GB/T 39100-2020
基本信息
标准号： GB/T 39100-2020
中文名称：多肽抗氧化性测定 DPPH和ABTS法
标准类别：国家标准(GB)
英文名称：Determination of antioxidant activity for polypeptides—DPPH and ABTS methods
标准状态：现行
发布日期：2020-09-29
实施日期：2021-04-01
出版语种：简体中文
下载格式：.zip .pdf
下载大小：423799
标准分类号
标准ICS号： 数学、自然科学>>07.080生物学、植物学、动物学
中标分类号：综合>>基础学科>>A40基础学科综合
关联标准
出版信息
出版社：中国标准出版社
页数：12页
标准价格：29.0
出版日期：2020-09-01
相关单位信息
起草人：王志新、田益玲、贾英民、马爱进、郝帅、彭海、刘文秋、杨志坚、郑刚、姜雨、邹明强、孙宇、齐小花
起草单位：河北科技大学、河北农业大学、北京工商大学、华测检测认证集团股份有限公司、北京萨姆伯科技有限公司、武汉明了生物科技有限公司、浙江东杰生物科技有限责任公司、市场监督管理总局食品审评中心、中国检验检疫科学研究院
归口单位：全国生化检测标准化技术委员会(SAC/TC 387)
提出单位：全国生化检测标准化技术委员会(SAC/TC 387)
发布部门：国家市场监督管理总局 国家标准化管理委员会
标准简介
GB/T 39100-2020.Determination of antioxidant activity for polypeptides-DPPH and ABTS methods.
1范围
GB/T 39100规定了DPPH和ABTS法测定多肽抗氧化性能的方法。
GB/T 39100适用于多肽体外抗氧化性能的测定。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法
3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
3.1
多肽 polypeptides
介于氨基酸和蛋白质之间,由2个或2个以上氨基酸通过肽键连接形成的一类化合物。
3.2
抗氧化能力 antioxidant activity
清除自由基的能力,以待测多肽半数清除量与谷胱甘肽半数清除量的比值(AO值)来表示。
5试剂或材料
除非另有说明,本方法所用的试剂均为分析纯,试验用水为GB/T 6682规定的一级水。
5.1
谷胱甘肽
L-还原型,纯度≥98 %。
5.2过硫酸 钾
分析纯。
5.3二甲基亚砜
分析纯。
5.4 DPPH溶液
称取DPPH 5.0 mg,适量无水乙醇溶解，避光超声使其充分溶解,再用无水乙醇定容至100.0 mL,配制成50.0μg/mL的DPPH溶液。该溶液应现配现用。
5.5 ABTS 溶液
称取ABTS 200.0 mg,过硫酸钾34.4 mg,溶于50.0 mL蒸馏水,摇匀,室温避光放置24 h后,作为ABTS母液。取适量ABTS母液,用95%乙醇稀释至吸光度值在0.70士0.02内(OD734),作为ABTS测定溶液,该溶液应现配现用。
注:可以根据分光光度计的灵敏度配制合适浓度的ABTS测定溶液。
本标准规定了DPPH和ABTS法测定多肽抗氧化性能的方法。 本标准适用于多肽体外抗氧化性能的测定。
1范围
GB/T 39100规定了DPPH和ABTS法测定多肽抗氧化性能的方法。
GB/T 39100适用于多肽体外抗氧化性能的测定。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法
3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
3.1
多肽 polypeptides
