GB/T 22956-2008
基本信息
标准号： GB/T 22956-2008
中文名称：河豚鱼、鳗鱼和烤鳗中吡喹酮残留量的测定 液相色谱-串联质谱法
标准类别：国家标准(GB)
标准状态：现行
发布日期：2008-12-31
实施日期：2009-05-01
出版语种：简体中文
下载格式：.rar.pdf
下载大小：218630
标准分类号
标准ICS号：食品技术>>67.050食品试验和分析的一般方法
中标分类号：食品>>食品综合>>X04基础标准与通用方法
关联标准
出版信息
出版社：中国标准出版社
页数：12页
标准价格：14.0 元
计划单号：20079496-T-469
出版日期：2009-05-01
相关单位信息
首发日期：2008-12-31
起草人：林峰、李志勇、吴映璇、欧阳少伦、林海丹、邵琳智、庞国芳
起草单位：中华人民共和国秦皇岛出入境检验检疫局、中华人民共和国广东出入境检验检疫局
归口单位：国家质量监督检验检疫总局
提出单位：国家质量监督检验检疫总局
发布部门：中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 中国国家标准化管理委员会
主管部门：国家标准化管理委员会
标准简介
本标准规定了河豚鱼、鳗鱼和烤鳗中吡喹酮残留量的液相色谱-串联质谱测定方法。本标准适用于河豚鱼肌肉、鳗鱼肌肉、烤鳗中吡喹酮残留量的测定。 GB/T 22956-2008 河豚鱼、鳗鱼和烤鳗中吡喹酮残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 GB/T22956-2008 标准下载解压密码：www.bzxz.net
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标准内容
ICS67.050
中华人民共和国国家标准
GB/T22956--2008
河豚鱼、鳗鱼和烤鳗中吡喹酮
残留量的测定
液相色谱-串联质谱法
Determination of praziquantel residue in fugu,eel and baked eel-LC-MS-MS method
2008-12-31发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
2009-05-01实施
本标准的附录 A,附录 B为资料性附录。本标准由国家质量监督检验检疫总局提出并归口。GB/T22956--2008
本标准起草单位：中华人民共和国秦皇岛出人境检验检疫局、中华人民共和国广东山入境检验检疫局。
本标准主要起草人：林峰、李志勇、吴映璇、欧阳少伦、林海丹、部琳智、庞国芳。1范围
河豚鱼、鳗鱼和烤鳗中毗喹酮
残留量的测定液相色谱-串联质谱法GB/T22956—2008
本标准规定了河豚鱼、鳗鱼和烤鳗中吡喹酮残留量的液相色谱-串联质谱测定方法。本标准适用于河豚鱼肌肉、鳗鱼肌肉、烤鳗中吡喹酮残留最的测定。本标准的方法检出限：河豚鱼肌肉、鳗鱼肌肉、烤鳗中吡喹酮残留量的检出限为5μg/kg2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标的引用而成为本标推的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标谁，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准。GB/T 6379.1测量方法与结果的准确度(正确度与精密度）第1部分：总则与定义(GB/T 6379.1—2004,ISO 5725-1:1994,IDT)
GB/T6379.2测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第2部分：确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法（CB/T6379.2—2004，ISO5725-2:1994,IDT）GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T66822008,ISO3696:1987.MOD）3原理
采用乙酸乙酯提取样品中的吡喹酮残留，提取液经碱性氧化小柱净化，样品溶液供液相色谱-串联质谱仅检测，外标峰面积法定量。4试剂和材料
