GB∕T 2930.7-2017 草种子检验规程 种及品种测定 GB∕T2930.7-2017 标准下载解压密码：www.bzxz.net

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GB/T2930.7—2017
代替GB/T2930.7—2001
草种子检验规程
种及品种测定
Rules of seed testing for forage, turfgrass and other herbaceous plantSpecies and variety testing
(The International Seed Testing Association,International rules forseed testing,edition 2012,Chapter 8.Species and variety testing,MOD)2017-11-01发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
2018-05-01实施
GB/T2930《草种子检验规程》共分为11个部分：GB/T2930.1草种子检验规程扦样：GB/T 2930.2
GB/T2930.3
GB/T2930.4
GB/T2930.5
GB/T2930.6
GB/T2930.7
GB/T 2930.8
GB/T 2930.9
GB/T2930.10
GB/T2930.11
草种子检验规程
净度分析；
草种子检验规程
草种子检验规程
草种子检验规程
草种子检验规程
草种子检验规程
草种子检验规程
草种子检验规程
其他植物种子数测定；
发芽试验；
生活力的生物化学（四唑)测定；健康测定；
种及品种测定；
水分测定；
重量测定；
草种子检验规程
草种子检验规程
本部分为GB/T2930的第7部分。
包衣种子测定；
检验报告。
本部分按照GB/T1.1一2009给出的规则起草GB/T2930.7—2017
本部分代替GB/T2930.7一2001《牧草种子检验规程种及品种鉴定》。本部分与GB/T2930.7一2001相比，除编辑性修改外主要技术变化如下：将标准名称由“牧草种子检验规程种及品种鉴定”更名为“草种子检验规程种及品种测定”
（见封面，2001年版的封面）；在前言中，增加了标准编制所依据的起草规则（见前言）；删除了附录性质的陈述（见2001年版的前言）；
删除了“ISTA前言”（见2001年版的ISTA前言）；删除了“检验目的”（2001年版的第3章）；在“术语和定义”中增加了“实物标样”和“参照物标样”（见3.4和3.5）；在“原则”中增加了“特定性状的测定原则”（见4.3）；修改了“送验样品”的重量规定（见6.1和表1，2001年版的7.1和表1）；增加了“种子测定”和幼苗测定”中“测定方法”的标准方法名称（见6.2.2和6.3.2）；在“田间小区植株测定”中增加了“试验样品”的说明（见6.5.1)；在“结果计算和表示”中修改了“种子、幼苗和植株”计算和表示（见7.1，2001年版的8.1）；增加了“种及品种测定的方法”（见第8章）；在“形态测定”中增加了“苏丹草品种形态测定”和“首着属和草木属种子的荧光测定”的内容［见8.1.1d)和见8.1.1f]]；
增加了“玉米品种真实性及杂交种纯度的超薄层等电聚焦电泳（UTLIEF)的测定方法”的内容（见8.1.5）；
在“幼苗测定的方法”中增加了“甜菜属下胚轴测定”的内容（见8.2.2）；在“幼苗测定的方法”中增加了“紫花首猎和草木幼苗的分子测定方法”（见8.2.5）在“幼苗测定的方法”中增加了“高丹草和高粱幼苗的分子测定方法”（见8.2.6）。本部分使用重新起草法修改采用国际种子检验协会（InternationalSeedTestingAssociation，ISTA)发布的《国际种子检验规程第8章：种及品种测定》（2012年版）。1
