本标准规定了牛奶和奶粉中保泰松残留量的液相色谱-串联质谱测定方法。本标准适用于牛奶和奶粉中保泰松残留量的测定。 GB/T 22977-2008 牛奶和奶粉中保泰松残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 GB/T22977-2008 标准下载解压密码：www.bzxz.net

ICS67.050
中华人民共和国国家标准
GB/T22977—2008
牛奶和奶粉中保泰松残留量的测定液相色谱-串联质谱法
Determination of phenylbutazone residuesin bovinemilk and milk powder--LC-MS-MS method2008-12-31发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
2009-05-01实施
本标准的附录A、附录B为资料性附录。本标准由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国秦皇岛出人境检验检疫局。本标准主要起草人：王飞、王海洋、曹彦忠、贾光群、张进杰、石玉秋、庞国芳。GB/T22977—2008
1范围
牛奶和奶粉中保泰松残留量的测定液相色谱-串联质谱法
本标准规定了牛奶和奶粉中保泰松残留量的液相色谱-串联质谱测定方法。本标准适用于牛奶和奶粉中保泰松残留量的测定。本标准的方法检出限：牛奶5.0μg/kg，奶粉40.0μg/kg。2规范性引用文件
GB/T22977-2008
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T6379.1测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第1部分：总则与定义(GB/T6379.12004,ISO5725-1:1994,IDT)GB/T6379.2测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第2部分：确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法（GB/T6379.2—2004，ISO5725-2：1994，IDT）GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682—2008，ISO3696：1987，MOD）3原理
牛奶和奶粉中保泰松的残留用氨水保持碱性条件，用乙醇、乙醚和石油醚去除脂肪，然后在酸性条件下用四氢呋-正已烷混合溶液提取保泰松残留，浓缩后定容，供液相色谱-串联质谱仪测定。外标法定量。
4试剂和材料
除另有说明外，所用试剂均为分析纯。4.1水：GB/T6682，级。
4.2甲醇。
4.3乙醇。
氨水：化学纯。
4.5乙醚。
4.6石油醚。
4.7四氢喃：色谱纯。
正已烷：色谱纯。
乙睛：色谱纯。
4.10乙酸乙酯。
4.11盐酸。
4.12甲酸铵。
4.13二硫苏糖醇（dithiothreitol,CAS：3483-12-3）：C,Hi.O,S2，纯度≥99%。4.14N,N-二甲基甲酰胺（N,N-Dimethylformamide,CAS：68-12-2)：HCON(CH,)2，含量99.5%。1
GB/T 22977--2008
4.15四氢呋喃-正已烷混合溶液：（1十4）。200mL四氢呋喃（4.7)与800mL正已烷（4.8）混合。4.163.0mol/L盐酸：吸取25.8mL的盐酸（4.11）于100mL容量瓶中，用水定容至100mL4.170.01mol/L甲酸铵溶液：0.63g甲酸铵（4.12于1000mL容量瓶中，加水稀释至刻度，过0.2μm的水性滤膜。
4.18稳定剂：0.25mg/mL。称取0.125g二硫苏糖醇（4.13），用乙酸乙酯（4.10）溶解并定容至500mL容量瓶中。
4.19标准物质：保泰松（CAS：50-33-9），纯度≥95%。4.20保泰松标准储备溶液：100.0μg/mL。准确称取10.0mg保泰松标准物质（4.19）于100mL容量瓶中，用约80mL甲醇（4.2溶解，加人5.0mL稳定剂（4.18），用甲醇（4.2)定容至刻度，混匀。4℃保存。
4.21中间浓度标准溶液：1.0g/mL。吸取10.0uL保泰松标准储备溶液（4.20）于10mL容量瓶中用流动相定容至刻度。4℃C保存4.22基质标准工作溶液：分别吸取5.0μL、10.0μL、50.0μL、200.0μL中间浓度保泰松标准溶液(4.21)，加人20μLN，N-甲基甲酰胺（4.18），用基质空白溶液定容至1.0mL，配成5.0ng/mL、10.0ng/mL、50.0ng/mL、200.0ng/mL浓度系列标准工作溶液。在4℃保存，可使用一周。4.23滤膜：0.2μm。
5仪器
5.1液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源。5.2天平：感量0.01g，0.0001g。5.3旋涡混合器。
5.4氮气浓缩仪。
5.5具塞聚丙烯离心管：10mL。
5.6离心机：可提供2600g离心力下（相当于4200r/min）。5.7超声波清洗仪。
5.8振荡器。
6试样制备与保存
6.1试样的制备
从全部样品中取出有代表性样品约1kg，充分混匀，均分成两份，分别装人洁净容器内。密封后作为试样，标明标记。在抽样和制样的操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化，6.2试样的保存
将试样于-18℃保存。
7测定步骤
7.1试样提取
7.1.1牛奶
