本标准规定了工业酶制剂的试验方法。本标准适用于工业酶制剂的检测。 QB/T 1803-1993 工业酶制剂通用试验方法 QB/T1803-1993 标准下载解压密码：www.bzxz.net

中华人民共和国轻工行业标准
工业酶制剂通用试验方法
General methods of determinationfor industral enzymes
1主题内容与适用范围
本标准规定了工业酶制剂的试验方法。本标准适用于工业酶制剂的检测。2引用标准
GB 601
GB1250
化学试剂滴定分析(容量分析)用标准溶液的制备试验方法中所用制剂及制品的制备化学试剂
化学试剂酸碱指示剂pH变色域测定通用方法极限数值的表示方法和判定方法GB 4789.2
GB 4789. 3
GB 4789. 4
GB 4789. 15
GB 6004
GB 6682
GB 8170
GB 8451
GB 9721
食品卫生微生物学检验菌落总数测定食品卫生徽生物学检验大肠菌群测定食品卫生微生物学检验沙门氏菌检验食品卫生微生物学检验
霉菌和酵母数测定
试验筛用金属丝编织方孔网
实验室用水规格
数值修约规则
食品添加剂中重金属限量试验法化学试剂分子吸收分光光度法通则（紫外和可见光部分）3总则和基本要求
3.1总则
3.1.1方法中所采用的名词术语，计量单位应符合国家规定的标准。QB/T1803—1993
3.1.2方法中所用的各种分析仪器（如：分析天平、酸度计、分光光度计和紫外分光光度计等）要按时检定；所用的滴定管、移液管、容量瓶等器具应按有关检定规程定期校正。3.1.3方法中所用的“仪器”为试验中所必须使用的特殊仪器，一般实验仪器不再列人。3.1.4方法中所用的水，在未注明其它要求时，应符合GB6682中三级（或以上）规格要求。3.1.5方法中所用的试剂,在未注明其它规格时，均指分析纯（A.R）。3.1.6方法中的溶液”，除另有说明外，均指水溶液“稀释至刻度”是指用水稀释定容至刻度。同一检测项目，有两个或两个以上试验方法时，各实验室可根据各自条件选用，但以第一法为仲3.1.7「
裁法。
3.1.8理化要求以实测数据报告其试验结果，数据的计算与取舍，遵照GB8170执行；极限值的判定中华人民共和国轻工业部1993-07-29批准1994-03-01实施
QB/T 1803- 1993
按GB1250中修约值比较法进行，结巢的有效数字要与技术要求相-致。3.2基本要求
3.2.1测定样品，必须做平行试验。3.2.2标推溶液的浓度，般采用物质的量浓度，单位为摩尔每升或摩尔每立方米表示，如：盐酸标准溶液Cc(HCI)-0. 1mo1/L1。
3.2.3试验中所用玻璃器，用前领以铬酸洗涤液或合成洗涤剂漫泡，用自来水冲洗，再用蒸馏水洗干净。
3.2.4试验方法中吸取或称量时的有效数字，表示要求达到的精确度。4外观及气味检查
取固体酶样（或10ml.液体酶）2g倒入25mL干燥小烧杯中，置于鼻下先膜其气味，然后，再目视检查外观，作好检查记录。
5酶活力的试验方法
酶活力的测定，见附录A（补充件）。6干燥失重的试验方法
在常压下，将试样置事103C士2C电热干燥箱中烘干2h，用称量法测定其失去挥发物的质量，以百分数表示。
6.2仪器和设备
6.2.1电热干燥箱103℃土2℃
6.2.2称量瓶25mmX40mm。
6.2.3干燥器以变色硅胶作干燥剂。6.2.4分析天平感量0.1mg。
6.3分析步骤
用烘干至恒重的称量瓶称取酶样约.2g，精确至0.0002g，置于103C2C电热干燥箱中将盖取下，侧放在称量瓶旁，烘干2h，取出，加盖，放入干燥器中冷却至室温（约30min），称量。6.4计算
m2×100
武中：X样品的干燥失重，%（m/m）m.-干燥前，称量瓶加样品的质量，g;m2\干燥后，称量瓶加样品的质量，gm称量瓶的质量。。
所得结果表示至一位小数。
6.5结果的允许差
平行试验相对误差不得超过0.5%。7细（粒）的试验方法
7.1原理　
