本标准规定了化学品 快速生物降解性：密闭瓶法试验的方法概述、试验准备、试验程序、质量保证与质量控制、数据与报告。本标准适用于测试可溶于水的或难溶于水的、不挥发性、挥发性或有吸附作用的化学品的快速生物降解性。 GB/T 21831-2008 化学品 快速生物降解性 密闭瓶法试验 GB/T21831-2008 标准下载解压密码：www.bzxz.net
本标准规定了化学品　快速生物降解性：密闭瓶法试验的方法概述、试验准备、试验程序、质量保证与质量控制、数据与报告。 本标准适用于测试可溶于水的或难溶于水的、不挥发性、挥发性或有吸附作用的化学品的快速生物降解性。
本标准等同采用经济合作与发展组织(OECD)化学品测试导则No.301D(1992年)《密闭瓶试验》(英文版)。
本标准做了下列编辑性修改:
---将计量单位改为我国法定计量单位。
本标准的附录A、附录B、附录C、附录D 和附录E 为资料性附录。
本标准由全国危险化学品管理标准化技术委员会(SAC/TC251)提出并归口。
本标准负责起草单位:环境保护部化学品登记中心。
本标准参加起草单位:环境保护部南京环境科学研究所、上海市环境科学研究院、沈阳化工研究院安全评价中心。
本标准主要起草人:孙锦业、刘纯新、侯琳、刘济宁、石利利、沈根祥、杨海荣。

ICs 13.300,3.020.40
中华人民共和国国家标准
GB/T21831--2008
化学品
快速生物降解性：
密闭瓶法试验
Chemicals--Ready biodegradability : Closed bottle test2008-05-12发布
中华入民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
2008-09-01实施
GB/T21831--2008
本标推等同采用经济合作与发展组织（OECD)化学品测试导则No.301D(1992年）《密闭瓶试验》(英文版)。
本标准做了下列编辑性修改：
将计量单位改为我国法定计量单位。本标雅的附录 A.附录 B,附录 C、附录 D和附录 E为资料性附录本标准由全国危险化学品管理标准化技术委员会(SAC/TC251)提出并归口。本标准负贡起草单位：环境保护部化学品登记中心。本标准参加起草单位：环境保护部南京环境科学研究所、上海市环境科学研究院、沈阳化工研究院安全评价中心。
本标准主要起草人：孙锦业、刘纯新、侯琳、刘济宁、石利利、沈根样、杨海荣。I
1范围
化学品快速生物降解性：
密闭瓶法试验
CB/T21831—2008
本标准规定了化学品快速生物降解性：密闭瓶法试验的方法概述、试验准备、试验程序、质量保证与质量控制、数据与报告。
本标准适用于测试可溶于水的或难溶于水的、不挥发性、挥发性或有吸附作用的化学品的快速生物降解能。
2术语和定义
下列术语和定义适用于本标推。2.1
快速生物降解性readybiodegradability受试物在限定时间内与接种物接触表现出的生物降解能力。2.2
生化需氧量biochemical oxygendermand，BoD微生物分解有机物所消耗氧的量，可表示为每癌克受试物消耗的氧气掌克数（mg/mg）。2.3
化学需氧量chemica!oxygendemand,CoD在强酸并加热条件下，一定受的重骼酸盐氧化水样中还原性物质所消耗氧化剂的量，可表示为每毫克受试物消耗的氧气衰克数（mg/mg）。2.4
理论需氧量theoreticaluxygendemand，ThoD根据分子式计算得到的受试物完全被氧化需要的氧的总量，可表示为每垂克受试物消耗的氧气毫克数（mg/mg）。
停期 Jag phase
试验开始到降解率达到10%的时期。2.6
10-d windo
十天观察期
生物降解率达到10%之后的10d试验时间。2.7
降解期degradationphase
停滞期结束到降解率达到最大降解率的90%的时期。3受试物信息
分子式；
b）水中溶解度；
c）蒸气压：
GB/T 21831-2008
d）结构式：
e）纯度；
f）主要成分组成比例；