除特别规是外，所用试剂均为分析绝，水为6B/I6682规定的一级水。4.1乙腈：色谱纯。
4.2．中醇：色谱纯。
4.3乙酸乙酯。
4.4 冰乙酸。
4.50.1%乙酸溶液：准确移取1.0mL冰乙酸(4.4)至1L容量瓶中,加水至刻度，摇勾备用。4.6碱性氧化铝柱或性能相当者：1g，6mL，4.7标准品：吡喹酮（prazitquantel,CAS：55268-74-1)纯度≥98%。4.8100 mg/L标准储备液：准确称取吡噻酮标准品10.0 mg(准确至0.01 mg),用甲醇溶解并定容至100 mL。该标准储备液避光置于一18 ℃冰箱中保存。4.9标准工作液：根据需要，吸取一定量的100mg/L吡喹阐标准储备液（4.8)用乙腈-水（2十3)溶蔽稀释成适当浓度的标准工作液，使用前配制。4.10基质混合标准工作溶液：根据需要，吸取不同体积的标准工作被（4.9），用空白样品提取液配制成不同浓度的基质混合标工作溶，使用前配制，4.11滤膜：0.2μm。
GB/T 22956—2008
5仪器和设备
5.1液相色谱-串联质谱联用仪：配有电喷雾(ESI)源。5.2离心机：转速大于或等于40001/min。5.3组织捣碎机。
5.4勾浆机：转速大于或等于8000r/min.5.5液体混合器。
5.6超声波水浴。
5.7固相萃取装。
5.8旋转蒸发仪。
5.9天平：感量分别为 0. 01 mg和 0. 01 g。6样品制备与保存
取样品中有代表性的可食部分约500名，用组织捣碎机粉碎，装人洁净容器作为试样，密封并做好标识,于一18 ℃C冰箱内保存。
制样操作过程中应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。7测定步骤
7.1提取
推确称取2g样品（准确至0.01g）至50mL离心管中，加入10mL乙酸乙酪，勾浆机上8000r/min均质30 s,4000r/min离心5min上清液转移至25mL比色管中;另取一50mL离心管加人10mL乙酸乙酯，洗涤匀浆刀头10s，洗涤液移人前一离心管巾，用玻榉捣碎离心管中的沉淀，液体混合器上涡旋混合2min，4000r/min离心5min，上清液合并至25mL比色管，用乙酸乙酯定容至25.0ruL,摇匀备用。
7.2净化
准确移取2.50mL样品提取液至蒸发瓶中,在40℃下旋转蒸发至于,用2mL甲醇溶解，液体混匀器上混旋2min,置超声波水浴中超声5min，该样液全部转移至碱性氧化铝净化柱（4.6）上，控制流速在 1mL/min～2 mL/min,用 2 mL甲醇淋洗净化柱，收集全部流出液并定量转移至浓缩瓶中,40 ℃下真空旋转发至干，用1.00mL乙晴溶解残渣，并置超声波水浴中超声摄荡1mit.加人1.00tmL水，置超声波水浴中超声振荡1min，0.2μm滤膜（4.11)过滤，供液相色谱-串联质谱测定。7.3测定条件
7.3.1液相色谱参考条件
a）色谱柱：Intersil C，5 μm，150 mmX2.1 mm(内径)或相当者;b）柱温：40 ℃；
流动相：乙腈-0.1%乙酸（4十6）；流速:0.30 mL/min
进样量：10μL.
7.3.2质谱参考条件
a）离子源：电喷雾离子源；
b）扫描方式：正离子扫描：
检测方式：多反应监测模式(MRM)：e
监测离了对、定量离子对见表1;2
表1吡噻酮的监测离子对和定量离子对监测离子对(m/2)
313/203,313/83
GB/T 22956—2008
定量离子对(m/z)
313/203
雾化气、气帘气辅助加热气，碰撞气均为高纯氮气或其他合适气体：使用前应调节各气体流量以使质谱灵敏度达到检测要求，喷雾电压，去集簇电压、碰撞能等电压值应优化至最佳灵敏度，参考质谱参数见表2.www.bzxz.net
表 2 参考质谱参数
质谢参数
雾化气/kPa
气帘气/kPa
轴热加热气/kPa
避接气
粘助加热气温度/℃
喷雾电压/V
去集簇电压/V
磁撞能/V
7.3.3液相色谱-串联质谱测定
7.3.3.1定性测定
参数值
23(m/=313/203).40(n/z 313/83)被测组分选择1个母离子，2个子离子，在相同试验条件下，样品中待测物质的保留时间与标准溶液中对应的保留时间偏差在士2.5%之内；且样品谱图中被測组分监测离子的相对离子丰度与浓度接近的标准溶液谱图中对应的监测离子的相对离子丰度进行比较，偏差不超过表3规定的范围，则可判定为样品中存在对应的待測物。