取庭量的酶样，用规定的标准筛进行筛分，称量，计算通过标准筛酶样的质量占总取样量的百分数（或计算双层筛中间物质量占总取样量的百分数）。118
7.2仪器和设备
7.2.1标准试验筛
QB/T 1803-1993
SSW1.18/0.630mmGB6004（相当于原14目）SSW0.80/0.450mmGB6004（相当于原20目）SSW0.40/0.250mmGB6004（相当于原39目）SSW0.25/0.160mmGB6004（相当于原62目）7.2.2物理天平感量为0.2g。
7.3分析步骤
7.3.1称取固体酶样100g，精确至0.2g。7.3.2将规定的标准筛装上筛底盘，然后把称好的样品全部转人标准筛上，加盖，振荡筛分5min（并不时敲打筛椰），静置2min，取下上盖，小心将筛上物全部转人到已知质量的烧杯中，用天平称量，按式（2）。计算。
7.3.3洗涤剂用酶按产品标准中粒度规定，采用上、下限双层筛进行筛分，称取双层筛的中间物（即下层筛的筛上物）质量，按式（3）计算。7.4计算
100m×100=100-m
式中：X,一--样品的细度，%(m/m);m样品的粒度，%（m/m）；
筛上物（或中间物)的质量，g；-取样量，g。
所得结果表示至整数。
7.5结果的允许差
平行试验相对误差不得超过1%。8容重的试验方法
8.1原理
（3）
量取固体酶样（或液体酶）100mL，在20℃，称其质量，计算单位体积酶的质量，即为样品的容重，以g/mL表示。
8.2仪器和设备
8.2.1恒温水浴
20℃±0.1℃。
8.2.2分析天平感量为0.1mg。
8.2.3容量瓶100mL（准确校正过）。8.3分析步骤
用一个洁净、干燥的已知质量的100mL容量瓶，取下瓶塞，在上口处，放一个三角玻璃漏斗，将酶样（20℃C）自然地缓缓地注人容量瓶中（不要），直至刻度。取下三角漏斗，加盖瓶塞，称量。8.4计算
式中：X
样品的容重，g/mL;
容量瓶加样品的质量，8；
容量瓶的质量，g；
（4）
100一-取样体积，mL。
所得的结果表示至二位小数。
8.5结果允许差
平行试验相对误差不得超过5%。9pH 值的试验方法
9.1原理
QB/T 1803-1993
将指示（玻璃）电极和参比（甘汞）电极浸入被测样液中，构成一个原电池，其电动势与溶液的pH值有关，通过测量原电池的电动势即可得出溶液的pH值。9.2试剂和溶液
9.2.1酒石酸盐标准缓冲溶液用无二氧化碳水溶解外消旋的酒石酸氢钾（KHC,H,O）,并剧烈振摇至饱和溶液。25℃时，pH=3.56。9. 2. 2 磷酸盐标准缓冲溶液称取磷酸二氢钾(KHzPO,)3. 40g 和磷酸氢二钠(Na2HPO.,)3.55g.溶于无二氧化碳的水中，并稀释至1000mL。25℃时,pH=6.86。磷酸二氢钾和磷酸氢二钠须预先在120℃士10℃干燥2h。
也可用专供校准用的混合磷酸盐 pH 缓冲剂(25℃pH=6.864)。9.2.3硼酸盐标准缓冲溶液称取四硼酸钠(Na2B,O，10H20)3.81g,溶于无二氧化碳水中,并稀释至1000mL，此溶液浓度c(NazB,O，·10H,0)=0.01mol/L。25℃时，pH9.18。存放时应防止空气中二氧化碳进入。
也可用专供校准用的硼砂pH缓冲剂(25℃pH=9.18)配制。9.2.4氢氧化钙标准缓冲溶液于25℃，用无二氧化碳水溶解氢氧化钙制成饱和溶液，其浓度c［1/2Ca（OH)23应在0.0400~～0.0412mol/L。存放时应防止空气中二氧化碳进入。一且出现混浊，应奔去重配。25℃时,pH=12.45。
9.2.5水符合GB6682中三级水规格。9.3仪器
9.3.1pH计分度值为0.02pH单位并应备有电磁搅拌器。9.3.2指示（玻璃)电极用前须在水中浸泡24h以上，用后应立即清洗，并漫人水中，9.3.3参比（饱和甘汞）电极使用时电极上端小孔的胶皮塞必须拔出，以防止产生扩散电位，影响测定结果。电极内氟化钾溶液中不能有气泡，以防止断路。9.4分析步骤