介于氨基酸和蛋白质之间,由2个或2个以上氨基酸通过肽键连接形成的一类化合物。
3.2
抗氧化能力 antioxidant activity
清除自由基的能力,以待测多肽半数清除量与谷胱甘肽半数清除量的比值(AO值)来表示。
5试剂或材料
除非另有说明,本方法所用的试剂均为分析纯,试验用水为GB/T 6682规定的一级水。
5.1
谷胱甘肽
L-还原型,纯度≥98 %。
5.2过硫酸 钾
分析纯。
5.3二甲基亚砜
分析纯。
5.4 DPPH溶液
称取DPPH 5.0 mg,适量无水乙醇溶解，避光超声使其充分溶解,再用无水乙醇定容至100.0 mL,配制成50.0μg/mL的DPPH溶液。该溶液应现配现用。
5.5 ABTS 溶液
称取ABTS 200.0 mg,过硫酸钾34.4 mg,溶于50.0 mL蒸馏水,摇匀,室温避光放置24 h后,作为ABTS母液。取适量ABTS母液,用95%乙醇稀释至吸光度值在0.70士0.02内(OD734),作为ABTS测定溶液,该溶液应现配现用。
注:可以根据分光光度计的灵敏度配制合适浓度的ABTS测定溶液。
本标准规定了DPPH和ABTS法测定多肽抗氧化性能的方法。 本标准适用于多肽体外抗氧化性能的测定。
标准图片预览
标准内容
ICS07.080
中华人民共和国国家标准
GB/T39100—2020
多肽抗氧化性测定
DPPH 和 ABTS 法
Determination of antioxidant activity for polypeptides-DPPH and ABTS methods
2020-09-29发布
国家市场监督管理总局
国家标准化管理委员会
2021-04-01实施
本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草本标准由全国生化检测标准化技术委员会（SAC/TC387)提出并归口。GB/T39100—2020
本标准起草单位：河北科技大学、河北农业大学、北京工商大学、华测检测认证集团股份有限公司、北京萨姆伯科技有限公司、武汉明了生物科技有限公司、浙江东杰牛物科技有限责任公司、市场监督管理总局食品审评中心、中国检验检疫科学研究院。本标准主要起草人：干志新、田益玲、贾英民、马爱进、郝帅、彭海、刘文秋、杨志坚、郑刚、姜雨、邹明强、孙宇、齐小花。
1范围
多肽抗氧化性测定
DPPH和ABTS法
本标准规定了DPPH和ABTS法测定多肽抗氧化性能的方法。本标准适用干多肽体外抗氧化性能的测定。规范性引用文件
GB/T39100—2020
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单)适用干本文件。分析实验室用水规格和试验方法GB/T6682
术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。3.1
多肽polypeptides
介于氨基酸和蛋白质之间，由2个或2个以上氨基酸通过肽键连接形成的一类化合物。3.2
抗氧化能力
antioxidant activity
清除自由基的能力，以待测多肽半数清除量与谷胱甘肽半数清除量的比值(AO值)来表示。4
缩略语
下列缩略语适用干本文件。
ABTS：2，2-联氮-二（3-乙基-苯并唑-6-磺酸）二铵盐［2，2'-azino-bis（3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonicacid)diammonium salt]AO：抗氧化能力（antioxidantactivity）DPPH:1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl）DMSO：二甲基亚矾（dimethylsulfoxide）ECso：半数清除量（halfmaximaleffectiveconcentration）5
试剂或材料
