ICS 01.040.67 X 34 DB45 广西壮族自治区地方标准 DB45/T 2143—2020 甘蔗叶中多糖的测定 苯酚-硫酸法 Determination of polysaccharide in sugar cane leaves Phenol-sulfuric acid colorimetry 地方标准信息服务平台 2020-07-24发布 广西壮族自治区市场监督管理局 2020-08-20实施 发布 前言 本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。本标准由广西壮族自治区糖业发展办公室提出并归口。本标准由广西糖业标准化技术委员会归口。本标准起草单位：广西中医药大学、广西大海阳光药业有限公司。 本标准主要起草人：侯小涛、邓家刚、州、社止彩、秦偿降、英大权、和顺利、何支然。 1 范围 本标准规定了甘蔗叶中多糖含量的测定方法——苯酚-硫酸法。本标准适用于所有品种的甘蔗叶中多糖含量的测定。本标准方法的检出限为0.5 mg/kg。本标准方法的线性范围为0.01 mg/mL～0.06 mg/mL。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件；凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682—2008 分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 甘蔗叶多糖 指甘蔗叶中以β-D葡聚糖或其他碳水化合物为主链的高分子化合物。 4 方法提要 在浓硫酸的作用下，多糖水解成单糖，并迅速脱水生成糖的衍生物，与苯酚反应生成橙黄色溶液，在485 nm处有特征吸收，通过与标准品比较进行定量。 5 试剂和材料 5.1 试验用水：应符合GB/T 6682—2008的规定。 5.2 硫酸（H2SO4）：分析纯，ρ=1.81 g/mL。 5.3 无水乙醇（C2H5OH）：分析纯。 5.4 苯酚（C6H5OH）：分析纯，重蒸馏。 5.5 80%乙醇溶液。 5.6 D-无水葡萄糖对照品，使用前应于105 ℃恒温烘干至恒重。 5.7 80%苯酚溶液：称取80 g苯酚溶于水中，转移至100 mL棕色容量瓶并定容，摇匀后置冰箱中储存备用。 5.8 5%苯酚溶液：吸取5 mL 80%苯酚溶液，加水稀释至75 mL，混匀，现用现配。 5.9 0.1 mg/mL标准葡萄糖溶液：取100 mg D-无水葡萄糖，精密称定，溶于水并定容至1000 mL容量瓶中，混匀后置4 ℃冰箱中储存备用。 6 仪器和设备 6.1 紫外/可见分光光度计。 6.2 分析天平，感量0.1 mg。 6.3 超声波提取器。 6.4 涡旋振荡器。 6.5 离心机，转速4000 r/min。 7 样品制备与保存 7.1 试样制备 将采集的甘蔗叶清洗干净，去除泥沙等杂质，切成小段，在恒温干燥箱中60 ℃下烘干，粉碎后过60目筛处理，混合均匀。 7.2 样品保存 试样于18 ℃以下冰箱中保存。制样和样品保存过程中，应防止样品污染和待测物损失。 8 测定步骤 8.1 样品处理 取样品粉末约1 g，精密称定，置于100 mL锥形瓶中，按料液比1:30加入无水乙醇，置超声提取器中提取40 min，然后以4000 r/min离心10 min，弃去上清液；残渣加50 mL水，超声提取3次，每次30 min，冷却后进行真空抽滤，合并3次滤液，混匀后移取至25 mL容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀，即得样品测定液。 8.2 绘制标准曲线 分别精密量取0.1 mg/mL葡萄糖标准溶液0 mL、0.1 mL、0.2 mL、0.3 mL、0.4 mL、0.5 mL、0.6 mL置于具塞试管中，各加水补至1.0 mL，然后分别加入1 mL 5%苯酚溶液和3 mL硫酸，振荡混合后置水浴中加热10 min，冷却至室温后以试剂空白为参比溶液，在485 nm处测定吸光度。以葡萄糖溶液浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。 8.3 比色测定 精密吸取样品测定液1.00 mL于具塞试管中，按8.2步骤操作，测定吸光度，重复3次，取吸光度平均值。 8.4 空白试验 与试样测定平行进行，取相同量的所有试剂，采用相同分析步骤，但不加试样。 9 结果计算 样品中多糖含量以质量分数w计，单位以克每百克（g/100 g）表示，按式进行计算。