9. 4. 1将温度补偿旋钮调至 25℃，用接近于被测溶液 pH 值的两种标准缓冲溶液校正 pH 计,定位。9.4.2用水冲洗电极，再用样液洗涤电极，调整样液温度并将温度补偿调至 25℃C，测定样液的 pH值。重复测定操作，直到pH值读数稳定lmin为止。所得结果表示至一位小数。
9.4.3结果的允许差
平行试验之差不得超过 0. 1pH。10 洗涤剂用酶谢剂用解(溶解)时间的试验方法10.1原理
称取固体酶样1g，放入一定量的水中，在规定的温度与搅拌速度下，记录其在水中全部崩解（溶解）所需的时间。
10.2仪器
10.2.1恒温水浴30℃±0.2℃。
10.2.2电磁搅拌器（带温控的）。10.2.3分析天平感量为0.1mg。
10.2.4秒表。
10.3分析步骤
QB/T 1803—1993
称取固体酶样1.000g，精确至0.001g，置于事先盛有100mL30℃士0.2℃水的150mL烧杯中，放人一枚转子，置于30℃电磁搅拌器上，立刻计时，以中速搅拌，记录样品在水中全部期解（溶解）的时间。先作预备试验，每隔30s，停止搅拌观察一次，记录直至全部期解（溶解）所需的时间。正式试验时，根据预备试验的结果，按预测的时间停止搅拌，观察并记录在水中全部崩解（溶解）的时间。所得结果表示至秒。
10.4结果的允许差
平行试验之差不得超过 30s。
11酶活力保存率的计算方法
11.1原理
根据标签上标示的酶活力和实测的酶活力，计算出实测酶活力为标示酶活力的百分数。11.2酶活力保存率的计算
式中：X—样品的酶活力保存率，%；X
E,--—样品的实测酶活力，u/g(u/mL)E——样品的标示酶活力，u/g(u/mL)。所得结果表示至整数。
12卫生要求的检测
12.1重金属的测定，按GB8451进行。12.2细菌总数的测定，按GB4789.2进行。12.3大肠菌群的测定，按GB4789.3进行。×100
12.4菌和醇母菌的测定，按GB4789.15进行。12.5沙门氏菌的检验，按GB4789.4进行。（5）
A1~-淀粉酶
A1.1定义
QB/T18031993
附录A
酶活力的试验方法
（补充件）
1g固体酶粉（或1mL液体酶），于60℃，pH一6.0条件，1h液化1g可溶性淀粉：为1个活力单位，以u/g(u/mL)表示。
A1.2原理
α-淀粉酶能将淀粉分子链中的α1，4葡糖苷键滩机切断成长短不的短链糊精，少蟹麦芽糖和葡葡糖，而使淀粉对碘呈蓝紫色的特鼻性反应逐渐消失，呈红棕色，其颜色消失的速度与酶活性有关，故可通过固定反应后的吸光度计算其酶活力。A1.3试剂和溶液
A1.3.1原碘液称取碘（I)11g、碘化（KI)22g，用少量水使碘完全溶解，然后定容至500mL，贮于粽棕色瓶中。
A1.3.2稀碘液吸取原碘液（A1.3.1)2.00mL，加碘化钾20g用水溶解并定容至500mL，贮于棕色瓶中。
A1.3.320g/L可溶性淀粉溶液称取可溶性淀粉（以绝干计）2.000g精确至0.001g，用水调成浆状物，在搅动下缓缓倾入70ml沸水中，然后，以30mL水分几次冲洗装淀粉的烧杯，洗液并人其中，加热至完全透，冷却，定容至100mL。此溶液需要当天配制。注：1）采用浙汇菱潮食品化工联合公司生产的可溶性淀粉。A1.3.4磷酸缓冲液（pH6.0）称取磷酸氢二钠（NazHPO.·12H2O)45.23g、柠檬酸（CHO*H,0)8.07g，用水溶解并定容至1000mL。配好后用pH计较正。A1.4仪器和设备
A1.4.1分光光度计应符合GB9721的有关规定。A1.4.2温水浴60℃±0.2℃。
A1.4.3秒表。
A1.4.4试管25mmX200mm，
A1.5分析步骤
A1.5.1待测酶液的制备
称取酶粉1~2g，精确至0.0002g（或吸敢液体酶1.00mL），先用少量的磷酸缓冲液（A1.3.4）溶解，并用玻璃搅拌棒捣研，将上清液小心倾人容量瓶中，沉澈部分再加入少量缓冲液，如此捣研3~4次，最后全部移人容量瓶中，用缓冲液定容至刻度（将估计酶活力除以4，即酶活力应在3.75.6u/mL范圈内），摇勾。通过四层纱布过滤，滤液供测定用。A1.5.2测定
