本标准规定了耐高温α-淀粉酶制剂的术语与定义、技术要求、试验方法、检验规则和标志、包装、运输、贮存要求。本标准适用于以地衣芽抱杆菌(或其他变异菌株)经深层发酵培养、提纯制取的耐高温a-淀粉酶制剂。 QB/T 2306-1997 耐高温α-淀粉酶制剂 QB/T2306-1997 标准下载解压密码：www.bzxz.net

QB/T2306--1997
耐高温 α-凝粉酶制剂是一种具有较高耐热性的内切酶，其制剂有别于普通α-淀粉酶制剂。现已广泛应用于食品和其他工业。
本标准将产品分为两种剂型，三个质量等级。其中优等品和一等品用于食品工业，所以，卫生指标非等效采用1972年联合国粮农组织和世界卫生组织（FAO/WHO)于日内瓦制定的《食品工业用酶卫生要求》。由于合格品用于其它工业，所以未设立卫生指标。理化指标楚参考国外各大公司的先进企业标准，并结合我国生产实际制定的。酶活力的测定第一法为分光光度法，其吸光度与酶浓度对照表列人附录A中。附录A是“标准的附录。
测定酶活力时，底物的质量对分析结果影响很大。故本标准规定分析酶活力医统一使用渐江菱潮食品化工联合公司生产的、标有“专供酶制剂测定”用的“可溶性旋粉”试剂作底物。如暂时购不到，而使用其他广生产的“可溶性淀粉”时，厕必须做对照试验。本标推由中国轻工总会食品造纸部提出。本标准由全国食品发酵标准化中心技术归口。本标准起草单位：无星达生物工程有限公司、上海市工业微生物研究所、中国食品发酵工业研究所、天津轻工业学院、烟台星达生物工程有限公司。本标推主要起草人：徽兴云，吴炳炎、胡学智、田栖静、王福荣、单守水。97
1范围
中华人民共和国轻工行业标准
耐高温α-淀粉酶制剂
QB/T2306--1997
本标准规定了耐高温α-淀粉酶制剂的术语与定义、技术要求、试验方法、检验规则和标志、包装、运输、贮存婴求，
本标准适用手以地衣芽孢杆菌（或其他变异菌株）经深层发酵培养、提纯制取的耐高温-淀粉酶制剂。
2引用标准
下列标准所包含的条文，通过在本标准中号用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均为有效。所有标准都会被然订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。GB601-1988化学试剂滴定分析（容量分析）用标准溶液的制备GB4789-1994食品卫生微生物学检验GB/T5009.11-1996食品卫生理化检验食品中总碑的测定方法GB/T5009.12—1996食品卫生理化检验食品中铅的测定方法GB8451-1987食品添加剂中重金属限量试验法QB/T1803-1993工业酶制剂通用试验方法QB/T18041993工业酶制剂通用检验规则和标志、包装，运输、贮存3术语与定义
3.1耐离温α-淀粉酶
由精选的地衣芽孢杆菌经发酵提纯制取的、具有较高耐热性的α-淀粉酶制剂。3.2酶活力单位
在70℃、pH6.0条件下，1min液化1mg可溶性淀粉成为糊精所需要的酶量，为1个活力单位，以u/mL(u/g)表示。
4技术要求
4.1外观要求
液体剂型：褥色液体，具该酶特有的气味，允许有少量的爱聚物。固体剂型：黄褐色粉状，易溶于水。具该特有的气味，无潮解结块现象。4.2理化卫生要求
应符合表1规定。
中国轻工总会1997-06-20批准
1998-04-01实施
酶活力保存率，
酶耐热性存活率
95℃.60min
干燥失重，
容重，
保存率
细度[o.4mm（39目标准筛)的通
过率」，
重金属（以Pb计)，
铅（以Pb计)，
砷(以 As 计)，
菌落总数，个/mL(g）
大肠菌群.MPN/100mL(g）≤
沙门氏菌（25g样）
霉菌，
酵母菌，
个/mL(g）
个/mL(g)
优等品
QB/T2306—1997
液体剂型
一等品
酶活力
25℃下保存
6个月
5℃下保存
12个月
标示酶活
合格品
20 000u/mL
25℃下保存
3个月
1.15~1.25
5×104
3×103
不得检出
优等品
固体剂型
酶活力
25℃下保存25℃下保存
3个月
合格品除可用于蒸馏酒类外，不得用于其他食品工业②产品酶活力规格除20 000u/mL(u/g）外，还可按供需合同执行。5试验方法
6个月，
5℃下保存
12个月
标示酶活
20000u/g
25℃下保存
6个月
5×104
3×103
不得检出
本方法所用的水均为蒸馏水或去离子水，所用试剂在未特殊注明时均为分析纯，5.1酶活力的测定
5.1.1分光光度计法（第一法）
5.1.1.1原理
合格品
25℃下保存
6个月
α-淀粉酶能将淀粉分子链中的α-1,4葡萄糖苷键随机切断成长短不一的短链糊精、少量麦芽糖和葡葡糖，而使淀粉对碘呈蓝黑色的特异性反应，随淀粉降解蓝色逐渐减褪，渐变成红棕色，其颜色消失的99
