DB37/T3816-2019 畜禽肌肉中肌苷酸含量测定 高效液相色谱法 前言 本标准按照GB/T1.1-2009规定起草，由山东省畜牧兽医局提出并组织实施，归口于山东省畜牧业标准化技术委员会。起草单位为山东省农业科学院畜牧兽医研究所，主要起草人包括呼红梅、朱荣生、王彦平、赵雪艳、王怀中、王继英、王诚、蔺海朝、程立坤、韩红、成建国、林松、郭建凤、刘畅、唐伟静、孙洁、胡顺营、莫贞峰、时冉冉。 1 范围 本标准规定了畜禽肌肉中肌苷酸含量的测定方法，适用于畜禽肌肉中肌苷酸含量的分析。方法检出限为0.05 mg/g，定量限为0.20 mg/g。 2 规范性引用文件 下列文件对于本标准的实施是必不可少的。注日期的引用文件，仅该版本适用；未注日期的引用文件，采用最新版本，包括所有修改单。 - GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 - GB/T 9695.19 肉与肉制品取样方法 3 原理 试样中的肌苷酸经5%高氯酸溶液提取，再与0.5 mol/L氢氧化钠反应生成化学状态稳定的肌苷酸钠，采用高效液相色谱（紫外检测器）测定，外标法定量。 4 试剂和材料 4.1 水：GB/T 6682一级水 4.2 甲酸铵 4.3 高氯酸 4.4 氢氧化钠 4.5 肌苷酸标准品：纯度≥98% 4.6 甲醇：色谱纯 4.7 甲酸铵缓冲溶液（50 mmol/L，pH 6.5）：准确称取3.15 g甲酸铵于500 mL水中，pH调至6.5，定容至1000 mL，过滤并超声脱气20 min 4.8 5% 高氯酸溶液：5 mL高氯酸加入95 mL水中 4.9 0.5 mol/L氢氧化钠溶液：由饱和氢氧化钠溶液稀释制备 4.10 肌苷酸标准储备液（1 mg/mL）：称取15.31 mg肌苷酸于10 mL水中定容 4.11 肌苷酸标准系列工作溶液：从储备液准确移取不同体积，水定容至100 mL，得到0.02~0.16 mg/mL系列溶液 4.12 微孔滤膜：0.45 μm无机系 5 仪器和设备 5.1 高效液相色谱仪，配备紫外检测器 5.2 离心机，转速≥4000 rpm 5.3 高速组织匀浆机，转速≥8000 rpm 5.4 分析天平，感量0.1 mg及0.01 mg各一台 5.5 磁力搅拌器 6 样品 按照GB/T 9695.19取样方法，采集约20 g有代表性样品，搅碎均质，置于塑料自封袋中，20℃保存备用。 7 测定步骤 7.1 提取 平行做2份试验。称取1~2 g搅碎均质肌肉，置50 mL离心管中，加入20 mL预冷5%高氯酸溶液，匀浆1 min后转入50 mL容量瓶，用5%高氯酸定容。移取20 mL离心3 min，取上清液10 mL，用0.5 mol/L氢氧化钠调pH至6.5，转入50 mL容量瓶定容，过滤备用。 7.2 液相色谱参考条件 色谱柱：150 mm × 4.6 mm, 5 μm C18柱或等效柱；柱温30℃；紫外检测波长254 nm；流动相：甲酸铵缓冲液:甲醇=95:5；流速1.0 mL/min；进样量10 μL；运行时间10 min。 7.3 测定 7.3.1 上机测定 肌苷酸标准系列工作液和样品提取液上机测定，色谱图见附录A。 7.3.2 定量 以肌苷酸浓度为横坐标，峰面积为纵坐标建立外标工作曲线，计算样品肌苷酸含量。