A1.5.2.1吸取可溶性淀粉溶液（A1.3.3）20.0M于试管（A1.4.4）中，加人缓冲液（A1-3.4）5.00ml，摇匀后，f60℃±0.2℃恒温水浴中预热5min。A1.5.2.2加人稀释好的待测酶液（A1.5.1）1.00mL，立刻计时，匀，谁确反应5mn。A1.5.2.3立即吸取反应液（A1.5.2.2)1.00mL于稀碘液（A1.3.2)5.00mL中，摇匀，并以稀碘液作空自，于660nm波长下，用10mm比色血，迅速测定其吸光度（A）。根据其吸光度查表A1，求得测试酶液的浓度（）
吸光度(4)
QB/T 1803--1993
、吸光度与测试α-淀粉酶酶浓度对照表表A1
酶浓度（e）
4、669
吸光度(A)
酶浓度（c）
缎光度（A）
浓度（）
4、244
4、140
吸光斑A)
酶浓度(c）
QB/T1803--1993
表A1（续）
吸光度（A）
酶浓度(c）
赣光度（A)
酶浓度(t)
3，744
吸光度(A)
酵浓度(e)）
QB/T 1803-1993
表A1（续）
吸光度(A)
酶浓度(c)
吸光度（A)
酶浓度(c)
3，364
吸光度(A)
酶浓度(c)）
QB/T 1803--- 1993
表A1（续）
吸光度(A)）
酶浓度(c）
吸光度（A）
酶浓度（c）
吸光度（A）
A1.6计算
式中：X
酶浓度(c)
QB/T1803—1993
表A1（完）
吸光度(A)
样品的酶活力，u/g（u/mL）；
测试酶液的浓度，u/mL；
-样品的稀释倍数。
所得结果表示至整数。
酶浓度（c）
吸光度（A)此内容来自标准下载网
酶浓度（c）
.....(A)
A1.7结果的允许差
平行试验相对误差不得超过2%。A2糖化酶
A2.1定义
QB/T1803-1993
1g固体酶粉（或1mL液体酶），于40℃、pH一4.6的条件下,1h分解可溶性淀粉产生1mg葡萄糖，即为一个酶活力单位,以u/g(u/mL)表示。A2.2原理
糖化酶有催化淀粉水解的作用，能从淀粉分子非还原性末端开始，分解α-1，4葡药糖苷键生成葡药糖。葡萄糖分子中含有醛基，能被次碘酸钠氧化,过量的次碘酸钠,酸化后析出碘，再用硫代硫酸钠标准溶液滴定，计算出酶活力。
A2.3试剂和溶液
A2.3.1乙酸--乙酸钠缓冲溶液(pH=4.6)称取乙酸钠（CH:COONa·3H2O)6.7g，溶于水中，加冰乙酸（CH.COOH)2.6mL，用水定容至1000mL。配好后用pH计校正。
A2.3.2硫代硫酸钠标准溶液c(NazS,0,)=0.05mol/L按GB601配制与标定。
A2.3.3碘溶液c(1/2I2)0.1mol/L按GB601配制与标定。
A2.3.4氢氧化钠溶液c(NaOH)=0.1mol/L按GB601配制。
A2.3.5200g/L氨氧化钠溶液
称取氢氧化钠20g，用水溶解并定容至100mL。A2.3. 6硫酸溶液c(1/2H,SO,)2mol/L量取浓硫酸（密度为1.84)5.6mL，缓缓注人80mL水中，冷却后，定容至100mL。A2.3.720g/L可溶性淀粉2液溶
同A1.3.3。
注：2）采用渐江菱潮食品化工联合公司生产的可游性淀粉。A2.3.810g/L淀粉指示液
按GB 604配制。或将20g/L可溶性淀粉溶液稀释一倍。A2.4仪器和设备
A2.4.1恒温水浴
A2.4.2秒表。
40℃±0.2℃.
50mL。
A2.4.3比色管
A2.5分析步骤
A2.5.1待测酶液的制备
称取酶粉 1~2g，精确至 0.0002g（或吸取液体酶1.00mL),先用少量的乙酸缓冲液（A2.3.1)溶解，并用玻璃搅拌棒捣研，将上清液小心倾人容量瓶中。沉渣部分再加人少量缓冲液，如此捣研3～4次，最后全部移人容量瓶中，用缓冲液定容至刻度（估计酶活力按表A2相对应稀释倍数，使酶活力在100～250u/mL范围内），摇勾。通过四层纱布过滤，滤液供测定用。128
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