称取1g试样，精确至0.01g，置于10mL离心管中，加人1.0mL乙醇（4.3），混匀；加人01mL氨水（4.4），混匀；加人2.5mL乙醚（4.5），于旋涡混合器混匀20s，静置5min；加人2.5mL石油醚（4.6），于旋涡混合器混匀20s，静置5min；小心吸弃上清液后，依次加人5mL四氢呋-正已烷混合溶液（4.15）和0.4mL3.0mol/L盐酸（4.16），于振荡器上剧烈振荡30min；在4200r/min离心力下离心10min。小心吸取上清液于另一10mL离心管中，用氮气浓缩仪于50℃水浴中吹至近干。准确加人20μLN,N-二甲基甲酰胺（4.14)和980μL0.01mol/L甲酸铵溶液（4.17)，于超声波仪2
中助溶，残渣溶解后，过0.2μm滤膜（4.23），供液相色谱-串联质谱仪测定。7.1.2奶粉
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按照1g奶粉加水8mL的比例，将奶粉溶解为还原奶后，按照7.1.1的提取步骤进行。7.2空自样品提取液的制备
用阴性样品，按7.1操作步骤，制备用于配制系列基质标准工作溶液的空白样品提取液。7.3测定条件
7.3.1液相色谱参考条件
液相色谱参考条件如下：
色谱柱：IntersilCis，3μm，150mmX2.1mm（内径）或相当者；a
b）进样量：30μL；
流速：0.2mL/min；
柱温：40℃；
流动相A：0.01mol/L甲酸铵溶液；e)
f)流动相B:乙睛；
g）洗脱条件：恒配比A：B为63%：37%；流速：0.20mL/min；时间：10.0min。7.3.2质谱参考条件
质谱参考条件如下：
离子源：电喷雾离子源：
b）扫描方式：正离子扫描；
检测方式：多反应检测；
d）电喷雾电压：500V；
雾化气压力：0.069MPa；
辅助气流速：0.414L/min；
g）离子源温度：500℃；
碰撞室出口电压：32V；
定性离子对、定量离子对、碰撞气能量和去簇电压：见表1。i）
表1保泰松的定性离子对、定量离子对、碰撞气能量和去簇电压化合物中文名称
保泰松
化合物英文名称定性离子对（m/2）定量离子对（m/2）phenylbutazone
7.4液相色谱-串联质谱测定
7.4.1定性测定
309/160
309/146
309/160
碰撞气能量/V
去簇电压/V
被测组分选择1个母离子，2个以上子离子，在相同的试验条件下，样品中待测物质的保留时间与标准溶液中对应的保留时间偏差土2.5%之内；且待测样品溶液中，被测物中各定性离子相对丰度与浓度接近的基质标准工作溶液中被测物的各定性离子相对丰度的比值K，偏差不超过表2规定的范围，则可判定为样品中存在对应的待测物。表2定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度的比值K
允许的最大偏差
7.4.2定量测定
2010K≤10
在仪器最佳工作条件下，以基质标准工作溶液浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准工作曲3
GB/T22977—2008
线。用基质标准工作溶液的工作曲线对样品中的保泰松进行定量，样品溶液中保泰松的响应值在仪器测定的线性范围内。
在上述色谱参考条件和质谱参考条件下，保泰松的参考保留时间5.46min，保泰松的标准物质多反应监测（MRM)色谱图参见附录A中的图A.1。本方法的添加浓度及其平均回收率的试验数据参见附录B中的表B.1。7.5平行试验
按试样步骤，对同一试样进行平行试验测定。7.6空白试验
不称取样品，其余均按试样步骤进行。8结果计算
试样中保泰松残留量的计算按式(1)计算：V1000
×1000
式中：
X试样中被测组分残留量，单位为毫克每千克（mg/kg)；C
从标准工作曲线得到的被测组分溶液浓度；单位为微克每毫升（μg/mL)；V—试样溶液定容体积，单位为毫升（mL）；m——试样溶液所代表试样的质量，单位为克（g)。计算结果应扣除空白值。bZxz.net
9精密度
9.1一般规定
（1）
本标准的精密度数据是按照GB/T6379.1和GB/T6379.2的规定确定的，其重复性和再现性的值是以95%的可信度来计算。
9.2重复性
在重复性实验的条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过重复性限（r），保泰松的添加浓度范围及重复性方程见表3。
表3添加浓度范围及重复性限和再现性限方程化合物名称
保泰松
添加浓度范围
5.0~200.0
注：m为两次测定值的算术平均值。重复性限r
单位为微克每千克
再现性限R
lgr=1.0367lgm-1.0325lgR=0.8361lgm0.4276如果差值超过重复性限(r)，应舍弃试验结果并重新完成两次单个试验的测定。9.3再现性
在再现性实验的条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过再现性限（R），保泰松的添加浓度范围及再现性方程见表3。
附录A
（资料性附录）
标准物质多反应监测（MRM)色谱图保泰松标准物质多反应监测（MRM)色谱图，见图A.1。峰高
保泰松标准物质多反应监测（MRM）色谱图GB/T22977—2008
GB/T22977—2008
附录B
（资料性附录）
本方法中保泰松添加浓度及其平均回收率的试验数据，见表B.1。表B.1
样品基质
全脂奶粉
脱脂奶粉
全脂加糖奶粉
保泰松添加浓度及其平均回收率的试验数据添加浓度/（μg/kg）
平均回收率/%
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