本标准规定了烟草及烟草制品中三种多元酸（草酸、苹果酸和柠檬酸）的气相色谱测定方法。本标准适用于烟草及烟草制品中三种多元酸（草酸、苹果酸和柠檬酸）的测定。 YC/T 288-2009 烟草及烟草制品 多元酸（草酸、苹果酸和柠檬酸）的测定 气相色谱法 YC/T288-2009 标准下载解压密码：www.bzxz.net

ICS65.160
备案号：25971—2009
中华人民共和国烟草行业标准
YC/T288—2009
烟草及烟草制品
多元酸（草酸、苹果酸
和柠檬酸）的测定
气相色谱法
Tobacco and tobacco products-Determination of polyacids (oxalic acid,malicacid and citricacid)-Gas chromatographymethod2009-03-30发布
国家烟草专卖局
2009-05-01实施
本标准的附录A为资料性附录。
本标准由国家烟草专卖局提出。前言
YC/T288—2009
本标准由全国烟草标准化技术委员会卷烟分技术委员会（SAC/TC144/SC1)归口。本标准起草单位：中国烟草总公司郑州烟草研究院、广东中烟工业有限责任公司。本标准主要起草人：谢复炜、王冰、沈光林、夏巧玲、王昇、纪庆升、郭吉兆。1范围
烟草及烟草制品多元酸（草酸、苹果酸和柠檬酸）的测定气相色谱法
YC/T288—2009
本标准规定了烟草及烟草制品中三种多元酸（草酸、苹果酸和柠檬酸）的气相色谱测定方法。本标准适用于烟草及烟草制品中三种多元酸（草酸、苹果酸和柠檬酸）的测定本方法测定烟草及烟草制品中草酸的定量限为0.11mg/g、苹果酸的定量限为0.47mg/g、柠檬酸的定量限为0.11mg/g。
2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。YC/T31烟草及烟草制品试样的制备和水分测定烘箱法3原理
用5%硫酸-甲醇（体积分数)溶液回流样品，使其中的多元酸与甲醇充分反应生成相应的甲酯，然后用二氯甲烷萃取，萃取液经无水硫酸钠干燥后，通过气相色谱检测其中三种多元酸类化合物的含量。4试剂
除特别要求以外，均应使用分析纯级试剂，水应为蒸馈水或同等纯度的水。4.1甲醇，色谱纯。
4.2浓硫酸，分析纯。
4.3二氯甲烷，色谱纯。
4.4草酸，纯度>99.8%。
4.5苹果酸，纯度>99.5%。
4.6柠檬酸，纯度>99.5%。
4.7己二酸，纯度>99.8%。
4.8衍生化溶液：制备5%（体积分数)的硫酸（4.2)甲醇（4.1)溶液，4.9内标溶液：称量1g已二酸（4.7），精确至0.1mg，置于50mL烧杯中，加人30mL甲醇（4.1)完全溶解，转移到50mL的容量瓶中，加人甲醇（4.1)定容至刻度。注：内标溶液置于一10℃贮存，有效期为1个月。4.10多元酸标准溶液：称量0.6g草酸（4.4)、3g苹果酸（4.5）、1g柠檬酸（4.6)，准确至0.1mg，置于50mL烧杯中，加入30mL甲醇（4.1）完全溶解，转移到50mL的容量瓶中，加人甲醇（4.1）定容至刻度。
注：标准溶液置于一10℃存，有效期为1个月。5仪器
常用实验仪器以及下述各项。
5.1分析天平，精确至0.1mg。
YC/T288—2009
5.2水浴锅。
5.3气相色谱仪，配置有氢火焰检测器，进样口应具有分流进样方式。进样口、柱箱、检测器应分别配有独立可控制的加热单元。
分析步骤
6.1试样制备
按YC/T31制备试样，并测定水分含量。6.2样品萃取