HiiKAoNiKAca
GB/T2930.7—2017
本部分与ISTA《国际种子检验规程第8章：种及品种测定》（2012年版）相比在结构上有较多调整，附录A中列出了本部分与ISTA《国际种子检验规程第8章：种及品种测定》（2012年版）的章条对照一览表（见表A.1）
本部分与ISTA《国际种子检验规程第8章：种及品种测定》（2012年版）相比存在技术性差异，这些差异涉及的条款已通过在其外侧页边空白位置的垂直单线（I）进行了标示，附录B中给出了相应技术性差异及其原因的一览表（见表B.1)。本部分由中华人民共和国农业部提出。本部分由全国畜牧业标准化技术委员会（SAC/TC274）归口。本部分起草单位：兰州大学草地农业生态系统国家重点实验室、农业部牧草与草坪草种子质量监督检验测试中心（兰州）、全国草产品质量监督检验测试中心。本部分主要起草人：王彦荣、张吉宇、刘文献、刘志鹏、段廷玉、余玲、李玉荣、孙建华、胡小文、刘亚洁。
本部分所代替标准的历次版本发布情况为：GB/T2930.7—2001。
-iiiKAoNniKAca
1范围
草种子检验规程
种及品种测定
GB/T2930的本部分规定了种及品种的测定程序和方法，GB/T2930.7—2017
本部分适用于牧草、草坪草、饲料作物等草种子质量检验的种及品种鉴定和特定形状测定。2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件GB/T2930.1草种子检验规程扦样GB/T2930.2草种子检验规程净度分析GB/T2930.4草种子检验规程发芽试验GB/T8170数值修约规则与极限数值的表示和判定3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。3.1
genuineness of seed
种子真实性
种及品种与文件记录（如标签等）是否相符。3.2
variety purity
品种纯度
品种在特征特性方面典型一致的程度。用本品种的种子数占供检样品种子数的百分率表示。3.3
变异株off-type
个或多个性状（特征特性)与原品种育成者所描述的性状明显不同的植株。3.4
authentic standard sample
实物标样
具有特定性状的真实可靠的种或品种的种子样品。3.5
参照物标样
standard reference
利用接合型、同工酶、种子贮藏蛋白质、DNA带型、等位基因图谱或核苷酸序列对种或品种特征特性的真实描述。
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GB/T2930.7—2017
4原则
4.1基本原则
只有当样品的送验者对报检种或品种及其特定性状已有说明，并且具有一个可供比较的可靠实物标样或参照物标样时，才可测定。当有实物标样时，试验样品和实物标样的处理和测定方法应相同在特殊情况下，如果测定的结果确实可信（如测定染色体倍数），则不必一定和实物标样或参照物标样作比较。
2种及品种的鉴定原则
当种或品种的一个或几个鉴别性状相当一致时（例如自花授粉的种），即可以确定试验样品与实物标样的一致性，并在可能的情况下对异种或异品种的种子、幼苗或植株进行计数和确定一致程度。当种或品种不够一致时（如异花授粉的种），则对明显的变异株进行计数，并对试验样品的真实性做出总体判断。
4.3特定性状的测定原则
根据种子的数量，质量或提取物成分分析特定性状在试验样品中的比例，或分析特定种子批次达到标准的置信度。另外，也可根据特定性状在试验样品中的有无进行定性分析，或通过确定特定性状在试验样品中的比例进行定量分析。5试验条件
实验室
适当配备仪器，器具和试剂，以供形态、生理，细胞学及分子生物学的检测，化学测定及种子发芽使用。
5.2温室和培养箱
应配备能调节环境条件的设备，以诱导幼苗或植株待鉴别性状的发育。5.3田间小区