g）吸附性；
h）微生物毒性。
4方法简介
4.1原理
通常在含有 2 mg/L~5 mg/L受减物的试验培养基中接种必量的接种物，在恒温避光条件下保持受试物落液完全充满密闭瓶。根据在28d中溶解氧的消耗来计算降凝率。受试物生物降解时接种物校正后以占ThOD或COD的简分数表降解率。消耗的氧量经平行试验空白对照4.2参比物
本标推推荐举胺(新)
说明。
5 试验准
5.1设备
醋酸钠或苯甲酸钠作为参比物。若使用某他参能物，试验报告中应加以a)具塞 BOf瓶(150 mL～3
b）水溶或培
e）烧杯（2
d）溶氧
5.2接种物
5.2. 1接种物选
接种物可以采！
并在运输中保持有
用。接种物最佳用量
(±1℃);
者污水处理
。样品沉
撼接种物滋·
接种物也可采用间
可翻水等步
确定。
5.2.2接种物预处理
活污水的中
如有需要，试验温度下
射接购曝气处理5d ～7d。
5.3试验用水
的二级出水。采集一个新鲜样品清液或滤出液准有氧状态直至悔加入滤出液 0. 1 mL 到 5 mL。。接种物最佳用量应通过预试验使用去除率性物质（妇己的高纯度芸离子水或藏馏永，确保孕机碳含量不得高于受试物浓度的10%，同察列试验使用同一批水。5.4培养基
5.4.1试验培养基贮备液
用分析纯试剂削备下列贮备液：a）磷酸盐缓冲液：称取8.50g磷酸二氢钾(KHzPO.)、21.75g磷酸氢二钾(KzHPO,）、33.40g二水合磷酸氢二钠CNaaHPO.·2HzO)和0.5多氮化铵(NH,CI)，用水溶解，定容至1LpH为7.4。氯化钙浴液：称取27.50g无水氯化钙（CaCl）或36.40g二水合氯化钙（CaC12HzO)，用水b)
溶解,定容至1 L。
统酸镁溶液：称取22.50g七水合硫酸镁（MgS0·7H,0)，用水溶解，定容至1L。c
氯化铁溶液：称取0.25g六水合氯化铁（FeCl·6H,0)，用水溶解，定容至1L。加入0.05mL浓盐酸或0.4g/LEDTA二钠盐缓冲溶液保存。2
上述贮备液中如果出现沉淀，则需重新配制。GB/T21831—2008
5.4.2试验培养基的制备
取磷酸盐缓冲液、氯化钙溶液、硫酸镁溶液和氯化铁溶液各1mL于800mL试验用水中，定容至1L。6试验程序
6.1组别设计
a）通常，试验中需要设置下列组别：含受试物和接种物的试验组；bZxz.net
一仅含接种物的接种物空白对照组；一含参比物和接种物的程序对照组。b）必要时：
—一含受试物、参比物和接种物的蒋性对照组（见附录A)。6.2受试物贮备液
受试物或参比物的水中溶解度若超过1号/L，则称取18～10g，用试验用水溶解并定容至1L否则，将受试物直接加人试验培养基中，确保受试物溶液均质化。6.3试验操作
对试验培养基至少进行高强度曝气20min后，在试验温度下静置20h。试验所用培养基为同一批配制，试验操作时应保持试验培养基无气泡。将充分骤气的试验培养基放入BOD瓶中，大约1/3体积。在各BOD瓶中分别加入适量的受试物和参比物贮备液（或以其他方式加人，见附录B），试验烧瓶中受试物的最终浓度一般不超过10mg/工。为确保接种物的活性，BOD瓶中溶解氧浓度不得低于0.5mg/L，通常使受试物浓度限制在2mg/L以内，一般从受试物的ThOD(mg/rag)可估计大致的最商浓度。对不易降解的和ThOD较低的化合物，浓度可设置在5mg/L~～~10mg/L之间。如果发现受试物对接种物具有微生物毒性，则必须设置毒性对照，同时加入受试物和参比物，使其含受试物的最终浓度与其他试验组相当。向所有试验瓶中加人接种物，将软管插到装有试验培养基的烧杯底部1/4处（不要从底部）吸取试验培养基至各BOD瓶中，使所有BOD瓶完全充满。当受试物是难溶性物质时，添加的方法见附录B，通过搅拌确保药液混合均匀，轻轻拍打以去除气泡，塞好瓶塞，确保没有气泡附着，在20亡黑暗中培养。在28培养期中，以固定的时间间隔（至少每周一次）从各瓶组抽敢至少两瓶进行溶解氧测定。每周采样一饮测定溶解氧可确定14观察期去除百分率，如要确定十天观察期的去除百分率，则需要每3 d~4 d 取样,