表3定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度 K
允许的最大偏差
7.3.3.2定量测定
以%表示
K≤10
在仪器最佳工作条件下，对基质合标推工作落液(1.10)进样，以峰面积为纵坐标，基质混合标准工作溶液浓度为横坐标绘制标准工作曲线。用标准工作曲线对样品进行定量，样品浴获中待测物的响应值均应在仪器测定的线性范围内。吡喹酮标准溶液的多反应监测(MRM)色谱图参见附录A中的图 A.1。吡酮的添加浓度及其平均回收率的试验数据参见附录 B中的表B.1。7.4平行试验
按以上步骤，对同一试样进行平行试验测定，7.5空白试验
除不称取试样外，均按上述步骤进行。8结果计算
河豚鱼、鳗鱼和烤鳗中吡喹酮残留量的测定结果按式(1)计算：x-CX
GB/T 22956—2008
式中：
X——试样中吡喹酮残留量，单位为微克每下克(μg/kg）：一从标准工作曲线得到的吡喹酮溶液浓度，单位为纳克每毫升（ng/ml.)；V
样品溶腋最终定容体积，单位为毫升（mL）；样品溶液所代表最终试样的质量，单位为克（g)。计算结果应扣除空白值。
糖密度
9.1一般规定
本标准的精密度数据是按照GB/T6379.1和GB/T6379.2的规定确定的，重复性和再现性的值以95%的可信度来计算。
9,2 重复性
在重复性试验条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过重复性限r，被测物的添加浓度范围及重复性方程见表4。
表4添加浓度范围及重复性和再现性方程样品基质
河豚鱼肌肉
鳗鱼肌肉
添如浓度范围
注：㎡为两次测定结果的算术平均值。重复性限，
r=0. 100 m-0. 379
r= 0. 046 5 m+0. 553
r=0. 127 m-0. 037
如果差值超过重复性限，应舍弃试验结果并重新完成两次单个试验的测定。9.3再现性
单位为微克每于克
再现性限R
R-C. 282 n-0. 175
R-0. 218 n-0. 077
R=0. 140 m+2. 37
在再现性条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过再现性限R，被测物的添加浓度范围及再现性方程见表4。
附录A
(资料性附录)
标准溶液的多反应监测(MRM)色谱图吡喹酮标准溶液的多反应监测(MRM)色谱图见图A,1。3. 2e4 1
0.51.01.52.02.5303.54.04.55.0 5.5图 A 1 吡喹酮标准溶液的多反应监测(MRM)色谱图GB/T22956—2008
GB/T 22956—2008
附录B
(资料性附录）
回收率
吡喹酮的添加浓度及其平均回收率的试验数据见表B.1.表B.1吡喹酮的添加浓度及其平均回收率的试验数据样品基质
河豚鱼肌肉
鳗鱼肌肉
添加浓度/（ug/kg）
平均回收率/%
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中华人民共和国国家标准
GB/T22956--2008
河豚鱼、鳗鱼和烤鳗中吡喹酮
残留量的测定
液相色谱-串联质谱法
Determination of praziquantel residue in fugu,eel and baked eel-LC-MS-MS method
2008-12-31发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
2009-05-01实施
本标准的附录 A,附录 B为资料性附录。本标准由国家质量监督检验检疫总局提出并归口。GB/T22956--2008
本标准起草单位：中华人民共和国秦皇岛出人境检验检疫局、中华人民共和国广东山入境检验检疫局。
本标准主要起草人：林峰、李志勇、吴映璇、欧阳少伦、林海丹、部琳智、庞国芳。1范围
河豚鱼、鳗鱼和烤鳗中毗喹酮
残留量的测定液相色谱-串联质谱法GB/T22956—2008