应具有能使幼苗或植株的鉴别性状正常发育的气候、土壤及裁培条件，并对防治病虫害有充分的保护措施。
5.4试剂
碘，碘化钾、盐酸，氯化钠、苯酚，氢氧化铵聚丙烯酰铵凝胶电泳法和超薄层等电聚焦电泳所需仪器及试剂参见8.1.3，8.1.4和8.1.5。6检验程序
6.1送验样品的重量
送验样品的最小重量应符合表1的规定。2
iiKAoNiKAca
表1种及栽培品种测定的送验样品最小重量种类
大豆属（Glycine）、豌豆属（Pisum）、野豌豆属（Vicia）、羽扇豆属（Lupinus），玉蜀泰属（Zea）及种子大小类似的其他属大麦属（Hordeum），黑麦属（Secale），燕麦属（Aena）及种子大小类似的其他属
甜菜属（Beta）及种子大小类似的其他属小粒种子的植物种
6.2种子测定
6.2.1试验样品的分取
限于实验室测定
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田间小区及实验室测定
按GB/T2930.1的规定分取试验样品，随机从试验样品中数取400粒种子，设4个重复，每个重复100粒。如果采用蛋白质电泳法，每个样品测定100粒种子；如果仅同标准值比较，后续测定每个样品可只测定50粒种子
检验特定性状时，试验样品可为净种子（见GB/T2930.2）或去除杂质（见GB/T2930.2）的整个试验样品。如果试验样品表面的灰尘，处理物以及包衣种子表面的丸化物或带状物会影响试验结果，应在检测前去除这些表面物质。
6.2.2测定方法
根据种子形态特征测定种及品种时，如有必要，可借助放大镜进行观察；测定种子色泽时，可在自然光或特定光谱（如波长为360nm的紫外灯）下观察。测定种子的化学特性时，应利用相应的试剂对种子进行处理，并对每粒种子的反应情况进行记录。测定种子分子生物学特征时，应将蛋白质从种子中分离出来并对其特征进行检测和定量分析。大麦属、燕麦属、苏丹草（Sorghumsudanense）、豌豆属、羽扇豆属、首属（Medicago）和草木（Melilotus）属的种子形态测定，羽扇豆属、燕麦（A.satiua）、大麦（HordeumUulgare）、黑麦草（Loliumperenne）、普通早熟禾（Poatriuialis）的种子化学测定，豌豆（P.satiuum）、黑麦草和燕麦品种纯度的聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）测定以及玉米品种真实性及杂交种纯度的超薄层等电聚焦电泳（UTLIEF）测定见8.1。
6.3幼苗测定
6.3.1试验样品的分取
从试验样品中随机数取400粒种子，设4个重复，每个重复100粒。测定染色体倍数时，随机选取40个细胞（10个根尖个体，每个根尖中选取4个细胞）。6.3.2测定方法
将种子置于适宜的发芽床上萌发，当幼苗达到适当的生长阶段时，对幼苗进行形态和化学鉴定。在测定染色体倍数时，将切开的根尖或其他细胞在显微镜下进行测定。甜菜属、黑麦草属（Lolium）、羊茅属（Festuca）的幼苗测定见8.2。3
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6.4温室或培养室的植株测定
6.4.1试验样品
按GB/T2930.1的规定分取试验样品，所播种的种子量应保证能长成100株植株。6.4.2测定方法
种子播种于适宜的容器内，并保持目标测定性状发育所需要的环境条件。当植株达到适当的发育阶段时，观察记载每个植株的目标测定性状。田间小区植株测定
6.5.1试验样品
每个试验样品至少播种两个重复小区。为避免失败，重复小区应适当布置在不同田块或同一田块不同位置。小区大小的确定应能为种或品种的准确鉴定提供足够的植株。小区面积因作物而不同，以10m一15m为宜。播种方式可采取条播，保证足够的行，株距离以使所要测定的性状充分发育。一般建议牧草行长为15m，行距为30cm～45cm；适当的株数为：禾谷类60株/m，豆科30株/m。为减少移栽和间苗可能引起的误差，应调整播量，使试验区和对照区植株数大约相等。必要时可采取间苗或补苗的办法。