除非另有说明，本方法所用的试剂均为分析纯，试验用水为GB/T6682规定的一级水。5.1
谷胱甘肽
L-还原型，纯度≥98%。
GB/T39100—2020
2过硫酸钾
分析纯。
3二甲基亚砜
分析纯。
DPPH溶液
称取DPPH5.0mg，适量无水乙醇溶解，避光超声使其充分溶解，再用无水乙醇定容至100.0mL，配制成50.0μg/mL的DPPH溶液。该溶液应现配现用。5ABTS溶液
称取ABTS200.0mg，过硫酸钾34.4mg，溶于50.0mL蒸馏水，摇匀，室温避光放置24h后，作为ABTS母液。取适量ABTS母液，用95%乙醇稀释至吸光度值在0.70士0.02内（OD734），作为ABTS测定溶液，该溶液应现配现用。
注：可以根据分光光度计的灵敏度配制合适浓度的ABTS测定溶液6仪器设备
分光光度计：波长范围为400nm800nm，吸光度值精确至0.001。2电子天平：感量为0.0001g。
DPPH·自由基清除法
7.1原理
DPPH是一种暗紫色棱柱状结晶，在无水乙醇溶液中呈深紫色，DPPH·自由基在可见光区517nm处具有较强吸收峰。该方法通过DPPH提供的1个稳定的DPPH·自由基与抗氧化性多肽提供的1个申子配对结合，使DPPH·自由基的特征性紫色消失，变为无色或浅黄色，采用紫外可见分光光度计测定反应后的吸光度。通过与谷胱甘肽的清除能力进行比较，采用相对半数清除量来判定多肽的抗氧化能力AO值。
试验步骤
7.2.1样品制备
7.2.1.1待测样品溶液
称取多肽样品10.0mg，水溶性好的样品采用蒸馏水溶解与定容，水溶性差的样品先溶干DMSO再用蒸馏水定容，定容至1.0mL，充分混合均匀，配制成10.0mg/mL的母液。用蒸馏水将母液稀释至不同倍数，得到不同浓度的待测样品溶液。待测样品溶液浓度的选择应使其清除率在35%～65%，且线性方程的R2≥0.9500。
7.2.1.2谷胱甘肽溶液
称取L-还原型谷胱甘肽10.0mg，蒸馏水定容至1.0mL，充分混合均匀，配制成10.0mg/mL的母液。用蒸馏水将母液稀释至不同倍数，得到不同浓度的谷胱甘肽溶液。谷胱甘肽溶液浓度的选择应使2
其清除率在35%～65%，且线性方程的R2≥0.9500。7.2.2测定
对照组
取3支试管，分别编号为1、2、3号，每支试管中按照表1的组合添加试剂。表1试剂添加量
溶液名称
DPPH溶液
谷胱甘肽溶液
样品溶剂溶液
无水乙醇溶液
1号（A）
2号（A）
GB/T39100—2020
3号（A）
在1号试管中加人3.0mLDPPH溶液和1.0mL谷胱甘肽溶液，作为试验组（A）；在2号试管中加人1.0mL谷胱甘肽溶液和3.0mL无水乙醇溶液，作为对照组（A）；在3号试管中加入3.0mLDPPH溶液和1.0mL样品溶剂溶液，作为空白组（A，）。分别充分混合均勾后，室温避光反应30min，于波长517nm条件下，用紫外分光光度计测定其吸光度值（样品溶剂调零校准）。7.2.2.2样品组
用待测样品溶液代替谷胱甘肽溶液，其他操作同7.2.2.1。7.2.3试验数据处理
按式(1)计算：
式中：
——清除率；
1_A, -A
A。——待测溶液与DPPH溶液混合液的吸光度；A。——待测溶液与无水乙醇溶液混合液的吸光度；X100%
A.———DPPH溶液与样品溶剂溶液混合液的吸光度.（1)
以待测溶液浓度的自然对数值为横坐标.以清除率为纵坐标，建立待测溶液浓度自然对数值与清除率的线性方程（R≥0.9500），计算半数清除量ECs0，按式（2)计算多肽样品的抗氧化能力AO值。AO
式中：
ECso（S）
ECsa（R）
抗氧化能力
ECso(S)
ECso(R)
多肽样品的半数清除量，单位为毫克每升（mg/L)；谷胱甘肽的半数清除量，单位为毫克每升（mg/L）。计算结果以平行测定值的算术平均值表示，保留三位有效数字。8
ABTS+自由基清除法
8.1原理
.（2）