本标准规定了河豚鱼、鳗鱼和烤鳗中吡喹酮残留量的液相色谱-串联质谱测定方法。本标准适用于河豚鱼肌肉、鳗鱼肌肉、烤鳗中吡喹酮残留最的测定。本标准的方法检出限：河豚鱼肌肉、鳗鱼肌肉、烤鳗中吡喹酮残留量的检出限为5μg/kg2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标的引用而成为本标推的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标谁，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准。GB/T 6379.1测量方法与结果的准确度(正确度与精密度）第1部分：总则与定义(GB/T 6379.1—2004,ISO 5725-1:1994,IDT)
GB/T6379.2测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第2部分：确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法（CB/T6379.2—2004，ISO5725-2:1994,IDT）GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T66822008,ISO3696:1987.MOD）3原理
采用乙酸乙酯提取样品中的吡喹酮残留，提取液经碱性氧化小柱净化，样品溶液供液相色谱-串联质谱仅检测，外标峰面积法定量。4试剂和材料
除特别规是外，所用试剂均为分析绝，水为6B/I6682规定的一级水。4.1乙腈：色谱纯。
4.2．中醇：色谱纯。
4.3乙酸乙酯。
4.4 冰乙酸。
4.50.1%乙酸溶液：准确移取1.0mL冰乙酸(4.4)至1L容量瓶中,加水至刻度，摇勾备用。4.6碱性氧化铝柱或性能相当者：1g，6mL，4.7标准品：吡喹酮（prazitquantel,CAS：55268-74-1)纯度≥98%。4.8100 mg/L标准储备液：准确称取吡噻酮标准品10.0 mg(准确至0.01 mg),用甲醇溶解并定容至100 mL。该标准储备液避光置于一18 ℃冰箱中保存。4.9标准工作液：根据需要，吸取一定量的100mg/L吡喹阐标准储备液（4.8)用乙腈-水（2十3)溶蔽稀释成适当浓度的标准工作液，使用前配制。4.10基质混合标准工作溶液：根据需要，吸取不同体积的标准工作被（4.9），用空白样品提取液配制成不同浓度的基质混合标工作溶，使用前配制，4.11滤膜：0.2μm。
GB/T 22956—2008
5仪器和设备
5.1液相色谱-串联质谱联用仪：配有电喷雾(ESI)源。5.2离心机：转速大于或等于40001/min。5.3组织捣碎机。
5.4勾浆机：转速大于或等于8000r/min.5.5液体混合器。
5.6超声波水浴。
5.7固相萃取装。
5.8旋转蒸发仪。
5.9天平：感量分别为 0. 01 mg和 0. 01 g。6样品制备与保存
取样品中有代表性的可食部分约500名，用组织捣碎机粉碎，装人洁净容器作为试样，密封并做好标识,于一18 ℃C冰箱内保存。
制样操作过程中应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。7测定步骤
7.1提取
推确称取2g样品（准确至0.01g）至50mL离心管中，加入10mL乙酸乙酪，勾浆机上8000r/min均质30 s,4000r/min离心5min上清液转移至25mL比色管中;另取一50mL离心管加人10mL乙酸乙酯，洗涤匀浆刀头10s，洗涤液移人前一离心管巾，用玻榉捣碎离心管中的沉淀，液体混合器上涡旋混合2min，4000r/min离心5min，上清液合并至25mL比色管，用乙酸乙酯定容至25.0ruL,摇匀备用。
7.2净化
准确移取2.50mL样品提取液至蒸发瓶中,在40℃下旋转蒸发至于,用2mL甲醇溶解，液体混匀器上混旋2min,置超声波水浴中超声5min，该样液全部转移至碱性氧化铝净化柱（4.6）上，控制流速在 1mL/min～2 mL/min,用 2 mL甲醇淋洗净化柱，收集全部流出液并定量转移至浓缩瓶中,40 ℃下真空旋转发至干，用1.00mL乙晴溶解残渣，并置超声波水浴中超声摄荡1mit.加人1.00tmL水，置超声波水浴中超声振荡1min，0.2μm滤膜（4.11)过滤，供液相色谱-串联质谱测定。7.3测定条件
7.3.1液相色谱参考条件
a）色谱柱：Intersil C，5 μm，150 mmX2.1 mm(内径)或相当者;b）柱温：40 ℃；
流动相：乙腈-0.1%乙酸（4十6）；流速:0.30 mL/min
进样量：10μL.