当通过考查单株就能区别两个或更多的品种时，则应采取穴播。可在实验室或温室将种子分开播种获得单株，当植株长到适当大小时，即移栽到田间小区。如条件适宜种子可直接播在小区，后期可通过间苗使其成单株状态。各植株的间距至少达60cm。同时应栽种实物标样的单株以作对比。株数多少取决于重复次数和所用的统计处理。6.5.2测定方法
试验样品收到后，应尽快播种。不同品种植株需经过全生育期才能充分表现出差异，因此，鉴定工作应延续到整个生育期，但从开花（豆科牧草）或抽穗（未本科牧草）开始至生育终期是鉴定样品的最佳时期。在此期间应对植株进行数次观测凡可鉴别出属于另外品种或种的植株或者变异株均应计数和记载。如有可能，应在测定植株的同时，实际计算或估算小区内的植株数。7结果计算和表示
7.1种子、幼苗和植株
计算测定种或品种的种子（幼苗、植株）、其他种或品种的种子（幼苗、植株）占供检种子（幼苗、植株）的百分率。当测定的种子，幼苗或植株数少于2000时，用所发现的变异数占供检样品数的整数百分率表示；如果多于2000，则百分率取一位小数。数值修约按GB/T8170的规定进行。在实验室、温室及培养室所测定的结果应注明供检种子数、幼苗数或植株数。当测定特定性状时，测定结果填报的表述方式应与送验者要求相一致，例如，特定性状的有无、特定性状所占的比例或特定性状的真实比例达到或超过要求的置信度。
7.2田间小区测定
凡有可能，应分别计算所发现的其他种、品种、变异株数或特定性状占测定株数的百分率。对窄行条播的牧草，当难以估计每小区中鉴定植株的总数时，其结果可用播种的种子总量中所产生HiiKAoNiKAca
的变异株数或具有测定特定性状的植株数进行表示如果性状是经过测量的，还可算出平均数和其他统计数值。GB/T2930.7—2017
异花授粉的品种，通常植株性状的变异达到难以准确地确定各种异型植株的程度。此种情况下，在填写各种异型株百分率的计算结果中，应补充一些有关供检样品真实性状的适当评语。在特殊情况下，如果未设对照样品应予以注明。8种及品种测定的方法
8.1种子测定的方法
8.1.1形态测定
依据种子形态，可对种及品种进行测定的主要草种及方法如下：a）大麦属内的形态测定。测定特征为籽粒形状、外基部、籽粒颜色、腹沟基刺、腹沟宽度、小穗轴茸毛数目、侧背脉纹齿状突起、内外褶皱、鳞被形状及茸毛稀密等。b）
燕麦属内的形态测定。根据籽粒颜色特征可分为白色灰黄色，黑色等。燕麦属内和大麦属内的荧光测定：属内种及品种种子的颜色可在紫外光下加以区别，如白色燕c
麦种子显现荧光，黄色燕麦种子不显现荧光。苏丹草品种形态测定。通过种壳颜色、种子形状加以区分，种壳颜色可分为黑色、红色和黄色d)
等，种子形状有长卵形和卵圆形。e
豌菀豆属内和羽扇豆属内的形态测定。属内的一些种在种子颜色、大小和形状上存在着可供鉴别的差异，可在日光或紫外光下直接用肉眼进行观察。首属和草木棍属种子的荧光测定。送验样品按照GB/T2930.4的规定置床。种子分开排f）
列于培养皿内湿润的发芽床上。培养皿置于20℃（或25℃）恒温培养箱中培养6h～12h。首藉属种子经自然吸水或切破种皮吸水培养后，遗留在种子周围滤纸上的渗出物质在紫外光照射下可显现出黄白色、黄色或蓝白色的荧光；同样方法处理的草木棒属种子则无荧光现象产生。
8.1.2化学测定
羽扇豆属的生物碱测定
先将种子放人水中浸泡24h，然后将每粒种子切下一薄片并置于衬以白色背景的玻璃板上，加1滴3滴Lugol溶液［卢戈氏液：将1.0g碘（I)和2.0g碘化钾（KI)溶于100mL水中」。若切片产生棕红色沉淀，即表明含生物碱。记录含和不含生物碱种子数。8.1.2.2燕麦盐酸测定
