ICS 65.020.20
CCS B 05
DB23
黑龙江省地方标准
DB23/T 2932—2021
固体废弃物堆肥处置中抗生素抗性基因检测技术规范

2021-07-26 发布
2021-08-25 实施
黑龙江省市场监督管理局 发布


前言

本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。
本文件由黑龙江省生态环境厅提出并归口。
本文件起草单位：东北农业大学、黑龙江禾煦丰生态科技有限公司。
本文件主要起草人：魏自民、张旭、吴俊秋、解新宇、史明子、齐海石、吴迪、陈晓蒙、宋新宇、杨红宇、郑广仁、陈宇峰、张茹菊、王丽琴、赵美杨、温铁军。


固体废弃物堆肥处置中抗生素抗性基因检测技术规范

1 范围

本文件规定了固体废弃物堆肥处置中抗生素抗性基因检测的一般要求、固体废弃物堆肥处理场选址及布局、堆肥处理过程、堆肥处理中抗生素抗性基因检测流程以及固体废弃物堆肥处理后的利用要求。
本文件适用于黑龙江省行政区域内固体废弃物堆肥处置过程中抗生素抗性基因的检测。

2 规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

3 术语和定义

GB/T 19489 界定的以及下列术语和定义适用于本文件。

3.1
抗生素抗性基因 antibiotic resistance gene (ARGs)
细菌中编码抗生素耐药性蛋白或介导耐药性的基因。

3.2
堆肥 compost
在自然或人工控制条件下，利用自然界广泛分布的微生物，对有机固体废弃物进行生物分解、稳定化的一种过程，最终产生腐殖质类物质的过程。

4 一般要求

4.1 检测实验室应具备相应的检测能力，人员经过专业培训并持证上岗。
4.2 检测仪器和试剂应符合国家及行业标准要求，定期校准和验证。
4.3 采样应具有代表性，采样数量和方法应符合相关规范规定。

5 固体废弃物堆肥处理场选址及布局

5.1 选址要求
5.1.1 堆肥处理场应位于城市主导风向的下风向。
5.1.2 距居民区、学校、医院等敏感点距离应符合环保卫生防护距离要求。
5.1.3 应有充足的水源和便捷的交通条件。
5.1.4 地质条件应稳定，无地质灾害隐患。

5.2 布局要求
5.2.1 处理场应分区布局，包括原料接收区、预处理区、堆肥发酵区、陈化区、成品堆放区及办公生活区等。
5.2.2 各功能区之间应设置隔离带或围墙，防止交叉污染。
5.2.3 堆肥发酵区应设有除臭设施和渗滤液收集系统。

6 堆肥处理过程

6.1 预处理
对接收的固体废弃物进行筛选、破碎、混合等预处理，去除不可发酵的大块杂质。

6.2 堆肥发酵
6.2.1 初次发酵：将预处理后的物料堆制成立方体或圆柱体堆肥堆，控制含水率、碳氮比和通风条件，进行好氧发酵。
6.2.2 再次发酵：初次发酵结束后，进行翻堆，调整含水率和温度，进行再次发酵，直至堆体温度降至环境温度且稳定。

6.3 陈化
发酵完成的堆肥物料进入陈化区，进行自然陈化，进一步稳定腐殖质含量。

7 堆肥处理中抗生素抗性基因检测流程

7.1 采样
7.1.1 采样点应均匀分布在堆肥堆的不同位置，包括表层、中层和底层。
7.1.2 每个采样点采集土样或堆肥样品，混合后作为混合样。
7.1.3 采样容器应清洁无菌，采样后立即密封并冷藏运输至实验室。

7.2 样品前处理
7.2.1 样品解冻后，在无菌条件下进行均质处理。
7.2.2 按照DNA提取试剂盒说明提取总DNA。
7.2.3 使用紫外分光光度法或荧光定量法检测DNA浓度和纯度。

7.3 检测
7.3.1 采用荧光定量PCR技术检测目标抗生素抗性基因丰度。
7.3.2 设置阳性对照、阴性对照和标准曲线，确保检测结果准确可靠。
7.3.3 记录每个样品的Ct值，计算基因拷贝数或相对丰度。

7.4 结果分析
7.4.1 对检测数据进行统计分析，比较不同处理阶段或不同样品间抗生素抗性基因的差异。
7.4.2 评估堆肥处置过程中抗生素抗性基因的消减效果。
7.4.3 出具检测报告，包括样品信息、检测方法、检测结果及结论。

8 固体废弃物堆肥处理后利用

8.1 堆肥产品应经过检测，确保重金属、病原体、抗生素残留等指标符合相关标准。
8.2 合格堆肥产品可用于土壤改良、园林绿化、农业种植等领域。
8.3 不合格堆肥产品应进行无害化处理或回炉焚烧。