mL 三角瓶中，每瓶装入 100g；121℃ 高压湿热灭菌 30min，冷却至室温备用。
3.2 菌种制备
选用内蒙古马铃薯黄萎病发病植株上分离获得的致病菌株。将保存的黄萎病菌株在 PDA 平板进行活化。25℃ 条件下，培养 5d～7d 后，待菌丝长到培养基的 3/4 时，用打孔器在菌落边缘打取直径 5mm 的菌饼，接入灭菌的麦麸培养基中，黑暗条件下培养 15d。
3.3 对照品种选择
3.4 病圃的建立
选择多年未种植马铃薯的地块作为病圃，面积 1 亩，四周进行隔离。将培养好的病菌麦麸培养物按 45g/m² 均匀地撒入地表，翻耕混匀（参考 NY/T 2952）。

4 鉴定程序
4.1 鉴定种薯
鉴定马铃薯品种的种薯为原原种。
4.2 鉴定种薯的种植
鉴定种薯种植在人工病圃中，每小区 4 行、行长不少于 5m、小区株数不少于 50 株。小区随机排列，每个品种重复 3 次。
4.3 田间管理
各项田间管理措施一致。
4.4 病情调查
对照品种发病时，根据马铃薯地上部黄萎病发病程度分级标准（表 1），计算病情指数。
马铃薯收获后，切开马铃薯块茎的脐部，根据马铃薯块茎黄萎病发病程度分级标准（表 2），计算病情指数。
病情指数 DI = [Σ(各级病株数 × 该病级代表数值) / (调查总株数 × 发病最高级代表数值)] × 100 (1)
病情指数 DI = [Σ(各级病薯数 × 该病级代表数值) / (调查总薯数 × 发病最高级代表数值)] × 100 (2)

表 1 马铃薯地上部黄萎病发病程度分级标准
级别 | 代表数值 | 发病程度描述
1 | 0 | 健株，叶片无症状
2 | 1 | 病株叶片 25% 以下出现症状，叶肉变为淡黄色或不规则形的黄色病斑
3 | 2 | 病株叶片 25%～50% 表现症状，病斑颜色大部分变成黄色或黄褐色，叶片边缘略有卷枯
4 | 3 | 病株叶片 50% 以上出现症状，有少数叶片脱落
5 | 4 | 全株叶片发病，多为枯萎斑，叶片有的脱落成光杆，以致整株枯死

表 2 马铃薯块茎黄萎病发病程度分级标准
级别 | 代表数值 | 病程度描述
1 | 0 | 健薯，块茎无症状
2 | 1 | 病薯切开块茎脐部后维管束出现点状褐变
3 | 2 | 病薯切开块茎脐部后维管束出现条斑状褐变
4 | 3 | 病薯切开块茎脐部后维管束出现条斑状褐变，并持续扩大形成病环
5 | 4 | 病薯切开块茎脐部后维管束环状褐变向内扩展，整个病薯中心褐变

5 品种抗性水平划分
依据各品种的病情指数对不同来源品种抗性级别进行划分，划分标准如表 3。
表 3 马铃薯对黄萎病抗性分级标准
病情指数 DI | 抗性级别
0 | 免疫 (Immune)
0 < DI < 10.0 | 高抗 (High Resistant)
10.0 $le$ DI < 20.0 | 抗病 (Resistant)
20.0 $le$ DI < 35.0 | 耐病 (Tolerant)
DI $ge$ 35.0 | 感病 (Sensitive)