7.3.2质谱参考条件
a）离子源：电喷雾离子源；
b）扫描方式：正离子扫描：
检测方式：多反应监测模式(MRM)：e
监测离了对、定量离子对见表1;2
表1吡噻酮的监测离子对和定量离子对监测离子对(m/2)
313/203,313/83
GB/T 22956—2008
定量离子对(m/z)
313/203
雾化气、气帘气辅助加热气，碰撞气均为高纯氮气或其他合适气体：使用前应调节各气体流量以使质谱灵敏度达到检测要求，喷雾电压，去集簇电压、碰撞能等电压值应优化至最佳灵敏度，参考质谱参数见表2.www.bzxz.net
表 2 参考质谱参数
质谢参数
雾化气/kPa
气帘气/kPa
轴热加热气/kPa
避接气
粘助加热气温度/℃
喷雾电压/V
去集簇电压/V
磁撞能/V
7.3.3液相色谱-串联质谱测定
7.3.3.1定性测定
参数值
23(m/=313/203).40(n/z 313/83)被测组分选择1个母离子，2个子离子，在相同试验条件下，样品中待测物质的保留时间与标准溶液中对应的保留时间偏差在士2.5%之内；且样品谱图中被測组分监测离子的相对离子丰度与浓度接近的标准溶液谱图中对应的监测离子的相对离子丰度进行比较，偏差不超过表3规定的范围，则可判定为样品中存在对应的待測物。
表3定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度 K
允许的最大偏差
7.3.3.2定量测定
以%表示
K≤10
在仪器最佳工作条件下，对基质合标推工作落液(1.10)进样，以峰面积为纵坐标，基质混合标准工作溶液浓度为横坐标绘制标准工作曲线。用标准工作曲线对样品进行定量，样品浴获中待测物的响应值均应在仪器测定的线性范围内。吡喹酮标准溶液的多反应监测(MRM)色谱图参见附录A中的图 A.1。吡酮的添加浓度及其平均回收率的试验数据参见附录 B中的表B.1。7.4平行试验
按以上步骤，对同一试样进行平行试验测定，7.5空白试验
除不称取试样外，均按上述步骤进行。8结果计算
河豚鱼、鳗鱼和烤鳗中吡喹酮残留量的测定结果按式(1)计算：x-CX
GB/T 22956—2008
式中：
X——试样中吡喹酮残留量，单位为微克每下克(μg/kg）：一从标准工作曲线得到的吡喹酮溶液浓度，单位为纳克每毫升（ng/ml.)；V
样品溶腋最终定容体积，单位为毫升（mL）；样品溶液所代表最终试样的质量，单位为克（g)。计算结果应扣除空白值。
糖密度
9.1一般规定
本标准的精密度数据是按照GB/T6379.1和GB/T6379.2的规定确定的，重复性和再现性的值以95%的可信度来计算。
9,2 重复性
在重复性试验条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过重复性限r，被测物的添加浓度范围及重复性方程见表4。
表4添加浓度范围及重复性和再现性方程样品基质
河豚鱼肌肉
鳗鱼肌肉
添如浓度范围
注：㎡为两次测定结果的算术平均值。重复性限，
r=0. 100 m-0. 379
r= 0. 046 5 m+0. 553
r=0. 127 m-0. 037
如果差值超过重复性限，应舍弃试验结果并重新完成两次单个试验的测定。9.3再现性
单位为微克每于克
再现性限R
R-C. 282 n-0. 175
R-0. 218 n-0. 077
R=0. 140 m+2. 37
在再现性条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过再现性限R，被测物的添加浓度范围及再现性方程见表4。
附录A
(资料性附录)
标准溶液的多反应监测(MRM)色谱图吡喹酮标准溶液的多反应监测(MRM)色谱图见图A,1。3. 2e4 1
0.51.01.52.02.5303.54.04.55.0 5.5图 A 1 吡喹酮标准溶液的多反应监测(MRM)色谱图GB/T22956—2008
GB/T 22956—2008
附录B
(资料性附录）
回收率
吡喹酮的添加浓度及其平均回收率的试验数据见表B.1.表B.1吡喹酮的添加浓度及其平均回收率的试验数据样品基质
河豚鱼肌肉
鳗鱼肌肉
添加浓度/（ug/kg）
平均回收率/%
小提示：此标准内容仅展示完整标准里的部分截取内容，若需要完整标准请到上方自行免费下载完整标准文档。