对于含氮受试物，需要校正硝化作用的氧消耗。测定溶解氧浓度的同时，从BOY瓶中取样测定亚硝酸根和硝酸根含量。
7质量保证与质量控制
a）在稳定期、试验结束时或十天观察期结束时，乎行试验间的降解率最大差别低于20%b）试验进行到14时，比物程序对照的降解率（以占ThOD的百分数计)不低于60%：c）28 d后接种物空白对照的溶解氧损耗不高于1.5Ⅱg/L；d）试验期间，试验瓶中溶解氧的残余浓度不低于0.5mg/L。8数据与报告
8.1数据处理
首先用每一时间点的受试物瓶的氧消耗减去相应的接种物空白对照的氧损耗，除以受试物的浓度3
GB/T 21831—2008
(mg/L)，得到以氧/受试物(mg/ng)表示的BOD。再用此BOD除以ThOD或者COD就得到生物降解百分率。见式(1)，
式中：
受试物氧消耗，单位为毫克（mg）；空自对照氧消耗，单位为毫克(mg)；受试物加人量，单位为毫克（mg）。生物降解百分率可从式(2)或式(3)中获得。p
式中：
D--—生物降解率,该文表示。
注意这两种方法可能得到不同
ThOD和 COD
用造当的 ThOD(H4
校正硝化作用的氧
8. 2结果报告
最和定
见附录 D
试验报告应使
下内容：
a）受试物信在
物理及基本理化
受过物监别数据。
b）试验条件
态和取样培
污水虽
水的比
试验周期
水中难裕授
采用的选
e）累
萌不完全，
液，感浮液制备方套
娱序改变的原因及解释说明。
将数据填人“数据
（见能晟E)：
-任何观察到的抑制现象;
任何观察到的非生物降解，
化学物质分析数据(若适用)；
受试物降解产物的分析数据(若适用)：(1)
知或估计出现的硝化作用选择使试验期的简酸独和亚硝酸根浓度受试物及参比物的降解曲线：包括停带期、降解期和十天观察期：稳定期，试验结束时和（或）十天观察期结束时的降解百分率。d）结果讨论
附录A
（资料性附录）
受试物对接种物的生长抑制的处理A1受试物对接种物的生长抑制的处理GB/T 21831—2008
当快速生物降解试验中受试物表现为无生降解性时：为判别是源于受试物对接种物的抑制作用还是因为受试物的惰性，推荐采用以不措施：a）微生物毒性试验和生物降解试验采用类似或相同的接种物b）微生物毒性试验剪
生长抑制试验
生物降解性试验
低于EC2
以单独或族合采用以下方法活州污泥呼咳抑制试验、BOD和(或)微生物避免受试物抑制接种物的活性，建议试物浓度设置为EC%的1/10（或，可判衰受试物对接种物无抑制影响；试物对
当受试物对接科物EC
或使用”
配材料评
试浓度，
试验结果：
快婆生
试物度，
准荐采用密闭瓶法试验
化的接种物，试险时可设置较高的受GB/T21831—2008
B.1难溶性受试物的处理
附录B
(资料性附录）
难溶性受试物的处理
对于难溶于水的受试物的生物降舒性试验，应特别注意以下问题：鉴于均质的液体很少有采样问题，因此应采用适当的方法使固体物质均质化，避免非均质造成的误差。当需要从混合物或含大昼杂质的受试物中采集几毫克的代表样品时，尤其应特别小心；试验过程中可采用多种搅拌方式，要注意揽拌力足以使受试物分敬、但又不过强以致于出现过热，泡沫过多！
可使用乳化剂使受试物呈稳定的分敬状态，但乳化剂在试验条件下应对接种物无衰、不降解，也不起泡；
对溶剂的要求同乳化剂；
对于固体受试物，乳化剂不得展于固体裁运剂，但油性受试物可以使用裁运剂；当使用辅助物质如乳化剂,溶剂和载运剂时，应设置辅助物质空白对照。+
C.1理论耗氧量(ThoD)
附录C
(资料性附录）
有关参数的计算和确定
G/T 21831—2008
当元素组成确定或已知时,可以计算得出理论耗氧量。对于化合物 C,HnClN,NanO.P,S,,通常基于形成铵盐的降解方式计算ThOD其理论需氧量为式(C.1)162c±
如累预测到或可确是
需氧量为式(C.2)
式(C. 1)和
(C2)中:
2m+ 3s+
精化作用时，就要基于形成硝酸盐的降解方式来计算ThODno，其理论+
碧氧最，以每
物分子中碳
物分子中氢
物分子中氯
