GB/T 39100—2020 多肽抗氧化性测定 DPPH 和 ABTS 法 Determination of antioxidant activity for polypeptides—DPPH and ABTS methods 2020-09-29发布 国家市场监督管理总局 国家标准化管理委员会 2021-04-01实施 前言 本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。本标准由全国生化检测标准化技术委员会（SAC/TC387）提出并归口。 本标准起草单位：河北科技大学、河北农业大学、北京工商大学、华测检测认证集团股份有限公司、北京萨姆伯科技有限公司、武汉明了生物科技有限公司、浙江东杰牛物科技有限责任公司、市场监督管理总局食品审评中心、中国检验检疫科学研究院。 本标准主要起草人：干志新、田益玲、贾英民、马爱进、郝帅、彭海、刘文秋、杨志坚、郑刚、姜雨、邹明强、孙宇、齐小花。 1 范围 本标准规定了DPPH和ABTS法测定多肽抗氧化性能的方法。本标准适用于多肽体外抗氧化性能的测定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 6682 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 多肽 polypeptides 介于氨基酸和蛋白质之间，由2个或2个以上氨基酸通过肽键连接形成的一类化合物。 3.2 抗氧化能力 antioxidant activity 清除自由基的能力，以待测多肽半数清除量与谷胱甘肽半数清除量的比值（AO值）来表示。 4 缩略语 下列缩略语适用于本文件。 ABTS：2,2-联氮-二（3-乙基-苯并唑-6-磺酸）二铵盐 [2,2'-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid) diammonium salt] AO：抗氧化能力 (antioxidant activity) DPPH：1,1-二苯基-2-三硝基苯肼 (1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl) DMSO：二甲基亚砜 (dimethyl sulfoxide) EC50：半数清除量 (half maximal effective concentration) 5 试剂或材料 除非另有说明，本方法所用的试剂均为分析纯，试验用水为GB/T 6682规定的一级水。 5.1 谷胱甘肽：L-还原型，纯度≥98%。 5.2 过硫酸钾：分析纯。 5.3 二甲基亚砜：分析纯。 5.4 DPPH溶液：称取DPPH 5.0 mg，适量无水乙醇溶解，避光超声使其充分溶解，再用无水乙醇定容至100.0 mL，配制成50.0 μg/mL的DPPH溶液。该溶液应现配现用。 5.5 ABTS溶液：称取ABTS 200.0 mg，过硫酸钾 34.4 mg，溶于50.0 mL蒸馏水，摇匀，室温避光放置24 h后，作为ABTS母液。取适量ABTS母液，用95%乙醇稀释至吸光度值在0.70±0.02内（OD734），作为ABTS测定溶液，该溶液应现配现用。 注：可以根据分光光度计的灵敏度配制合适浓度的ABTS测定溶液。 6 仪器设备 6.1 分光光度计：波长范围为400 nm~800 nm，吸光度值精确至0.001。 6.2 电子天平：感量为0.0001 g。 7 DPPH·自由基清除法 7.1 原理 DPPH是一种暗紫色棱柱状结晶，在无水乙醇溶液中呈深紫色，DPPH·自由基在可见光区517 nm处具有较强吸收峰。该方法通过DPPH提供的1个稳定的DPPH·自由基与抗氧化性多肽提供的1个电子配对结合，使DPPH·自由基的特征性紫色消失，变为无色或浅黄色，采用紫外可见分光光度计测定反应后的吸光度。通过与谷胱甘肽的清除能力进行比较，采用相对半数清除量来判定多肽的抗氧化能力AO值。 7.2 试验步骤 7.2.1 样品制备 7.2.1.1 待测样品溶液 称取多肽样品10.0 mg，水溶性好的样品采用蒸馏水溶解与定容，水溶性差的样品先溶于DMSO再用蒸馏水定容，定容至1.0 mL，充分混合均匀，配制成10.0 mg/mL的母液。用蒸馏水将母液稀释至不同倍数，得到不同浓度的待测样品溶液。待测样品溶液浓度的选择应使其清除率在35%~65%，且线性方程的R²≥0.9500。 7.2.1.2 谷胱甘肽溶液 称取L-还原型谷胱甘肽...