称取约1g样品，准确至0.1mg，置于100mL平底烧瓶内，准确加人40mL5%硫酸-甲醇（体积分数）溶液（4.8）和200μL已二酸内标溶液（4.9），烧瓶上接冷凝管，在60℃水浴中回流2h，冷却至室温。取回流液体10ml.于100mL分液漏斗中，加入20mL蒸馏水混匀，每次用10mlL二氟甲烷萃取，萃取三次，合并萃取液，加入3.5g无水硫酸钠干燥过夜。取适量上层澄清萃取液进行气相色谱分析。6.3气相色谱条件bzxZ.net
按照仪器说明书对气相色谱仪进行操作。较适合的色谱条件如下：推荐色谱柱：DB-5MS，30mX0.25mmX0.25μm；-.-预柱：空白毛细管柱，2m×0.25mm；--进样口：280℃；
·检测器：FID,280℃；
--载气：氮气（纯度99.999%）；--柱流量：2.0mL/min，恒流；
-\进样量：1μul；
---分流比：5：1；
---程序升温：45℃保持2min，以6℃/min的升温速率升至280℃，保持20min；--分析时间约为40min。
6.4标准曲线的制作及样品多元酸含量的测定分别取多元酸标准溶液（4.10)125μL、250μL、500μL、1ml、2mL、5mL于100ml平底烧瓶中，各加人200μL已二酸内标溶液（4.9）和40mL5%硫酸-甲醇（体积分数）溶液（4.8），在60℃水浴中回流2h，冷却至室温。取回流液10mL于100mL.分液漏斗中，加人20mlL蒸馏水混匀，每次用10mL二氟甲烷萃取，萃取三次，合并萃取液，加入3.5g无水硫酸钠干燥过夜。取适量萃取液进行气相色谱分析（多元酸标样色谱图参见附录A中图A.1)，以各多元酸相应面积与内标相应面积之比为横坐标，以各多元酸浓度与内标浓度之比为纵坐标绘制标准曲线。对校正数据进行线性回归（R2>0.99），然后测定烟草样品，并根据样品中多元酸的峰面积计算每一烟草样品中三种多元酸的含量。每个试样应平行测定两次（典型烟草样品中多元酸色谱图参见附录A中图A.2)。7结果计算与表述
以干基计的三种多元酸的含量按式（1)计算得出：w=
式中：
(k.会+B.)×ms
mx(1--)
w-试样中多元酸的含量，单位为毫克每克(mg/g)；k：·标准工作曲线的斜率；
A；--各有机酸的峰面积；
A。一—内标物的峰面积；
B，-标准工作曲线的截距；
ms—-内标物的质量，单位为毫克（mg)；m-.-试样的质量，单位为克（g)；w1—-试样中的水分含量，%。
以两次测定的平均值作为测定结果，结果精确至0.1mg/g。精密度、回收率
本方法的精密度、回收率结果见表1。表1方法精密度、回收率结果
低浓度
多元酸
苹果酸
柠檬酸
检测报告
加人量/
回收率/
检测报告应包括以下内容：
样品的唯一性资料；
中浓度
加人量/
--参照本标准所使用的试验方法；回收率/
高浓度
加入量/
检测结果，包括各单次测定结果及其平均值；一-与本标准规定的分析步骤的差异；*\-在检测中观察到的异常现象；一-检测日期；
-一-检测人员。
回收率/
平均回收率/
YC/T288—2009
变异系数/
YC/T288—2009
A.1多元酸标准溶液色谱图，见图A.1响应值，
附录A
（资料性附录）
色谱图示例
草果酸
内标（已二酸）
A.2样品溶液分析色谱图示例见图A.2。响应值
YC/T288-2009
打印H期：2010年3月12H
多元酸标准溶液色谱图
草果酸
内标(己二酸）
柠橡酸
柠橡酸
典型烟草样品中多元酸色谱图
版权专有侵权必究
书号：155066·2-19718
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