当对燕麦种子荧光测定有怀疑时，特别是对经处理或恶劣气候条件下收获的种子，则可用盐酸溶液测定。将种子浸入盐酸溶液（1份38%盐酸溶液和4份蒸馏水配制而成）中6h，捞出种子置于滤纸上，使其自然风干1h，根据棕褐色或黄色进行鉴定。8.1.2.3燕麦，大麦，黑麦草和普通早熟禾等种子的苯酚测定根据种子内外染色鉴定大麦、燕麦和黑麦草种子。采用纸上法于25℃下预湿18h～24h。将种子移至经1.0%苯酚溶液（5g结晶石碳酸加人500mL蒸馏水）湿润的滤纸上室温下进行处理，燕麦2h，大麦4h，黑麦草和普通早熟禾24h，检查和记录颜色反应，并与实物标样进行比较。通常颜色分为不着色、浅褐色、褐色、深褐色、黑褐色和黑色，分别记录每重复不同颜色种子数。5
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8.1.3豌豆和黑麦草品种纯度的聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）测定方法8.1.3.1原理
由单粒豌豆种子或黑麦草种子粗粉中提取的种子蛋白质经用SDS(十二烷基硫酸钠)处理后可在不连续的SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳过程中得到分离。凝胶上的蛋白质谱带类型即能表现出品种特征。8.1.3.2器具及试剂
8.1.3.2.1仪器设备
垂直电泳设备（如PharmaciaGE2/4Bio-rad\Protean\）；离心机、离心管；天平（o.001g）；粉碎机或碾磨机；水浴锅；水泵式油泵、真空干燥器；不同规格的移液管、微量进样器、试剂瓶、烧杯、容量瓶、三角烧瓶、滴管、注射器及针头等。8.1.3.2.2试剂
所有化学试剂都应是分析纯级或更好的等级丙烯酰胺（经专门纯化后用于电泳）：亚甲基双丙烯酰胺（经专门纯化后用于电泳）（BIS）：三羟甲基氨基甲烷（Tris）；甘氨酸；盐酸（HCI)；十二烷基硫酸钠（SDS)；丙三醇；2-巯基乙醇；二甲基甲酰胺(DMF)；过硫酸按（APS)（或核黄素）;N,N,N，N\-四甲基乙二胺（TEMED)；甲醇；冰乙酸；三氯乙酸（TCA）PAGE蓝G-90（或PAGE蓝83或任何相当于考马斯亮蓝\G或R系列染料的试剂）；漠酚蓝8.1.3.2.3溶液
聚内烯酰胺凝胶电泳测定中使用的溶液包括分离胶溶液。19.6g内烯酰胺，0.26gBIS.用蒸馏水定容至90mL，4C保存。a
分离胶缓冲溶液。1mol/LTris-HCl.pH8.8:121.1gTris溶解于约750mL蒸馏水中，滴加b）
1mol/L的HCI溶液调节pH值至8.8（1mol/LHCI约为每升蒸馏水中含90mLHCI原液，滴加这种溶液药15mL），然后定容至1L，4C保存。c
浓缩胶溶液。4.0g内烯酰胺，0.07gBIS用蒸馏水定容至67.2mL：4C保存。d）浓缩胶缓冲溶液。1mol/LTris-HCl.pH6.8：30.3gTris溶解于200mL蒸馏水中，用HCl溶液调节pH值至6.8（开始滴加HCI原液约8mL，之后再用1mol/LHCl溶液加调），定容至250mL，4℃保存。
e）SDS溶液。10gSDS溶于蒸馏水中（溶解时需加温和轻摇），定容至100mL，此液可在室温下保存。如出现SDS析出，可稍加温使其重新溶解。f）
1%APS溶液。0.1gAPS溶解于10mL蒸馏水中，此溶液应在每次使用前新配。样品提取缓冲原液。在12.5mL浓缩胶缓冲溶液中加入20mL丙三醇，24.1mL蒸馏水，4gg）
SDS和12mg溴酚蓝（也可不加溴酚蓝），混合均匀后室温保存。如出现SDS析出，可稍加温使其重新溶解。
h）电泳缓冲液。3.0gTris；14.1g甘氨酸；1.0gSDS.用蒸馏水定容至1L。可稍作加温以溶解SDS
凝胶固定液。在400mL甲醇中加入100mL冰乙酸，蒸馏水定容至1L；每块凝胶约需200mL.