ABTS经氧化后生成较稳定的蓝绿色ABTS+自由基，在可见光区734nm处有最大吸收峰，抗氧3
GB/T39100—2020
化性多肽与ABTS+自由基反应后使其褪色，在734nm处的吸光值降低，采用紫外可见分光光度计测定反应后的吸光度。通过与谷胱甘肽的清除能力进行比较，采用相对半数清除量来判定多肽的抗氧化能力AO值。
8.2试验步骤
样品制备
8.2.1.1待测样品溶液
称取多肽样品10.0mg，水溶性好的样品采用蒸馏水溶解与定容，水溶性差的样品先溶于DMSO再用蒸馏水定容，定容至1.0mL，充分混合均匀，配制成10.0mg/mL的母液。用95%乙醇将母液稀释至不同倍数，得到不同浓度的待测定溶液。待测样品溶液浓度的选择应使其清除率在35%～65%，且线性方程的R≥0.9500。
8.2.1.2谷胱甘肽溶液
称取L-还原型谷胱甘肽10.0mg，蒸馏水定容至1.0mL，充分混合均勾，配制成10.0mg/mL的母液。用95%乙醇将母液稀释至不同倍数，得到不同浓度的测定溶液。谷胱甘肽溶液浓度的选择应使其清除率在35%～65%，月线性方程的R2≥0.9500。8.2.2测定
8.2.2.1对照组
取2支试管，分别编号为1、2号，每支试管中按照表2的组合添加试剂。表2试剂添加量
溶液名称
ABTS溶液
谷胱甘肽溶液
样品溶剂溶液
1号（A，）
2号（Ah）
在1号试管中加人3.6mLABTS溶液和0.4mL谷胱甘肽溶液，作为试验组（A）；在2号试管中加人3.6mLABTS溶液和0.4mL样品溶剂溶液，作为空白组（A）；分别充分混合均匀后，室温避光反应5min，于波长734nm条件下，用紫外分光光度计测定其吸光度值（样品溶剂调零校准）。8.2.2.2样品组
用待测样品溶液代替谷胱甘肽溶液，其他操作同8.2.2.1。8.2.3试验数据处理bzxZ.net
按式(3)计算：
式中：
——清除率；
×100%
A——ABTS溶液与样品溶剂溶液混合液的吸光度；a
.（3)
A，一—待测溶液与ABTS溶液混合液的吸光度。GB/T39100—2020
以待测溶液浓度的自然对数值为横坐标，以清除率为纵坐标，建立待测溶液浓度自然对数值与清除率的线性方程（R2≥0.9500），计算半数清除量EC50，按7.2.3中的式（2)计算多肽样品的抗氧化能力AO值。计算结果以平行测定值的算术平均值表示，保留三位有效数字。重复性
在重复性条件下获得的不低于3次独立.测定结果的绝对差值不超过算术平均值的20%。5
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中华人民共和国国家标准
GB/T39100—2020
多肽抗氧化性测定
DPPH 和 ABTS 法
Determination of antioxidant activity for polypeptides-DPPH and ABTS methods
2020-09-29发布
国家市场监督管理总局
国家标准化管理委员会
2021-04-01实施
本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草本标准由全国生化检测标准化技术委员会（SAC/TC387)提出并归口。GB/T39100—2020
本标准起草单位：河北科技大学、河北农业大学、北京工商大学、华测检测认证集团股份有限公司、北京萨姆伯科技有限公司、武汉明了生物科技有限公司、浙江东杰牛物科技有限责任公司、市场监督管理总局食品审评中心、中国检验检疫科学研究院。本标准主要起草人：干志新、田益玲、贾英民、马爱进、郝帅、彭海、刘文秋、杨志坚、郑刚、姜雨、邹明强、孙宇、齐小花。
1范围
多肽抗氧化性测定
DPPH和ABTS法
本标准规定了DPPH和ABTS法测定多肽抗氧化性能的方法。本标准适用干多肽体外抗氧化性能的测定。规范性引用文件
GB/T39100—2020
