DB36/T1371—2020 马铃薯抗晚疫病鉴定技术规程
Code of Practice for Evaluation of Potato Resistance to Late Blight
发布：2020-12-29
实施：2021-07-01
发布机构：江西省市场监督管理局

前言
本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》起草。部分内容可能涉及专利，发布机构不承担专利识别责任。本文件由江西省农业农村厅提出并归口，起草单位为江西省农业科学院植物保护研究所，主要起草人包括何烈干、邹芬、马辉刚、涂玉琴、王美清、王修慧、朱跃冬、朱业斌、赖金美。

1 范围
本文件规定了江西省马铃薯对晚疫病抗性鉴定的菌株选择、育苗管理、鉴定方法、病情调查和抗性评价标准等技术要求。本规范适用于江西省马铃薯品种（系）的抗性鉴定及评价。

2 规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。注日期的引用文件仅该日期对应的版本适用于本文件；未注日期的引用文件，其最新版本（包括所有修改单）适用于本文件。
GB/T18133
GB/T29379

3 术语和定义
3.1 马铃薯晚疫病 (Potato late blight)
由疫霉属致病疫霉 Phytophthora infestans (Mont.) de Bary 侵染马铃薯引起的一种流行性病害，具体见附录 A。
3.2 生理小种 (Physiological race)
病原物种内或专化型内在形态上无差异，但在寄主不同品种上具有显著致病性差异的类群。
3.3 接种体 (Inocula)
用于接种以引起病害的病原物或病原物的一部分。
3.4 抗性评价 (Evaluation of resistance levels)
根据采用的技术标准判别植物对特定病害反应程度和抵抗水平的描述。

4 仪器与试剂耗材
4.1 仪器
超净工作台、高压灭菌锅、恒温培养箱、冰箱、显微镜、移液器、烧杯、漏斗、试管、培养皿、打孔器等。
4.2 试剂耗材
燕麦片、黑麦、琼脂粉、酒精、纱布、滤纸、育苗盆、营养钵等。

5 抗性鉴定
5.1 育苗
试验选在远离晚疫病发生的地带进行。供试马铃薯品种选择纯度高、新鲜、无病虫、无损伤的脱毒马铃薯，将每个品种的脱毒无菌试管苗于 MS 培养基中扩繁 15 株以上，在 23℃～25℃ 中光/暗 12h/12h 交替，光照强度 2000～3000 Lx 培养 20 天后，移栽至装有蛭石混合羊粪的育苗盆或营养钵中，常规水肥管理，60 天后用于接种鉴定。
5.2 鉴定对照材料
试验中设对照感病品种，选用 2～3 种当地历年易感晚疫病的马铃薯品种，育苗管理同 5.1。
5.3 病原物
5.3.1 培养基制备
黑麦培养基：取 50 g 黑麦种子浸泡 24～36 小时，捣碎后 55～60℃ 水浴 1～2 小时，过滤，上清液补水至 1 L，加入琼脂粉 15 g、番茄汁 100 mL 和碳酸钙 0.1 g，121℃ 高压蒸汽灭菌 20 分钟。
5.3.2 菌株分离及鉴定
从江西露地栽培马铃薯病株中采集病原菌，在黑麦培养基上分离，经形态学鉴定为致病疫霉并回接验证后，置于 10℃ 冰箱保存备用，将培养菌株接种于健康马铃薯叶片或块茎，诱发发病并分离获得致病疫霉菌，纯化后在显微镜下观察孢子囊形态特征。
5.3.3 生理小种选择
选择江西省马铃薯晚疫病菌 2～3 个优势生理小种进行接种。
5.4 接种体制备
5.4.1 培养基制备
燕麦培养基：燕麦片 30 g、琼脂 20 g、去离子水 1000 mL。将燕麦片加入 600 mL 去离子水匀浆加热至 45～50℃，加入融化琼脂的剩余 400 mL 去离子水，121℃ 高压蒸汽灭菌 20 分钟。1% 水琼脂培养基：取 10 g 琼脂于 990 g 蒸馏水或去离子水中，加热溶解后分装，121℃ 高压蒸汽灭菌 20 分钟，灭菌结束后摇匀。