注：可用TCA取代冰乙酸，TCA的最终浓度控制在15%～20%之间（约2.3g）。凝胶染色液。15%TCA（375gTCA用水配溶至2.5L）；1%PAGE蓝或同类试剂的甲醇溶液j
(1g试剂溶于100mL甲醇中）；200mL15%TCA加10mL1%PAGE蓝或同类试剂的甲醇6
溶液可染色一块凝胶。
8.1.3.3程序
8.1.3.3.1豌豆种子蛋白提取
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用电动粉碎机（也可以采用研钵或类似设备）将单粒种子的子叶打碎成细粉。将种子细粉与稀释的样品提取缓冲液（17份样品提取缓冲原液：3份疏基乙醇；40份蒸馏水）以40mg：1.0mL比例在1.5mL的聚乙烯离心管中均勾混合。室温下放置约1h后用振荡器使细粉重新悬浮，并在沸水浴中加热10min（离心管盖时留一条小缝，以免管内压力升高），冷却后于18000×g条件下离心5min，取清澈的上清液用于电泳。
8.1.3.3.2黑麦草种子蛋白提取
用锤式碾磨机（也可以用滚刀式咖啡粉碎机或其他搅拌式粉碎机）将0.5g2.0g种子碾磨成粗粉后用于分析。种子粗粉与稀释提取缓冲液（17份样品提取缓冲原液；6份巯基乙醇；10份DMF；17份蒸馏水）以80mg：1.0mL比例混合进行提取。其后续处理方法与8.1.3.3.1完全相同。8.1.3.3.3凝胶制备
根据电泳设备的结构和类型安装好清洁干净的胶模。如果电泳装置是采用粘贴式密封条，则以至少提前一天安装胶模为宜。凝胶厚度以1.5mm或更薄为好。制备12.5%丙烯酰胺浓度的分离胶和5%浓缩胶方法如下：
a）分离胶。如欲制备4块凝胶（180mm×140mm×1.5mm），混合56.4mL的分离胶缓冲溶液和86.25mL分离胶溶液，于抽气瓶中抽去溶液里的空气，然后加人3.75mL1%APS1.5mL10%SDS和75μLTEMED（直接取用原液），小心混匀（勿形成泡沫）后，凝胶缓慢倒人胶模，也可用25mL的注射器灌胶，胶液灌注至距顶部3cm～4cm处（这部分将用于灌浓缩胶），在主体分离胶上部注人1cm厚的蒸馏水（或异丙醇），然后静置使其聚合（约1h）。注：如无条件抽气，则可略去这一步换用浓度高3倍的APS溶液［即3.75mL3%的APS(0.3gAPS溶解于10mL蒸馏水中。
浓缩胶。用吸管吸去分离胶表面的覆水（或异丙醇），并用稀释的浓缩胶缓冲液（将浓缩胶缓冲液与蒸馏水按1：8比例稀释)简单冲洗，小心倒去稀释液，再用滤纸吸干。欲制备4份浓缩胶，应混合10mL的浓缩胶缓冲溶液和67.2mL浓缩胶溶液，放在抽气瓶中抽气，然后加3.0mL1%APS.0.8mL10%SDS和80μLTEMED(直接取用原液）。浓缩胶倒在胶模中的上部，插入用内烯制成的梳子，确保“梳齿下方无气泡，然后静置药1h使其聚合。同样，如果采用较高浓度的APS溶液L3.0mL2%APS(0.2gAPS溶手10mL蒸馏水中）.则可省去抽气这一环节。对于浓缩胶的聚合反应，可以用0.008%核黄素溶液取代APS。胶液放在一般光线下会发生聚合，但欲使其聚合良好，需用紫外灯。确切的用量应经试验来决定，要求在30min～60min内完成聚合。建议50mL浓缩胶混合液加7.5mL核黄素溶液。8.1.3.3.4电泳