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单)适用干本文件。分析实验室用水规格和试验方法GB/T6682
术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。3.1
多肽polypeptides
介于氨基酸和蛋白质之间，由2个或2个以上氨基酸通过肽键连接形成的一类化合物。3.2
抗氧化能力
antioxidant activity
清除自由基的能力，以待测多肽半数清除量与谷胱甘肽半数清除量的比值(AO值)来表示。4
缩略语
下列缩略语适用干本文件。
ABTS：2，2-联氮-二（3-乙基-苯并唑-6-磺酸）二铵盐［2，2'-azino-bis（3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonicacid)diammonium salt]AO：抗氧化能力（antioxidantactivity）DPPH:1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl）DMSO：二甲基亚矾（dimethylsulfoxide）ECso：半数清除量（halfmaximaleffectiveconcentration）5
试剂或材料
除非另有说明，本方法所用的试剂均为分析纯，试验用水为GB/T6682规定的一级水。5.1
谷胱甘肽
L-还原型，纯度≥98%。
GB/T39100—2020
2过硫酸钾
分析纯。
3二甲基亚砜
分析纯。
DPPH溶液
称取DPPH5.0mg，适量无水乙醇溶解，避光超声使其充分溶解，再用无水乙醇定容至100.0mL，配制成50.0μg/mL的DPPH溶液。该溶液应现配现用。5ABTS溶液
称取ABTS200.0mg，过硫酸钾34.4mg，溶于50.0mL蒸馏水，摇匀，室温避光放置24h后，作为ABTS母液。取适量ABTS母液，用95%乙醇稀释至吸光度值在0.70士0.02内（OD734），作为ABTS测定溶液，该溶液应现配现用。
注：可以根据分光光度计的灵敏度配制合适浓度的ABTS测定溶液6仪器设备
分光光度计：波长范围为400nm800nm，吸光度值精确至0.001。2电子天平：感量为0.0001g。
DPPH·自由基清除法
7.1原理
DPPH是一种暗紫色棱柱状结晶，在无水乙醇溶液中呈深紫色，DPPH·自由基在可见光区517nm处具有较强吸收峰。该方法通过DPPH提供的1个稳定的DPPH·自由基与抗氧化性多肽提供的1个申子配对结合，使DPPH·自由基的特征性紫色消失，变为无色或浅黄色，采用紫外可见分光光度计测定反应后的吸光度。通过与谷胱甘肽的清除能力进行比较，采用相对半数清除量来判定多肽的抗氧化能力AO值。
试验步骤
7.2.1样品制备
7.2.1.1待测样品溶液
称取多肽样品10.0mg，水溶性好的样品采用蒸馏水溶解与定容，水溶性差的样品先溶干DMSO再用蒸馏水定容，定容至1.0mL，充分混合均匀，配制成10.0mg/mL的母液。用蒸馏水将母液稀释至不同倍数，得到不同浓度的待测样品溶液。待测样品溶液浓度的选择应使其清除率在35%～65%，且线性方程的R2≥0.9500。
7.2.1.2谷胱甘肽溶液
称取L-还原型谷胱甘肽10.0mg，蒸馏水定容至1.0mL，充分混合均匀，配制成10.0mg/mL的母液。用蒸馏水将母液稀释至不同倍数，得到不同浓度的谷胱甘肽溶液。谷胱甘肽溶液浓度的选择应使2
其清除率在35%～65%，且线性方程的R2≥0.9500。7.2.2测定
对照组
取3支试管，分别编号为1、2、3号，每支试管中按照表1的组合添加试剂。表1试剂添加量
溶液名称
DPPH溶液
谷胱甘肽溶液
样品溶剂溶液
无水乙醇溶液
1号（A）
2号（A）
GB/T39100—2020
3号（A）