QB/T 2306- 1997
速度与酶活性有关，故可在标准条件下，通过测定反应后溶液的圾光度计算其酶活力。5.1.1.2试剂和溶液
a）原液
称取碘化钾22.0g溶于300ml.水中，加人碘11.0g，在搅拌下使其落解，然后移人500ml.容量瓶中，用水定容，贮于棕色瓶中备用（每月制备一次）。b）稀碘液
称取碘化钾20.0g溶于约300mL.水中，准确加人原碘液2.00mL，全部移人500mL容量瓶中，用水定容，贮于棕色瓶中备用（须当天配制）。c）20g/L可溶性淀粉溶液
称取可溶性淀粉（以绝干计）2.0000g，精确至0.0001g，用水调成浆状物，在搅动下缓缓倾人70mL沸水中，然后，以30mL水分儿次冲洗盛淀粉的小烧杯，洗液并人其中，加热煮沸2mn直至完全透明，冷却至室温，全部移人100mL容量瓶，用水稀释至刻线。此溶液必须当天配制。d）磷酸缓冲液（pH一6.0）
称取磷酸氢钠（Na2HPO.·12H20)45.23g，柠檬酸（C.H.O,·H,O)8.07g，用水溶解并定容至1 000ml。配好后，用pH计校正。e）盐酸溶液c（HC）=0.1mo1/，按GB601配制。5.1.1.3仪器和设备
分光光度计；
恒溢水浴50℃～100℃精度土0.1℃，试管25mm×200mm；
容量瓶，
自动吸管，
秒表。
5.1.1.4待测酶液的制备
a）液体酶制剂：直接用缓冲液（5.1.1.2d)配制，使最终酶液浓度控制在65~70u/mL范围内。b）固体酶制剂：称取酶粉1~2g，精确至0.0002g，先用少量磷酸缓冲液溶解，并用玻璃搅棒捣研（或用磁力搅拌器搅拌），直至固体全部溶解（约10一15mm），将上清液小心倾人容量瓶中，流渣部分群加人少量缓冲液，如此捣研3～4次，最后全部移人容量瓶中，用缓冲液稀释至刻度（使酶浓度控制在65~70u/mL范圖内），摇勾。通过四层纱布过滤，收集滤液供测定用。5.1. 1.5测定
a）吸取可溶性淀粉溶液（5.1.1.2c)20.OrmL和缓冲液（5.1.1.2.4)5.OmL于试管中，在70C恒温水浴中预热平衡5min。
b）加人稀释好的待测酶液（5.1.1.4)1.00mL，立即用秒表记录时间，播匀，准确反应5min。c）立即用自动吸管吸取反应液b）1.00ml，加到预先盛有0.1mol/L盐酸0.5ml和稀碘液（5.1.1.2b)5.00mL的试管中，摇匀。
d）以0.1mol/L盐酸0.5mL和稀碘液5.00mL的混合液作试剂空白，于660nrm波长下，用10mm比色血迅速测定其吸光度（A）。根据吸光度查附录A（标准的附录），求得测试酶液的浓度（c）。5.1.1.6计算
X=mcXnX16.67
注：1）采用渐江菱湖食品化工联合公司生产的、标有“专供翻制剂测定，用的字样和批号的“容性淀粉”。100
（1）
式中：X-
QB/T 2306--1997
一样品的酶活力，u/ml（u/g）；测试酶的浓度，u/mL
n样品的稀释倍数；
16.67——换算常数。
所得结果表示至整数。
5.1.1.7结果的允许差
平行试验相对误差不得超过2%。5.1.2目视比色法（第二法）
5.1.2.1原理
同5.1.1.1。
5.1.2.2试剂和溶液
a）原碘液同5.1.1.2a。
b）稀碘液同5.1.1.2b。
c）20g/L可溶性淀粉溶液同5.1.1.2c。d）磷酸缓冲液（pH=6.0）同5.1.1.2d。e）标准终点色溶液：
A液：称取氯化钻（CoClz·6HzO)0.2439g和重铬酸钾0.4878g，用水溶解定容至500mL。B液：称取铬黑T(C,OHz2N,N·O,S)40mg，用水溶解并定容至100mL。C液（标准终点色溶液：取A液40mL与B液5.0mL充分混匀，备用。此混合液于冰箱中保存，15天后需要重新配制。
5.1.2.3仪器和设备
植温水浴50~100℃
精度士0.1℃，
容量瓶，
试管 25mmX200mm;
秒表。
5.1.2.4分析步骤
待测酶液的制备：按5.1.1.4进行制备，但最终翻液浓度微控制在300~350u/mL范翻内。吸取标准终点色溶液6mL于试管中，作为比色标准。吸取20g/L可溶性凝粉溶液20mL和pH6.0的磷酸缓冲溶液5mL置于25mmX200mm试管中，在70C恒温水浴中预热平衡5mim，然后加入预先稀释好的酶液0.5mL，立即用秒表记录时间，充分摇匀，当反应接近2min时，就开始不时地用吸管取出反应液1.00mL，加到预先有稀碘获（5.1.1.2b）5.00m的试管中，当试管中反腔溶液颜色由紫色渐变为红棕色、给与标准终点色溶液相同时，即为反应终点，并记录到达终点所需时间（分钟）。酶反应全部时间控制在2~2.5min之内。5.1.2.5计算
±×20×20/1000Xn）-0.5×10*..式中：X样品的酶活力，u/mL（u/g）;T到达反应终点所需时间,mir.