将新配制的电泳缓冲液灌至电泳槽的上槽和下槽中，拔出浓缩胶上的梳子（此胶相当稀软），用电泳缓冲液冲洗形成的小槽后并加人适量的电泳缓冲液。用进样器将样品加人小槽（即样品槽）中，进样量的多少主要由凝胶厚度和样品槽大小来决定，大多数情况下5μL～15μL较为适宜。加人5μL1%的漠酚蓝水溶液（含10%的丙三醇）于各样品槽中作为指示剂（也可预先混入样品提取缓冲原液中）。如果胶模原先用粘条密封，此时可将下方（即底部）的粘条取掉。用电泳缓冲液将样品槽充满（不要使样品液搅动）。凝胶放置于电泳槽中，开始每块胶先用25mA的电流电泳，当前沿指示剂迁移出浓缩胶后GB/T2930.7—2017
电流增加至45mA，直至漠酚蓝指示剂迁移到凝胶底部。温度应保持在15℃20℃范围.电泳缓冲液可用自来水或冷却液进行循环冷却。8.1.3.3.5固定与染色
电泳结束后将凝胶从胶模中取出，在固定液中缓缓摇动至少1h，再用蒸馏水漂洗5min，然后放置于凝胶染色液中至少2h（通常过夜）。将染色后的凝胶用蒸留水漂洗2h～3h（如果背景颜色较深，可加人TCA），然后密封于聚乙烯袋中，供检查或拍照。如果密封得当，凝胶可于4℃下保存若于个月。如果需要快速染色，凝胶可放在较高温度（80℃）下固定和染色30min，冷却后放人10%冰乙酸和35%乙醇的溶液中摇动脱色30min60min。8.1.3.4结果鉴定
通常采用比较法，即比较样品的蛋白质谱带类型是否与实物标样相一致。应在每块凝胶上都配加个已知品种样品作为对照，该对照品种应具有确定的蛋白质谱带及详尽的描述。如对照品种的谱带清晰可辨，可作为该凝胶的定性标准，对该胶进行分析比较、鉴定种子真实性及品种纯度。此外，由于每块凝胶中都有已知分子量的不同标准蛋白标记，不同的凝胶可以借其得到校核，并计算出那些主要蛋白质谱带的分子量。
8.1.4燕麦品种纯度的聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）测定8.1.4.1原理
从种子中提取出的尿素/乙二醇溶解蛋白（初级燕麦蛋白）可用pH3.2的聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE)进行分离，所产生的蛋白谱带可作为品种的“指纹”，这种“指纹”可用来鉴定未知品种，并通过分析单粒种子来测定品种的混杂程度（即对品种进行测定）8.1.4.2仪器设备及试剂
8.1.4.2.1仪器设备
使用的仪器设备同见8.1.3.2.1。8.1.4.2.2试剂
所有化学试剂都应是分析纯级或更好的等级内烯酰胺（经专门纯化后用于电泳）：亚甲基双丙烯酰胺（经专门纯化后用于电泳）：尿素：冰醋酸：甘氨酸；硫酸亚铁；抗坏血酸；过氧化氢；焦宁G（或焦宁Y）；三氯乙酸（TCA）；乙二醇；甲醇；考马斯亮蓝G250或ServaBlueG（或同类试剂）。8.1.4.2.3溶液
聚内烯酰胺凝胶电泳测定中使用的溶液包括：a）提取液。在乙二醇水溶液（乙二醇与水的体积比为75：25）中加人焦宁G（或焦宁Y)（质量体积比为0.05%）和3mo1/L的尿素（质量体积比为18%），低温保存或新配。电极缓冲溶液。冰醋酸4mL，甘氨酸0.4g，加去离子水定容至1L，低温保存。b）
凝胶缓冲溶液。冰醋酸20mL，甘氨酸1.0g，加去离子水定容至1L，低温保存。c
固定及染色液。考马斯亮蓝G250或ServaBlueG1g、甲醇250mL和TCA100g溶于800mL去离子水中。
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