WS/T 553-2017 人群维生素A缺乏筛查方法 WS/T553-2017 标准压缩包解压密码：www.bzxz.net

ICS11.020
中华人民共和国卫生行业标准
WS/T553—2017
人群维生素A缺乏筛查方法
MethodforVitaminAdeficiencyscreening2017-08-01发布
2018-02-01实施
中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会发布前言
本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。WS/T5532017
本标准主要起草单位：中国疾病预防控制中心营养与健康所、首都儿科研究所、北京大学医学部公共卫生学院、浙江省疾病预防控制中心。本标准主要起草人：霍军生、朴玮、丁钢强、孙静、黄建、王丽娟、唐艳斌、陈頔、李瑾、高洁、张霆、林晓明、李可基、章荣华。1范围
人群维生素A缺之筛查方法
WS/T553—2017
本标准规定了人群维生素A缺乏筛查的指标、检测方法及相应的维生素A缺乏的判定界值。本标准适用于人群维生素A缺之的判定，个体维生素A缺之的临床诊断需要结合临床，规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。WS/T225临床化学检验血液标本的收集与处理3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。3.1
维生素AvitaminA
享retinol
视黄醇
紫萝酮衍生物的总称。一种脂溶性维生素。有维生素A及维生素A两种3.2
维生素A缺乏vitaminAdeficiency人体内维生素A水平不足以维持正常生理功能，血清（血浆）中视黄醇水平儿童（6岁及以下）低于0.35umo1/L，6岁以上儿童及成人低于0.70μmol/L，并可能出现眼、皮肤等的病理改变。3.3
维生素A边缘型缺乏
Emarginal vitaminAdeficiency人体内维生素A水平可以维持正常生理功能，但是补充维生素A后血清（血浆)中视黄醇水平上升。人群维生素A边缘型缺乏和缺乏判定标准以单位体积血清（血浆）视黄醇含量作为维生素A缺乏筛查指标，当实测的血清（血浆）视黄醇含量小于相应参考值时，即判定为相应维生素A边缘型缺乏或者缺乏，判定指标及判定界值见表1。1
维生素A状况
儿童（6岁及以下）
6岁以上儿童及成人
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人群维生素A边缘型缺乏和缺乏的判定指标及判定界值血清（血浆）视黄醇含量
边缘型缺乏/（μmol/L）或（μg/mL）≥0.35~<0.70,
≥0.70～<1.05,
注：转换系数1mol视黄醇=286.45g视黄醇。人群维生素A缺乏公共卫生问题等级判定标准≥0.10～<0.20
≥0.20～<0.30
缺乏/（μumol/L）或（μg/mL）<0.35,
在1岁及以上被评估人群中，计算血清（血浆）视黄醇含量<0.70μmol/L人数比例，根据维生素A
缺乏公共卫生问题判定标准对该人群的维生素A缺乏的公共卫生问题严重程度进行判定。判定问题等级及判定值见表2。
维生素A缺乏公共卫生问题判定标准表2
公共卫生问题等级
注1：适用于年龄≥1岁人群。
注2：维生素A缺乏判定标准<0.70umol/L血清（血浆）维生素A测定方法
流行率
≥2%~≤10%
>10%~<20%
≥20%
按附录A规定的血清（血浆）视黄醇测定方法-高效液相色谱法（HPLC）进行测定2
A.1原理
附录A
（规范性附录）
血清（血浆）视黄醇测定方法-高效液相色谱法（HPLC）WS/T553—2017
血清（血浆）中加入内标视黄醇醋酸酯，经正已烷萃取处理，使用高效液相色谱C18反向柱进行分离后，经紫外检测器进行定量检测。2试剂和材料
除非另有规定，本方法所用均为色谱纯试剂和蒸馏水或相当纯度的水（HO）。A.2.1无水乙醇（C2H0）
A.2.2甲醇（CH40）。
A.2.3正已烷（C6H14）。www.bzxz.net
A.2.4硝酸（HNO3）。
A.2.5视黄醇标准品（C20H300）A.2.6视黄醇醋酸酯标准品（C22H3202）：A.2.7高纯氮气（N2）。