20—罚溶性淀粉溶液体积，mL;
20/1000-
可溶性淀粉溶液浓度，g/mL；
1--样品稀释倍数；
103——1g等于10°mg;
0.5-测定酶液用量，mlL。
5.2酶活力保存率的测定
QB/T 2306 --- 1997
按QB/T1803中第11章方法进行。5.3酶耐热性存活率的测定
5.3.1试剂和溶液
5.3.1.1氢氧化钠溶：c（NaOH)=0.1mol/L按GB601配制。5.3.1.2糊精溶液：称取糊精100g于烧杯中，加水300mL，搅匀，加耐高温α-淀粉酶1300单位（每克糊精加13单位），置于电炉上加热至沸，玲却，用0.1mo1/L氢氧化钠溶液调pH6.07.0，然后移人500ml容量瓶中，用水稀释至刻线，摇匀，备用。5.3.2仪器和设备
酸度计，
恒温水浴50~~100℃
精度土0.1℃;
电炉1000W；
精密溢度计分度值0.1C；
分光光度计；
比色管50ml.
秒表。
5.3.3分析步骤
5.3.3.1待测酵液的制备
在制备待测酶液时，用糊精溶液（5.3.1.2)代替缓冲液（5.1.1.2d)来制备，其最终酶液浓度控制范圈同5.1.1.4（或5.1.2.4)。
5.3.3.2热处理
吸取25mL待测酶液于50mL比色管中，置于95C恒温水浴中热处理60min，冷却，用水补足至原酶液体积，摇匀。
5.3.3.3测定酶活力
用与5.3.3.1相对应的5.1.1（或5.1.2）法进行。5.3.3.4耐热性存活率的计算
式中：X样品耐热性存活率，%；E,样品热处理后实测的酶活力，u/mL(u/g)E-样品热处理前实测的酶活力，u/mL（u/g）。所得结果表示至整数。
5.4PH值的测定
按QB/T1803中pH值的测定方法进行。5.5干燥失重的测定
按QB/T1803中干煤失重的测定方法进行。5.6容重的测定
按QB/T1803中容重的测定方法进行。5.7细度的测定
按QB/T1803中细（粒）度的测定方法进行。5.8重金属的测定
按G8451方法进行。
（3）
5.9铅的测定
QB/T 2306-1997
按GB/T5009.12中的双硫腺单色法或原子吸收光光度法进行。样品处理采用硝酸-硫酸法。5.10的测定免费标准bzxz.net
按GB/T5009.11中的银盐法进行。样品处理采用硝酸硫酸法。5.11菌落总数的测定
按GB4789.2方法进行。
5.12大肠菌群的测定
按GB4789.3方法进行。
5.13沙门氏菌的检验
按GB4789.4方法进行。
5.14体菌和酵母菌的测定
按GB4789.15方法进行。
6检验规则
按QB/T1840中第2章执行。
标志、包装、运输、更存
按QB/T1840中第3章执行。
吸光度（A）
QB/T2306-1997
附录A
（标准的附录）
表 A1吸光度与测试 α-淀粉酶酶浓度对照表酶浓度(c)
吸光度（A）
酶浓度(c)
吸光度(A）
酶浓度(c)）
吸光度（A）
酶浓度(c)
QB/T 2306—1997
续表A1
吸光度(A)
酶浓度(c）
吸光度(A)
酸浓度（c)
吸光度(A)
麟浓度（c）
QB/T 2306 --- 1997
续表A1
极光度(A)
酶浓度(e)
光度(A)
酶浓度（e）
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