柳分子中氮
韧分子中碗
分子中磷
分子中钠
子中氧
化合理
g/mg）4
-( C,2)
若硝化作用不完影得变配发生，则带通过测定硝酸盐和亚硝酸盐的浓度迁行校正ThOD。C.2化学需氧量(COD)
水中可溶性有机物的化学缓氧显可用魏有有法避行测定化学需氧量通常最好用其他方法来测定，即有压力平衡装豆的密闭系统Kelkenberg法，特别是对于难落物质的试验中，用该方法可以润定常规疗法报难测定的化合物。然面，该方法不能测定像嘧啶类的物质。若重铬酸钾的浓度从0.0026mol/L增至0.0416mol/L，就可容易地测定5ng~10mg直按称量加入的物质,这将满足难溶于水物质的化学需氧量测定。GB/T 21831--2008
附录D
（资料性附录）
硝化作用氧消耗的校正
在呼吸计法中，铵氧化过程消耗的氧將显著影响试验氧消耗的测定。用氧消耗法对不含氮受试物进行生物降解性试验时，即使试验和对照瓶中介质含的铵氮随机发生氧化，不考虑硝化作用的结果误差也很小小于或等于5%）；但对于含氮受试物，如果不校正铵氧化为硝酸根和亚硝酸根所消耗的氧，试验结果将严重失真。当发生完全的硝化作用或铵转化硝酸根时，氧化过程见式(D,1)。
NH,+2O→NO-+2H++H,0
氧化14氮成为硝酸根将消耗648氧，亦即生成硝酸根消耗的氧是硝态氮增加量乘以4.57。如果发生不完全硝化作用，氧化过程见式(D.2)和式(D.3)NH ++3/2O→ NO-+ 2H+-+ H.O
NO,-+1/2O,→NO,
氧化14氮成为亚硝酸根将消耗48g氧，即换算系数为3.43。根拯存在的微生菌种的不同，上述二个反应是连续的平衡反应，即亚硝酸根含量可能增加也可能减少，而在后一情形，则生成等当量的硝酸根，这样，生成硝酸根的耗氧量是确态氮含量增加量乘以4.57，而生成亚硝酸根的耗氧量是亚硝态氮含量增加量乘以3.43如果仅测定了被氮化的总氮，其耗氧量最好应计为氧化态氮增加量乘以4.57。生物降解率贮计算为经校正后的嵌氧化耗氧母除以无消耗作用的理论耗氧量（ThODB，的计算见附录 C)。
E.1试验室
E.2开始试验日期
E.3要试物
名称：
接种物储备液浓度：
瓶中的初始浓度：
ThOD 或 COD:
E.4接种物
来源：
处理方法：
预处现,如有：
试验混合物中的浓度：
E.5测定
试验组别
仅含接种物的空白
合受试物和接种物的
我验组
瓶序号
空白对照均值
附录Ｅ
《资料性附录）
密闭瓶试验数据单
氧测定结果
氧測定结果
在；参比物和毒物对照试验可使闭类似的格式。E.6硝化作用的校正
表E.2硝化作用校正结果
硝化作用的氧消花
(1)硝酸盐浓度(以N计>/(mg/L)
(2)硝酸根浓度的变化(以N计)/(mg/L)0
GB/T 21831—2008
n天后的氧波度/(mg/L)
培养时间/a
GB/T 21831—2008
确化作用的氧消耘
(3)相当的氧量/(mg/L）
4)恶硝酸根液度(以 N升)/(mg/L)5)亚硝载根浓度的变化(以N计>/(mg/L)(6)相当的氧量/(mg/L)
<7)相当的氧总量/(mg/L）
氧消耗
降解率测定结果
(m, —a1)*
(m—a)
D,x100
GXThOD
Dm.*_ D, +D,
这里假定：mo)=s，
式中：
常天的空白试验值：
表E.2（续）
表 E. 3 降解率测定结果
第0天时瓶1中受试物的值；
第 0 天时瓶 2 中受试物的值。培养时间/a
n天后的损耗/(mg/L)
若g(与 2co>或a2(不等时使用:(o>a)—(m)一m)和(2)—(m)—m）武中：
第天时空白试验的乎均值；
第天时瓶1中受试物的值；
第×天时瓶2中受试物的值。
重复试验的结景者有相当大的差别时不要取平均值。E.8空白对照的氧损耗
空白对照的氧消耗量：（mb）一mbc2s）mg/L。这一消耗量对试验的有效性非带重要，此值应小于1. 5 mg/L.
用 E,6 中的(7)来校正任何硝化作用。10
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