A.3仪器
A.3.1高效液相色谱仪带紫外分光检测器。A.3.2氮吹仪。
A.3.3离心机：转速≥5000r/minA.3.4天平：感量为0.1mg。
A.3.5紫外分光光度计。
A.4样本采集和保存
参照WS/T225进行静脉血采集、血清（血浆）分离和血样的保存。注：血样的采集和前期处理均须在避光或红光环境下进行，以免血样中视黄醇的含量发生变化。A.5
分析步骤
A.5.1视黄醇标准品储备液的配制A.5.1.1取一定量的视黄醇标准品，放入10mL容量瓶中，用少量无水乙醇充分溶解后定容至10mL，制成视黄醇标准品储备液。
吸取100uL视黄醇标准品储备液，置于10mL容量瓶中，加入无水乙醇定容到10mL（重复两次），A.5.1.2
WS/T553—2017
A.5.1.3采用紫外分光光度计于325nm波长处，检测视黄醇标准品储备液的含量，空白试剂为无水乙醇。用比吸光系数计算出标准储备液中视黄醇的浓度A.5.1.4储备液中视黄醇含量按式(A.1)计算。C,=×二×10.00×103
式中：
Ci一视黄醇标准品储备液浓度，单位为毫克每毫升（mg/mL)：A一视黄醇的平均紫外吸光值；
E一视黄醇的1%比吸光系数（视黄醇为1835）；V一加入标准品储备液的量，单位为微升（mL）：10.00一标准品储备液最终稀释体积，单位为毫升（mL）。以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留三位有效数字。注1：视黄醇标准品储备液须-20℃以下避光储存，临用前需用紫外分光光度法标定其准确浓度注2：配制所用的所有容器均经硝酸浸泡24h，并完全洗净晾干。A.5.2视黄醇醋酸酯内标的配制
A.5.2.1采用感量为0.1mg天平，准确称量视黄醇醋酸酯标准品82.0mg，倒入10mL容量瓶中，无水乙醇充分溶解后定容至10mL，配制成视黄醇醋酸酯内标浓溶液。A.5.2.2使用高效液相色谱仪，在325nm处检测视黄醇醋酸酯内标浓溶液的峰面积后，用无水乙醇稀释至浓度约为6μg/mL的视黄醇醋酸酯内标工作溶液A.5.3标准曲线的绘制
A.5.3.1视黄醇标准曲线的配制
分别吸取标定的视黄醇标准储备液置于10mL棕色容量瓶中，再加入等体积视黄醇醋酸酯内标工作液置于棕色容量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，使视黄醇标准液的浓度分别为1.00μg/mL，0.50μg/mL，0.30μg/mL，0.20μg/mL，0.10μg/mL和0.05μg/mL。待测，上机。注：所有标准品均保存于-20℃低温冰箱中。A.5.3.2高效液相色谱参考条件
高效液相色谱参考条件应符合如下要求：预柱：4.0mm×4.5cm，10μm。
分析柱：c18柱，4.6mmx25.0cm，5μm。-流动相：甲醇：水=98：2。流动相使用前充分混匀，并在临用前脱气。一流速：1mL/min。
一检测波长：325nm。
一柱温：28℃±1℃。
一进样量：20μL。
A.5.3.3视黄醇标准曲线的绘制
WS/T553-2017
分别取视黄醇标准系列溶液由低至高进行测定，每次测定均加入与标准品中内标浓度相同的视黄醇醋酸酯内标进行测定。以视黄醇标准系列溶液浓度为横坐标，以视黄醇峰面积与视黄醇醋酸酯内标的峰面积之比为纵坐标绘制标准曲线，进行线性回归（r2≥0.999）。内标测定两个平行样。A.5.4血样中视黄醇的测定
A.5.4.1冻存血清（血浆）血样需要在室温，避光条件下进行自然解冻，并震荡混匀。新鲜血清（血
浆）血样可直接进行下一步操作。A.5.4.2吸取血清（血浆）和内标各100uL至1.5mL离心管中，振荡混匀30s，加1mL正已烷萃取，振荡1min。
A.5.4.35000r/min下离心5min，取出后吸取上清液800μL至另一1.5mL离心管中。A.5.4.4氮气吹干后加入200μL乙醇溶解，振荡混匀30s，离心5min，5000r/min。A.5.4.5吸取150uL样本溶液，使用高效液相色谱仪进行检测。根据色谱图中样品视黄醇的峰面积与视黄醇醋酸酯内标峰面积的比值，在标准曲线上求出样品中视黄醇的含量。5
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