在1号试管中加人3.0mLDPPH溶液和1.0mL谷胱甘肽溶液，作为试验组（A）；在2号试管中加人1.0mL谷胱甘肽溶液和3.0mL无水乙醇溶液，作为对照组（A）；在3号试管中加入3.0mLDPPH溶液和1.0mL样品溶剂溶液，作为空白组（A，）。分别充分混合均勾后，室温避光反应30min，于波长517nm条件下，用紫外分光光度计测定其吸光度值（样品溶剂调零校准）。7.2.2.2样品组
用待测样品溶液代替谷胱甘肽溶液，其他操作同7.2.2.1。7.2.3试验数据处理
按式(1)计算：
式中：
——清除率；
1_A, -A
A。——待测溶液与DPPH溶液混合液的吸光度；A。——待测溶液与无水乙醇溶液混合液的吸光度；X100%
A.———DPPH溶液与样品溶剂溶液混合液的吸光度.（1)
以待测溶液浓度的自然对数值为横坐标.以清除率为纵坐标，建立待测溶液浓度自然对数值与清除率的线性方程（R≥0.9500），计算半数清除量ECs0，按式（2)计算多肽样品的抗氧化能力AO值。AO
式中：
ECso（S）
ECsa（R）
抗氧化能力
ECso(S)
ECso(R)
多肽样品的半数清除量，单位为毫克每升（mg/L)；谷胱甘肽的半数清除量，单位为毫克每升（mg/L）。计算结果以平行测定值的算术平均值表示，保留三位有效数字。8
ABTS+自由基清除法
8.1原理
.（2）
ABTS经氧化后生成较稳定的蓝绿色ABTS+自由基，在可见光区734nm处有最大吸收峰，抗氧3
GB/T39100—2020
化性多肽与ABTS+自由基反应后使其褪色，在734nm处的吸光值降低，采用紫外可见分光光度计测定反应后的吸光度。通过与谷胱甘肽的清除能力进行比较，采用相对半数清除量来判定多肽的抗氧化能力AO值。
8.2试验步骤
样品制备
8.2.1.1待测样品溶液
称取多肽样品10.0mg，水溶性好的样品采用蒸馏水溶解与定容，水溶性差的样品先溶于DMSO再用蒸馏水定容，定容至1.0mL，充分混合均匀，配制成10.0mg/mL的母液。用95%乙醇将母液稀释至不同倍数，得到不同浓度的待测定溶液。待测样品溶液浓度的选择应使其清除率在35%～65%，且线性方程的R≥0.9500。
8.2.1.2谷胱甘肽溶液
称取L-还原型谷胱甘肽10.0mg，蒸馏水定容至1.0mL，充分混合均勾，配制成10.0mg/mL的母液。用95%乙醇将母液稀释至不同倍数，得到不同浓度的测定溶液。谷胱甘肽溶液浓度的选择应使其清除率在35%～65%，月线性方程的R2≥0.9500。8.2.2测定
8.2.2.1对照组
取2支试管，分别编号为1、2号，每支试管中按照表2的组合添加试剂。表2试剂添加量
溶液名称
ABTS溶液
谷胱甘肽溶液
样品溶剂溶液
1号（A，）
2号（Ah）
在1号试管中加人3.6mLABTS溶液和0.4mL谷胱甘肽溶液，作为试验组（A）；在2号试管中加人3.6mLABTS溶液和0.4mL样品溶剂溶液，作为空白组（A）；分别充分混合均匀后，室温避光反应5min，于波长734nm条件下，用紫外分光光度计测定其吸光度值（样品溶剂调零校准）。8.2.2.2样品组
用待测样品溶液代替谷胱甘肽溶液，其他操作同8.2.2.1。8.2.3试验数据处理bzxZ.net
按式(3)计算：
式中：
——清除率；
×100%
A——ABTS溶液与样品溶剂溶液混合液的吸光度；a
.（3)
A，一—待测溶液与ABTS溶液混合液的吸光度。GB/T39100—2020
以待测溶液浓度的自然对数值为横坐标，以清除率为纵坐标，建立待测溶液浓度自然对数值与清除率的线性方程（R2≥0.9500），计算半数清除量EC50，按7.2.3中的式（2)计算多肽样品的抗氧化能力AO值。计算结果以平行测定值的算术平均值表示，保留三位有效数字。重复性
在重复性条件下获得的不低于3次独立.测定结果的绝对差值不超过算术平均值的20%。5
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